細胞培養(yǎng)基及其添加物

細胞培養(yǎng)基及其添加物第1頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞培養(yǎng)基的基本成分不同培養(yǎng)基之間的區(qū)別常用的幾種培養(yǎng)基及其組成成分細胞培養(yǎng)基中的添加劑及其作用第2頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞培養(yǎng)基的基本成分氨基酸維生素第3頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月碳水化合物

無機鹽第4頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月緩沖系統(tǒng)

HEPES(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖第5頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月常用培養(yǎng)基1、RPMI-1640MediumRPMI是RoswellParkMemorialInstitute的縮寫，代指洛斯維.帕克紀念研究所。

2、MinimumEssentialMedium(MEM)也稱最低必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha3、dulbecco‘smodifiedeaglemedium(DMEM)其特點主要包括以下：（1）氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍；（3）含有糖酵解途徑中的重要物質——丙酮酸；（4）含有微量的鐵離子。第6頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第7頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第8頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月5、DMEM/F12DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基(DME/F12medium)，作為開發(fā)無血清配方的基礎，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分為優(yōu)點。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動物細胞培養(yǎng)。為了增強該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES緩沖液。6、McCoy’s5A7、Iscove’sModifiedDulbeccoMedium(IMDM)Guilber和Iscove將Dulbecco’Medium改良為Iscove’sMedium，此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液。8、M-199Medium第9頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月9、LeibovitzMedium(L-15)L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。10、Ham’sF-10培養(yǎng)基：適應小鼠細胞、人類二倍體的培養(yǎng)。11、Ham’sF-12培養(yǎng)基：可以在加入很少血清的情況下應用，特別適合單細胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，是無血清培養(yǎng)中常用的基礎培養(yǎng)液。第10頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞培養(yǎng)基中的添加劑及其作用1.L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?是細胞生長的必須氨基酸，為培養(yǎng)的細胞提供重要的能量來源。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。2.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?GlutaMAX-I即谷丙氨酸二肽，是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。第11頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月3.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。4.Hank′s平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別?HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks′液就可以了。5.培養(yǎng)液pH對細胞生長的影響?由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養(yǎng)用液時，需要注意一點：培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。第12頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月6.培養(yǎng)細胞時應使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響?答：一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。7.Hepes的作用HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境，CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持pH7.0左右。8.NaHCO3培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng)，使細胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%)，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值。第13頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月9.NEAA：非必須氨基酸NEAA(非必需氨基酸)是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養(yǎng)基不同，10.氯化鈣氯化鈣對成骨細胞培養(yǎng)有毒性，所以成骨細胞的培養(yǎng)基中應不含氯化鈣。11.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產(chǎn)生影響，可以通過純化技術去除，但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細胞生長，當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成