仿制藥生物等效性實(shí)驗(yàn)設(shè)計課件

仿制藥生物等效性試驗(yàn)設(shè)計崔一民北京大學(xué)第一醫(yī)院E-mail:cuiymzy@126.com仿制藥生物等效性試驗(yàn)設(shè)計崔一民生物等效性（BE）的概念

生物等效性試驗(yàn)是指用生物利用度研究的方法，以藥代動力學(xué)參數(shù)為指標(biāo)，比較同一種藥物的相同或者不同劑型的制劑，在相同的試驗(yàn)條件下，其活性成分吸收程度和速度有無統(tǒng)計學(xué)差異的人體試驗(yàn)。生物等效性試驗(yàn)在藥物研究開發(fā)的不同階段，其作用可能稍有差別，但究其根本，生物等效性試驗(yàn)的目的都是通過測定血藥濃度的方法，來比較不同的制劑對藥物吸收的影響，也即藥物不同制劑之間的差異，以此來推測其臨床治療效果差異的可接受性，即不同制劑之間的可替換性。生物等效性（BE）的概念生物等效BE研究適用范圍改變國內(nèi)已上市銷售藥品的劑型，但不改變給藥途徑的口服制劑或其他有關(guān)制劑（化學(xué)藥）。已有國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的制劑（化學(xué)藥）。改變口服藥物制劑處方或工藝的補(bǔ)充申請其他BE研究適用范圍改變國內(nèi)已上市銷售藥品的劑型，但不改變給藥途BE研究方法通常意義的BE研究是指通過測量不同時間點(diǎn)的生物樣本（如血漿或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時間曲線來反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動態(tài)過程。并經(jīng)過適當(dāng)?shù)挠嬎愕玫角€下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時間（Tmax）等參數(shù)后，通過統(tǒng)計學(xué)比較判斷兩制劑是否生物等效。

BE研究方法通常意義的BE研究是指通過測量不同時間點(diǎn)的生物樣生物樣本中藥物濃度測定建立生物樣本中藥物濃度定量分析方法是進(jìn)行生物等效性研究的關(guān)鍵之一。開始入選受試者前，應(yīng)建立可靠的和可重現(xiàn)的藥物濃度定量分析方法。生物樣本中藥物濃度測定建立生物樣本中藥物濃度定量分析方法是進(jìn)

方法學(xué)建立和考察的內(nèi)容特異性；標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍；定量下限；精密度與準(zhǔn)確度；樣品穩(wěn)定性；提取回收率。方法學(xué)建立和考察的內(nèi)容特異性；普通制劑隨機(jī)、交叉、單劑量、兩周期試驗(yàn)設(shè)計控、緩釋制劑隨機(jī)、交叉、單劑量和多劑量、兩周期試驗(yàn)設(shè)計生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計普通制劑生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計交叉設(shè)計是目前應(yīng)用最多最廣的方法。把受試對象隨機(jī)分為兩組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠長的間隔時間，為清洗期。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計交叉設(shè)計是目前應(yīng)用最多最廣的方法。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計為什么采用一般采用交叉設(shè)計？對每位受試者都連續(xù)接受兩次或多次的處理，相當(dāng)于自身對照，可以將制劑因素對藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開來，減少了不同試驗(yàn)周期和個體間差異對試驗(yàn)結(jié)果的影響。

生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計為什么采用一般采用交叉設(shè)計？可能出現(xiàn)的其它設(shè)計方案在進(jìn)行兩種以上劑型比較時，也可以進(jìn)行多周期試驗(yàn)設(shè)計。在試驗(yàn)藥物的半衰期過長時，可進(jìn)行平行試驗(yàn)設(shè)計。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計可能出現(xiàn)的其它設(shè)計方案生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計單劑量給藥交叉試驗(yàn)設(shè)計

給藥20天-7天1天3天

研究日

篩查

-1天入院

出院入院

14天給藥出院15天17天隨訪第一周期第二周期A組服試驗(yàn)藥物B組服對照藥物A組服對照藥物B組服試驗(yàn)藥物清洗期單劑量給藥交叉試驗(yàn)設(shè)計給藥20天-7天1天3天研究日單劑量給藥平行試驗(yàn)設(shè)計

給藥8天-7天1天研究日

篩查

-1天入院

出院隨訪PKA組服試驗(yàn)藥物B組服對照藥物單劑量給藥平行試驗(yàn)設(shè)計給藥8天-7天1天研究日篩查為什么要做血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)時的生物等效性比較？觀察制劑的控釋或緩釋特性是否一致。

生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計為什么要做血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)時的生物等效性比較？生物等效性臨床受試者的例數(shù)？

