淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功培訓(xùn)課件

第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)一、中性粒細(xì)胞功能檢測二、巨噬細(xì)胞功能檢測第三節(jié)免疫細(xì)胞功能檢測的臨床應(yīng)用思考題小結(jié)7/24/20231淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功對淋巴細(xì)胞群，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等功能測定可以有效評價機體特異性和非特異性免疫功能。7/24/20232淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測淋巴細(xì)胞功能測定可分為體內(nèi)實驗和體外實驗。體內(nèi)實驗主要是間接了解淋巴細(xì)胞對抗原、半抗原或有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)；體外實驗主要包括淋巴細(xì)胞對抗原或有絲分裂原刺激后的增殖反應(yīng)、細(xì)胞毒性試驗及淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)物的測定7/24/20233淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功淋巴細(xì)胞T細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）B細(xì)胞（執(zhí)行體液免疫功能）NK和K細(xì)胞（非特異性免疫作用）7/24/20234淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功一、T細(xì)胞功能的檢測T細(xì)胞增殖試驗T細(xì)胞分泌功能測定T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗體內(nèi)試驗7/24/20235淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功（一）T淋巴細(xì)胞增殖試驗1.原理：淋巴細(xì)胞DNA合成分化母細(xì)胞刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞漿擴大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松7/24/20236淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功

未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞淋巴母細(xì)胞過渡型細(xì)胞大小(直徑μm)12～2012～166～8核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4個有或無無有絲分裂有或無無無胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿極少、天青色漿內(nèi)空泡有或無有或無無偽足有或無有或無無7/24/20237淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：PHA------T細(xì)胞ConA-------T細(xì)胞PWM-------T、B細(xì)胞LPS-------B細(xì)胞特異性刺激物：異種抗原同種組織抗原

7/24/20238淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功3.檢測方法

形態(tài)法：刺激物淋巴細(xì)胞（4-6天）母細(xì)胞化同位素法：PHA淋巴細(xì)胞（54h）DNA合成期+3HTdR摻入

收集細(xì)胞

檢測β射線

測定細(xì)胞內(nèi)的3H－TdR7/24/20239淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功（1）形態(tài)學(xué)檢查法7/24/202310淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功方法學(xué)評價：優(yōu)點：形態(tài)學(xué)方法簡便易行，普通光學(xué)顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實驗室應(yīng)用。缺點：是依靠肉眼觀察形態(tài)學(xué)變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，重復(fù)性和準(zhǔn)確性較差。7/24/202311淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功（2）3H-TdR摻入法優(yōu)點：3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強，重復(fù)性好。缺點：但需一定設(shè)備條件，同時還存在放射性核素污染問題。7/24/202312淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(二)T細(xì)胞分泌功能測定體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后,分泌各種細(xì)胞因子,可借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)分別檢測細(xì)胞因子含量、生物學(xué)活性或基因表達水平，以反映T細(xì)胞功能。

7/24/202313淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗1.原理：靶細(xì)胞抗原T細(xì)胞觀察殺傷活力致敏CTL靶細(xì)胞7/24/202314淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功形態(tài)學(xué)方法：淋巴細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞計數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞同位素法：淋巴細(xì)胞（CTL）+含51Cr的腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞破壞51Cr釋放測定γ射線2.方法意義：腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力

7/24/202315淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功圖15-2T細(xì)胞細(xì)胞毒試驗示意圖7/24/202316淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(四)體內(nèi)試驗特異性抗原皮膚試驗PHA皮膚試驗7/24/202317淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功二、B細(xì)胞功能檢測B細(xì)胞增殖能力的試驗溶血空斑試驗B細(xì)胞抗體形成功能的檢測體內(nèi)試驗7/24/202318淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(一)B細(xì)胞增殖能力的試驗抗IgM細(xì)菌脂多糖SAC的SPA

B細(xì)胞增殖形態(tài)學(xué)3H－TdR摻入法7/24/202319淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(二)溶血空斑試驗1.原理：7/24/202320淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功2.方法學(xué)：經(jīng)典溶血空斑形成試驗被動溶血空斑試驗

7/24/202321淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功3．臨床應(yīng)用與評價溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術(shù)等因素對體液免疫功能的影響評價免疫治療或免疫重建后機體產(chǎn)生抗體的能力。

7/24/202322淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(三)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測

