6第六章-外源化學(xué)物的一般毒性作用解讀課件

外源化學(xué)物的一般毒性作用

(commontoxicityofchemicalpoison)青大醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系王樹林7/23/20231第六章外源化學(xué)物的一般毒性作用第一節(jié)概述第二節(jié)急性毒性作用第三節(jié)局部毒性作用第四節(jié)短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)7/23/20232第一節(jié)概述毒理學(xué)研究方法體外實(shí)驗(yàn)(invitro)流行病學(xué)研究

(EpidemiologicalStudy)

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(invivo)

整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人體觀察

離體器官組織：

心、肝、肺、腎、腦細(xì)胞原代細(xì)胞、細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞器：線粒體、微粒體等特殊毒性：致突變致畸致癌

臨床毒理學(xué)研究：中毒事故的處理或治療描述流行病學(xué)研究：提出病因假說分析流行病學(xué)研究：

驗(yàn)證病因假說，明確因果關(guān)系基礎(chǔ)毒性：急性亞急性亞慢性慢性刺激性志愿者研究：低濃度、短時(shí)間、可逆性7/23/20233第一節(jié)概述毒理學(xué)研究方法分類：一、按染毒頻率分為：急性毒性實(shí)驗(yàn)：24小時(shí)內(nèi)一次或多次染毒蓄積毒性實(shí)驗(yàn)：多次重復(fù)染毒二、按染毒時(shí)間分為：急性毒性實(shí)驗(yàn)：24小時(shí)內(nèi)一次或多次染毒亞急性毒性實(shí)驗(yàn)：1~30天重復(fù)染毒（短期重復(fù)染毒實(shí)驗(yàn)）亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)：1~3個(gè)月重復(fù)染毒慢性毒性實(shí)驗(yàn)：3個(gè)月以上重復(fù)染毒7/23/20234第一節(jié)概述三、按整個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)間分為：短期毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)數(shù)天至數(shù)周內(nèi)完成，如：誘變實(shí)驗(yàn)中期毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)數(shù)周至數(shù)月內(nèi)完成，如：特定靶器官的致癌實(shí)驗(yàn)長期毒性實(shí)驗(yàn)（終生毒性實(shí)驗(yàn)）：數(shù)月至終生致癌實(shí)驗(yàn)多代毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)須經(jīng)歷一代、二代或三代。如：繁殖實(shí)驗(yàn)7/23/20235第一節(jié)概述我國對(duì)農(nóng)藥、食品污染物、化妝品和消毒劑等化學(xué)物毒性試驗(yàn)期限實(shí)驗(yàn)農(nóng)藥食品污染物化妝品消毒劑亞急性1-4周短期亞慢性3-6周90天至少90天90天慢性大鼠18月同左至少6月6月-2年小鼠24月同左7/23/20236一般毒性實(shí)驗(yàn)方法要點(diǎn)根據(jù)外源化學(xué)物種類的不同，急性毒性試驗(yàn)的程序和要求有所不同。但總體原則和要點(diǎn)是相似的。主要包括：7/23/20237一般毒性實(shí)驗(yàn)方法要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇（種屬、品系、清潔級(jí)別）性別、年齡、體重?cái)?shù)量、分組飼養(yǎng)環(huán)境環(huán)境適應(yīng)與檢疫禁食受試物：化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)環(huán)節(jié)質(zhì)控：批次、保管、分樣、稱重、配制劑型：水溶液、混懸液、油溶液（溶劑和助劑）材料7/23/20238一般毒性實(shí)驗(yàn)方法要點(diǎn)染毒方法染毒劑量效應(yīng)觀察觀察時(shí)間和周期觀察指標(biāo)整體一般觀察中毒體征及發(fā)生過程（發(fā)生時(shí)間）死亡情況及時(shí)間分布體重變化取材病理檢查生化檢驗(yàn)方法7/23/20239一般毒性實(shí)驗(yàn)方法要點(diǎn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)和描述中毒體征和時(shí)間關(guān)系死亡情況與時(shí)間關(guān)系劑量（反應(yīng)）效應(yīng)關(guān)系生化檢驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)病理檢查結(jié)果的描述分析討論和評(píng)定分析討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果形成的原因分析討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果所揭示的問題對(duì)實(shí)驗(yàn)的評(píng)定對(duì)毒物的評(píng)定討論結(jié)果7/23/202310一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（1、選擇原則）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇原則：盡量選擇急性毒性反應(yīng)與人近似的動(dòng)物（種屬）品系（如SD、Wistar大鼠等）純化、適宜清潔級(jí)別（影響因素易控）易于飼養(yǎng)，試驗(yàn)動(dòng)物操作方便