SFDA指導(dǎo)原則：18~24例根據(jù)統(tǒng)計學(xué)的把握度進(jìn)行計算對某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加例數(shù)生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計受試者的例數(shù)？生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如果試驗(yàn)藥物是前藥怎么辦？

原則上以原藥為基礎(chǔ)進(jìn)行等效性研究。在原藥代謝很快、藥代動力學(xué)參數(shù)變異大導(dǎo)致血液濃度測定困難或受試者數(shù)目過大時可以主要活性代謝產(chǎn)物為基礎(chǔ)進(jìn)行等效性研究。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如果試驗(yàn)藥物是前藥怎么辦？生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何確定參比藥物？原則上選擇國內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)上市相同劑型藥物中的原創(chuàng)藥。在無法獲得原創(chuàng)藥時，可考慮選用上市主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑。 生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何確定參比藥物？生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何確定給藥劑量？給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量。需要使用不相等劑量時，應(yīng)說明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計算生物利用度。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何確定給藥劑量？生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何確定清洗期

？設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于7個消除半衰期。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何確定清洗期？生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何設(shè)計取樣點(diǎn)？取樣點(diǎn)的設(shè)計對試驗(yàn)結(jié)果的可靠性及藥代動力學(xué)參數(shù)計算的合理性，均有十分重要的意義。一般應(yīng)兼顧到吸收相、平衡相（峰濃度）和消除相。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取2～3個點(diǎn)，峰濃度附近至少需要3個點(diǎn)，消除相取3～5個點(diǎn)。采樣持續(xù)應(yīng)到受試藥原形或其活性代謝物3～5個半衰期時，或至血藥濃度為Cmax

的1／10～1／20，AUC0-t/AUC0-∞通常應(yīng)當(dāng)大于80%。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計如何設(shè)計取樣點(diǎn)？受試者入選標(biāo)準(zhǔn)：男性健康受試者，18～40周歲。體重指數(shù)（體重(kg)/身高(m)2）在正常范圍（19～24）內(nèi)。試驗(yàn)前簽署知情同意書。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計受試者入選標(biāo)準(zhǔn)：生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計

受試者排除標(biāo)準(zhǔn)（舉例）：通過直接提問和體檢，有任何顯著的臨床疾病者。臨床上有顯著的變態(tài)反應(yīng)史、特別是藥物過敏史者。經(jīng)研究前全面體檢和實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)有任何顯著的臨床疾病者。正在服用或在服第一劑研究藥物前3周中曾服用任何處方藥或非處方藥（每天3g以內(nèi)撲熱息痛除外）者。在此研究給第一劑的日期前4個月內(nèi)接受過任何試驗(yàn)性藥物者。喝酒每周超過28單位酒精（1單位＝285ml啤酒或25ml烈酒或1玻璃杯葡萄酒）者。每天吸煙超過10支或相等量的煙草者。有證據(jù)表明其為藥物濫用者。在研究前一個月獻(xiàn)過血，或打算在研究期間或研究結(jié)束后一個月內(nèi)獻(xiàn)血或血液成分者。研究者認(rèn)為受試者有任何原因可能不會完成本研究者。生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計 受試者排除標(biāo)準(zhǔn)（舉例）：生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計為什么選擇男性受試者？消除性別間的差異。避免受女性經(jīng)期及妊娠的影響。 生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計為什么選擇男性受試者？生物等效性臨床試驗(yàn)的設(shè)計藥代動力學(xué)參數(shù)的計算在生物等效性研究中，其主要藥代參數(shù)Cmax

和Tmax

均以實(shí)測值表示，AUC0→t

以梯形法計算。一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來估算藥代動力學(xué)參數(shù)，為什么？用房室模型方法估算藥代參數(shù)時，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。藥代動力學(xué)參數(shù)的計算在生物等效性研究中，其主要藥代參數(shù)CmaBE研究中常用的軟件WinNonLinDAS研究者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng)確證并應(yīng)在研究報告中注明所用軟件。BE研究中常用的軟件WinNonLin等效判斷標(biāo)準(zhǔn)

采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，然后用雙向單側(cè)t檢驗(yàn)和計算90％置信區(qū)間的統(tǒng)計分析方法來評價和判斷藥物間的生物等效性。

等效判斷標(biāo)準(zhǔn)采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（等效判斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于方差分析方差檢驗(yàn)是顯著性檢驗(yàn)，設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥無差異，檢驗(yàn)方式為是與否。在P<0.05時認(rèn)為兩者差異有統(tǒng)計意義，但不一定不等效；在P>0.05時認(rèn)為兩藥差異無統(tǒng)計意義，但并不能認(rèn)為兩者相等或相近。