——酶聯(lián)免疫斑點法1.原理：7/24/202323淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功2．應(yīng)用與方法學(xué)評價：該方法既可檢測抗體分泌細(xì)胞，又可檢測抗體分泌量。優(yōu)點：穩(wěn)定、特異、抗原用量少；可同時檢測不同抗原誘導(dǎo)的不同抗體分泌，并可定量；可檢測組織切片中分泌抗體的單個細(xì)胞。7/24/202324淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(四)體內(nèi)試驗體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分別采血，分離血清，測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)B細(xì)胞的功能。7/24/202325淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功染色計數(shù)離心取上清測LDH或AKP離心取沉淀測活細(xì)胞熒光測發(fā)光強度測CPM值形態(tài)法酶釋法熒光法同位素法化學(xué)發(fā)光法三、NK細(xì)胞活性測定靶細(xì)胞溶解常用靶細(xì)胞:

K562細(xì)胞株7/24/202326淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)吞噬細(xì)胞的吞噬活動大體分為趨化、吞噬和胞內(nèi)殺滅作用三個階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測方法。一、中性粒細(xì)胞功能檢測技術(shù)二、巨噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)7/24/202327淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功吞噬細(xì)胞的功能：趨化

吞噬胞內(nèi)殺滅作用

7/24/202328淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功一、中性粒細(xì)胞功能的檢測細(xì)胞趨化功能的檢測吞噬和殺菌功能的檢測7/24/202329淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(一)細(xì)胞運動功能——趨化功能檢測1.原理：7/24/202330淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功2.方法學(xué)：瓊脂糖平板法

濾膜滲透法（Boyden小室法）7/24/202331淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(二)吞噬和殺菌功能測定1．顯微鏡檢查法：7/24/202332淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功2.溶菌法3．NBT還原試驗

7/24/202333淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功二、巨噬細(xì)胞功能檢測(一)炭粒廓清試驗正常小鼠肝中枯否細(xì)胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10%炭粒。據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。7/24/202334淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(二)吞噬功能檢測巨噬細(xì)胞對顆粒性抗原物質(zhì)具有很強的吞噬功能，常用雞紅細(xì)胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母細(xì)胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集人巨噬細(xì)胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細(xì)胞。7/24/202335淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(三)巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測定1．酸性磷酸酶的測定硝酸鉛法偶氮法2．非特異性酯酶的測定常用α-萘醋酸法7/24/202336淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(四)細(xì)胞毒作用測定用IFN-γ激活小鼠巨噬細(xì)胞，觀察其對125I-UdR標(biāo)記的DBA/2小鼠肥大細(xì)胞瘤P815的殺傷活性。7/24/202337淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功(五)巨噬細(xì)胞促凝血活性測定激活的巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生一種與膜結(jié)合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預(yù)溫的正常兔血漿和CaCl2混合液，加入經(jīng)粘附有單層巨噬細(xì)胞的試管中，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間。7/24/202338淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功反映機體免疫功能狀態(tài)。腫瘤、免疫缺陷病等疾病的診斷和疾病預(yù)后監(jiān)測。組織器官移植后對受者的細(xì)胞免疫學(xué)功能監(jiān)測則有利于排斥反應(yīng)的早期發(fā)現(xiàn)，以便及時采取有效措施。第三節(jié)免疫細(xì)胞功能檢測的臨床應(yīng)用7/24/202339淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功思考題T細(xì)胞功能檢測內(nèi)容有哪些？什么是T細(xì)胞增殖試驗的原理、刺激物及方法學(xué)？何謂T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗的原理和方法學(xué)？何謂結(jié)核菌素皮膚試驗？B細(xì)胞功能檢測的方法學(xué)有哪些？何謂溶血空斑試驗的原理和方法學(xué)？NK細(xì)胞活性測定的方法學(xué)有哪些？中性粒細(xì)胞功能檢測方法學(xué)及相應(yīng)原理。巨噬細(xì)胞功能檢測方法學(xué)及相應(yīng)原理。免疫細(xì)胞功能檢測的臨床應(yīng)用有哪些？7/24/202340淋巴細(xì)胞的功能檢測一T細(xì)胞功能檢測二B細(xì)胞功小結(jié)免疫細(xì)胞功能試驗包括體內(nèi)和體外試驗。免疫細(xì)胞功能體外試驗主要根