繁殖生育力較強(qiáng)，數(shù)量較大能夠保障供應(yīng)

價(jià)格較低，易于獲得動(dòng)物常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為大白鼠和小白鼠7/23/202311一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（2、性別、年齡、體重）性別動(dòng)物應(yīng)當(dāng)是雌、雄各半

如果在研究中發(fā)現(xiàn)待測(cè)化學(xué)物對(duì)雌、雄動(dòng)物的毒性大小有明顯差異時(shí)，應(yīng)分別求出雌性與雄性動(dòng)物各自的LD50值如果試驗(yàn)是為致畸試驗(yàn)作劑量準(zhǔn)備，也可僅做雌性動(dòng)物的LD50試驗(yàn)7/23/202312年齡急性毒性試驗(yàn)選用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡通常要求初成年的動(dòng)物，且為健康未交配和受孕的動(dòng)物；亞慢性要求性剛成熟，慢性要求初斷乳。體重同一次試驗(yàn)同一批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重變異范圍不應(yīng)超過該批動(dòng)物平均體重的20％。一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（2、性別、年齡、體重）7/23/202313動(dòng)物種類生活年限(年)成年體重選擇范圍(g)時(shí)間(月)體重(g)急性實(shí)驗(yàn)慢性實(shí)驗(yàn)小鼠1.5~221518~2510~15大鼠2~2.53150150~25050~100豚鼠6~83250200~250150~200兔4~93~415001500~20001200~1500貓10~123~415001500~25001000~1500狗15~203~4100008000~15000400~8000實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生活年限及體重選擇一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（2、性別、年齡、體重）7/23/202314一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（3、數(shù)量、分組）數(shù)量在利用不同的方法測(cè)定化學(xué)物L(fēng)D50時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中對(duì)動(dòng)物數(shù)的要求不同霍恩氏法測(cè)LD50時(shí)要求有4個(gè)劑量組，每組4或5只動(dòng)物概率單位法、Bliss法測(cè)定則要求5—7個(gè)劑量組，每組10只動(dòng)物或10只以上對(duì)于不同的化學(xué)物測(cè)定應(yīng)根據(jù)其相應(yīng)的試驗(yàn)規(guī)程確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量7/23/202315一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（3、數(shù)量、分組）分組：均衡性和隨機(jī)性均衡性：要求各組動(dòng)物的平均體重及體重的離散度盡可能一致。具體來說是（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重不應(yīng)超過全體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物平均體重的20％---控制離散度（2）每組之間的平均體重相差不應(yīng)超過10％---控制均衡性隨機(jī)性：每只動(dòng)物分散到各組去的機(jī)會(huì)是均等的，以避免成見或系統(tǒng)誤差7/23/202316一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（4、飼養(yǎng)環(huán)境）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境（無特殊環(huán)境要求時(shí)）應(yīng)具有適宜性、清潔性、恒定性。小氣候：溫度(22±3℃)、濕度(30~70%)、通風(fēng)、照明(晝夜各半)等。籠具墊料飲水飼料7/23/202317一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（5、環(huán)境適應(yīng)與檢疫）在選擇和購買實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，應(yīng)先進(jìn)行動(dòng)物的染毒前環(huán)境適應(yīng)和檢疫觀察。環(huán)境適應(yīng)：讓外購來的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在本試驗(yàn)室條件下適應(yīng)一段時(shí)間，減少環(huán)境和生理?xiàng)l件變化可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響；篩檢健康、體重等不符合試驗(yàn)要求的動(dòng)物。在檢疫期內(nèi)出現(xiàn)臨床異常者應(yīng)予放棄，不可用于試驗(yàn)。檢疫期內(nèi)雌雄必須注意分籠飼養(yǎng)，防止交配和受孕。大鼠、小鼠、豚鼠、兔的檢疫期為1周，犬、猴等適當(dāng)?shù)匮娱L至2~3周。7/23/202318一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（6、禁食）禁食采用經(jīng)口途徑染毒，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道內(nèi)食物存留量對(duì)化學(xué)毒物的毒性可產(chǎn)生較明顯的干擾，因此在試驗(yàn)給藥前應(yīng)作禁食處理。禁食時(shí)間：大鼠主要在夜間進(jìn)食，所以要求染毒前應(yīng)隔夜禁食。小鼠和大鼠基本類似，但由于其消化吸收和代謝速度較快，可隔夜禁食也可禁食4小時(shí)以上。大動(dòng)物常在上午染毒，前一天正常給食，染毒前不喂食即可。禁食期間均正常給予飲水。染毒2小時(shí)后提供飼料。經(jīng)口多次染毒，可不禁食。7/23/202319二、受試物處理受試物時(shí)應(yīng)了解：受試物的純度及雜質(zhì)成分；化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)：揮發(fā)性（熔點(diǎn)/沸點(diǎn)）、溶解性、PH、穩(wěn)定性?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)相似化合物的毒性資料。7/23/202320二、受試物受試物要求：分析純同一種、同一批號(hào)成分和配方固定（如為異構(gòu)體混合物，異構(gòu)體比例必須固定）一次備齊所需受試物總量=(A×B×C×D)×1.2A為每組動(dòng)物數(shù)；B為各處理組的劑量和；C為染毒次數(shù)（通常為天）；D為動(dòng)物的平均體重；1.2為安全因子，包含損耗量。7/23/202321二、受試物處理受試物時(shí)每個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)質(zhì)控批次運(yùn)輸保管分樣稱重配制貯存7/23/202322二、受試物常用劑型：水溶液、油溶液和混懸液。處理受試物時(shí)，所選溶劑或助劑的要求是：無毒、無特殊刺激性和氣味；不與受試物發(fā)生反應(yīng)，受試物在溶劑或助劑中穩(wěn)定；不影響受試物的毒性（毒動(dòng)學(xué)和毒效學(xué)）；受試物在溶劑或助劑中穩(wěn)定。7/23/202323三、染毒途徑一般毒性試驗(yàn)染毒途徑(exposureroutes)的選擇應(yīng)考慮幾方面因素：模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實(shí)際接觸該受試物的途徑和方式；有利于不同化學(xué)物之間急性毒性大小的比較；受試物的性質(zhì)和用途；各種受試物毒性評(píng)價(jià)程序的要求等。最常用的染毒途徑為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑。7/23/202324三、染毒途徑