等效判斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于方差分析等效判斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于等效檢驗(yàn)雙向單側(cè)t檢驗(yàn)及（1~2α）%置信區(qū)間法是目前生物等效檢驗(yàn)的唯一標(biāo)準(zhǔn)。SFDA規(guī)定：一般經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的AUC0→t

在參比制劑的80％～125％范圍，受試制劑的Cmax

在參比制劑的70％～143％范圍，判斷兩藥生物等效。如有必要時，應(yīng)對Tmax

經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)，如無差異，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。等效判斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于等效檢驗(yàn)各國等效判斷標(biāo)準(zhǔn)比較國家/地區(qū)AUC標(biāo)準(zhǔn)90%可信限Cmax標(biāo)準(zhǔn)90%可信限中國80~125%70~143%加拿大80~125%None（點(diǎn)估計）EMEA80~125%75~133%日本80~125%某些藥物更寬WHO80~125%Cmax的可接受范圍可能比AUC寬美國80~125%80~125%南非80~125%75~133%各國等效判斷標(biāo)準(zhǔn)比較國家/地區(qū)AUC標(biāo)準(zhǔn)Cmax標(biāo)準(zhǔn)中國80等效判斷標(biāo)準(zhǔn)

出現(xiàn)Tmax不等效，Cmax等效，AUC等效或Cmax不等效，AUC等效時，怎么看？目前比較肯定AUC對藥物吸收程度的衡量作用，而Cmax、Tmax

依賴取樣時間的安排，用它們衡量吸收速率有時是不夠準(zhǔn)確的，不適合用于具有多峰現(xiàn)象的制劑及個體變異大的試驗(yàn)。故在評價時，若出現(xiàn)某些不等效特殊情況，需具體問題加以具體分析。等效判斷標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)Tmax不等效，Cmax等效，AUC等效BE研究的臨床試驗(yàn)報告

生物等效性研究臨床報告內(nèi)容至少應(yīng)包括以下內(nèi)容（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?）生物樣本分析方法考察的數(shù)據(jù)，提供必要的圖譜；（3）實(shí)驗(yàn)設(shè)計和操作方法，包括全部受試者的資料、樣本例數(shù)、參比制劑、給藥劑量、服藥方法和采樣時間安排；（4）受試者各時間點(diǎn)的藥物濃度、藥代參數(shù)和藥時曲線；（5）采用的統(tǒng)計分析方法以及詳細(xì)統(tǒng)計過程和結(jié)果；（6）服藥后的臨床不良反應(yīng)觀察結(jié)果，受試者中途退出和脫落記錄及原因；（7）生物利用度或生物等效性結(jié)果分析以及討論；（8）參考文獻(xiàn)。BE研究的臨床試驗(yàn)報告生物等效性研究臨床報告內(nèi)容至少應(yīng)包化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(二○○五年三月)主要參考文獻(xiàn)主要參考文獻(xiàn)舉例：A片劑的生物等效性研究XXX制藥有限公司生產(chǎn)與YYY制藥有限公司生產(chǎn)A片劑的開放、隨機(jī)、交叉研究

