《動物細胞融合和單克隆抗體》復習

動物細胞融合和單克隆抗體1.動物細胞融合（1）概念：指兩個或多個動物細胞結合形成的過程。（2）融合方法：

、

、電激等。（3）意義：突破了

的局限，使成為可能，也為制造

開辟了新途徑。一個細胞聚乙二醇（PEG）滅活的病毒有性雜交方法遠緣雜交單克隆抗體知識梳理2.單克隆抗體的制備過程單克隆抗體的特點：

、

。特異性強靈敏度高雜交瘤細胞單克隆抗體植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞膜的流動性、植物細胞的全能性細胞膜的流動性細胞融合方法用纖維素酶、果膠酶去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散后，誘導細胞融合誘導手段離心、電刺激、振動、顯微操作、聚乙二醇等誘導與植物體細胞雜交相比，還可用滅活的病毒誘導結果獲得雜種植株獲得雜種細胞，以生產(chǎn)細胞產(chǎn)品重難點解析用途克服遠緣雜交不親和的障礙，擴展雜交親本范圍，培育新品種制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等相同點①兩者在融合過程中都會發(fā)生多種融合方式，如A—A，B—B，A—B，因此要進行篩選；②兩者都要用到細胞融合和細胞培養(yǎng)兩種技術手段2.單克隆抗體制備過程中兩次篩選的目的及方法（1）在特定的選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞（B淋巴細胞和骨髓瘤細胞）和融合的具有同種核的細胞（BB融合細胞、瘤瘤融合細胞）都會死亡，只有融合的雜種細胞（雜交瘤細胞）才能生長。這種雜種細胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生單一的特異性抗體。（2）經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞（很多種雜交瘤細胞），需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選后可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。【特別提醒】

（1）植物體細胞雜交與動物細胞融合需注意的問題①植物體細胞雜交與動物細胞融合中酶的作用對象不同，纖維素酶和果膠酶作用于細胞壁，而胰蛋白酶等作用于細胞間質(zhì)。②植物雜交細胞在激素誘導下能表達出全能性，但動物雜交細胞的全能性不能表達。（2）單克隆抗體制備過程中需注意的幾個問題①滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結構。②除了受到注射的抗原的刺激，小鼠在生活過程中還可能受到其他抗原的刺激，因此從小鼠體內(nèi)取出的多個B淋巴細胞可能產(chǎn)生多種不同抗體，所以進行第二次篩選是非常必要的。③單克隆抗體制備過程中，進行了多次動物細胞培養(yǎng)的操作，說明動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎。★單克隆抗體的制備在近幾年新課標高考中考查熱點，每年都有所涉及，一般起點較高，而落點較低?？键c展望［真題回顧］判斷單克隆抗體制備的正誤：（1）動物雜交瘤細胞產(chǎn)生單克隆抗體能體現(xiàn)細胞全能性（2012·江蘇卷T22C）

（×）（2）體細胞雜交技術可用于克隆動物和制備單克隆抗體（2011·江蘇卷T14）

（×）（3）B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中含有B淋巴細胞中的抗體基因（2010·全國卷ⅡT5A）

（√）（4）雜交瘤技術可用于制備單克隆抗體（2010·廣東卷T24B）

（√）［考點分向］考向一植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較1.（2014·浙江四校調(diào)研）植物體細胞雜交與動物細胞工程中所用技術與原理不相符的是（）A.纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理——酶的專一性B.植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)——細胞的全能性C.原生質(zhì)體融合和動物細胞融合——生物膜的流動性D.紫草細胞培養(yǎng)和雜交瘤細胞的培養(yǎng)——細胞分裂【解析】

植物組織培養(yǎng)的原理是細胞的全能性，而動物細胞培養(yǎng)的原理是細胞的增殖?！敬鸢浮?/p>

B2.無論是植物細胞，還是動物細胞，都可以利用一定的方法誘導融合，可用模型圖表示細胞融合技術的一些過程，有關敘述錯誤的是（）A.若該過程表示植物原生質(zhì)體的融合，則甲、乙細胞可用酶解法獲取B.若該過程表示體外受精，則甲、乙細胞都需要經(jīng)過準備階段C.若該過程表示制備單克隆抗體，則丙細胞是雜交瘤細胞D.以上三個過程可以用同一種誘導劑誘導融合【解析】

若圖示過程表示植物原生質(zhì)體的融合，在形成甲、乙細胞之前需用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，可用聚乙二醇（PEG）誘導細胞融合；若圖示過程表示體外受精，則甲、乙細胞應代表精子與卵細胞，其中精子需要獲能處理，卵細胞需要培養(yǎng)成熟，兩者可在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫?；若圖示過程表示單克隆抗體的制備，則丙細胞是B細胞與骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞，可用聚乙二醇（PEG）或滅活的病毒誘導細胞融合；可見，以上三個過程不能用同一種誘導劑誘導融合?！敬鸢浮?/p>

D考向二單克隆抗體的制備3.（2013·重慶理綜）下圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關敘述，正確的是（）A.①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應T淋巴細胞B.②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細胞的形成C.③同時具有脾臟細胞和鼠骨髓瘤細胞的特性D.④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細胞群【解析】

①是獲得已經(jīng)免疫的B細胞，A項錯誤；胰蛋白酶使得組織塊分散為單個細胞，B項錯誤；③同時具有B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的特性，C項錯誤；④經(jīng)篩選后獲得能夠分泌特異性抗體的雜交瘤細胞，D項正確。【答案】

D4.（2013·海南單科）單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）可引起水皰性口唇炎。利用雜交瘤技術制備出抗HSV-1的單克隆抗體可快速檢測HSV-1?；卮鹣铝袉栴}：（1）在制備抗HSV-1的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-1蛋白，一段時間后，若小鼠血清中抗

的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了

反應，再從小鼠的

中獲取B淋巴細胞。將該B淋巴細胞與小鼠的

細胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞，該細胞具有的特點是

。（2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細胞注射到小鼠的

中使其增殖，再從

中提取、純化獲得。（3）通過上述方法得到的單克隆抗體可準確地識別這種HSV-1蛋白，其原因是該抗體具有

和

等特性。【解析】

制備單克隆抗體時，需要先給小鼠注射特定抗原（HSV-1蛋白），當小鼠血清中抗HSV-1蛋白的抗體檢測呈陽性時，就可從小鼠脾臟中獲取B淋巴細胞，將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，經(jīng)過篩選和克隆化培養(yǎng)，最終獲得既能無限增殖又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞。（2）單克隆抗體的獲取有兩條途徑，是從體外細胞培養(yǎng)液中提純獲得，二是將雜交瘤細胞注