舉例：A片劑的生物等效性研究XXX制藥有限公司生產(chǎn)與YYY制

研究目的

在中國男性健康受試者中評價XXX制藥有限公司生產(chǎn)與YYY制藥有限公司生產(chǎn)A片劑的生物等效性。研究目的在中國男性健康受試者中評價XXX制藥有限公司試驗(yàn)設(shè)計本研究為開放、單劑量、雙周期隨機(jī)交叉設(shè)計；計劃入組24例，均為男性；受試者于試驗(yàn)當(dāng)日清晨按試驗(yàn)設(shè)計口服試驗(yàn)制劑或參比制劑。于1周后交叉服用另一制劑。試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行隨訪；每周期分別于給藥前及給藥后第0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、16、24小時采集靜脈血測定血漿中A的濃度，計算藥代動力學(xué)參數(shù)，判定兩種制劑是否生物等效。試驗(yàn)設(shè)計本研究為開放、單劑量、雙周期隨機(jī)交叉設(shè)計；入選標(biāo)準(zhǔn)年齡在18～40周歲之間健康男性,且同一批入組受試者年齡相差不超過10歲；體重指數(shù)(BMI)在19～24之間,體重不應(yīng)低于50Kg；自愿參加本試驗(yàn)并簽署書面知情同意書。入選標(biāo)準(zhǔn)年齡在18～40周歲之間健康男性,且同一批入組受試排除標(biāo)準(zhǔn)受試者在首次服用研究藥物前30天內(nèi)患有嚴(yán)重疾?。ㄑ芯空哒J(rèn)為沒有臨床顯著意義除外）；或有胃腸肝腎疾病患者；或有其他影響吸收、分布、代謝和排泄等因素者；有藥物過敏史者；受試者在篩選試驗(yàn)前2年內(nèi)有藥物濫用史或酗酒史（定義飲用酒精的量：每日飲用酒精的量約為40g）；飲用過量茶、咖啡和/或含有咖啡因的飲料者（＞8杯/天）；乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗體(Anti-HCV)、艾滋病病毒抗體(Anti-HIV)中有一項(xiàng)呈陽性者；實(shí)驗(yàn)室檢查異常且研究者認(rèn)為有臨床意義的受試者；收縮壓≤90mmHg的受試者；臥位5分鐘和站立后立即測定的血壓值：收縮壓之差＞20mmHg，舒張壓之差＞10mmHg的受試者；排除標(biāo)準(zhǔn)受試者在首次服用研究藥物前30天內(nèi)患有嚴(yán)重疾病（研究排除標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）受試者在首次服用研究藥物前2周曾經(jīng)吸過煙或服用過含有煙堿的產(chǎn)品（包括但不限定是香煙、煙斗、雪茄煙、咀嚼用煙草、煙堿片、煙堿口香糖），或在首次服用研究藥物前1周內(nèi)曾經(jīng)飲酒者；在過去4周內(nèi)采集全血≥200ml或過去12周內(nèi)采集全血≥400ml或過去2周內(nèi)采集成分血（采集血清成分或血小板成分）者；3個月內(nèi)用過已知對臟器有損害的藥物者；或在給予試驗(yàn)藥物前2周內(nèi)有用藥史者；或目前正在使用藥物者；在試驗(yàn)開始前2個月內(nèi)參加過其他試驗(yàn)者；不能和研究者很好溝通者（語言障礙、智力發(fā)育不良或腦功能受損者）；在緊急情況下不能取得聯(lián)系者；由研究者判斷為不適合參加本試驗(yàn)的受試者。排除標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）受試者在首次服用研究藥物前2周曾經(jīng)吸過煙或服用用法用量

采用隨機(jī)的服藥順序，受試者在第一研究周期早晨空腹單次口服試驗(yàn)制劑或參比制劑，在第二研究周期交叉服用參比制劑或試驗(yàn)制劑，劑量均為5mg，兩次服藥間隔至少1周。 用法用量采用隨機(jī)的服藥順序，受試者在第一研究周期早生物等效性評價指標(biāo)

主要判定指標(biāo)：Cmax

和AUC0-24h；參考指標(biāo)：AUC0-∞和Tmax生物等效性評價指標(biāo)安全性評價指標(biāo)不良事件（癥狀）；不良事件（檢查）；生命體征（血壓、心率）；嚴(yán)重不良事件。安全性評價指標(biāo)不良事件（癥狀）；評價方法藥代動力學(xué)：使用WinNonLinVersion5.0程序的非房室模型法計算試驗(yàn)制劑和參比制劑的藥代動力學(xué)參數(shù)Cmax，Tmax，AUC0-24h，AUC0-∞，t1/2。生物等效性分析：藥代動力學(xué)參數(shù)Cmax，AUC0-24h，AUC0-∞的生物等效性分析采用WinNonLin程序中的BioequivalenceWizard模塊；Tmax采用SPSS軟件Wilcoxon檢驗(yàn)法進(jìn)行分析。安全性分析：將試驗(yàn)過程中觀察到的不良事件及實(shí)驗(yàn)室檢查異常的研究前后的數(shù)據(jù)進(jìn)行列表描述。對生命體征（血壓、心率）、實(shí)驗(yàn)室檢查值進(jìn)行描述性統(tǒng)計和列表分析，按給藥組檢查時期計算出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、最小值、最大值。 評價方法

試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果受試者人口學(xué)資料

受試者年齡（y）身高（m）體重(kg）體重指數(shù)(kg/m2)mean±sd35.0±2.91.68±0.0663.5±6.022.4±1.3范圍28~381.60~1.8151~7619.9~24.0受試者人口學(xué)資料受試者年齡（y）身高（m）體重(kg）體重主要藥代動力學(xué)參數(shù)藥代動力學(xué)參數(shù)試驗(yàn)制劑參比制劑Cmax(ng/mL)Tmax*(h)AUC0-24h(ng*h/mL)AUC0-∞(ng*h/mL)t1/2(h)F（%）*Tmax以中位數(shù)（最小值，最大值）表示主要藥代動力學(xué)參數(shù)藥代動力學(xué)參數(shù)試驗(yàn)制劑參比制劑Cmax單次口服試驗(yàn)制劑和參比制劑后平均血漿濃度(mean±sd)-時間曲線圖

單次口服試驗(yàn)制劑和參比制劑后平均血漿濃度(mean±sd)-主要藥代動力學(xué)參數(shù)方差分析