（1、經(jīng)口染毒）經(jīng)口（胃腸道）染毒(oralexposure)經(jīng)口途徑：可分為灌胃、喂飼、吞咽膠囊等方式。經(jīng)口灌胃染毒是急性毒性試驗(yàn)中最常用的染毒途徑。一般來說新的化學(xué)物均先進(jìn)行經(jīng)口染毒途徑的急性毒性試驗(yàn)，求出LD50值。通常以經(jīng)口途徑的LD50值來比較不同化學(xué)物急性毒性大小。7/23/202325三、染毒途徑

（1、經(jīng)口染毒）灌胃：空腹灌胃后2-3h復(fù)食灌胃的體積不超過體重的1-2％：小鼠為0.2~1.0ml/只或0.1~0.5ml/10g較合適；大鼠為5ml/只(通常用0.5~1.0ml/100g）；家兔為10ml/2kg體重；狗不超過50ml/10kg7/23/202326三、染毒途徑

（2、經(jīng)呼吸道)經(jīng)呼吸道染毒在常溫、常壓下為氣態(tài)，或在生產(chǎn)過程中和生活過程中以蒸氣、氣溶膠、煙、粉塵狀態(tài)污染生產(chǎn)與生活環(huán)境空氣，此時(shí)就有可能經(jīng)呼吸道吸入吸入接觸分為兩種方式靜式吸入動(dòng)式吸入7/23/202327三、染毒途徑

（3、經(jīng)皮膚）經(jīng)皮膚染毒研究外源化學(xué)物經(jīng)皮膚吸收應(yīng)當(dāng)盡量選擇皮膚解剖、生理與人類較近似的動(dòng)物為對(duì)象，目前多選用家兔和豚鼠。但由于研究化學(xué)物經(jīng)皮膚吸收的毒性(求經(jīng)皮LD50)所需的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較多，使用家兔、豚鼠不夠經(jīng)濟(jì)，也常用大鼠代替。7/23/202328三、染毒途徑

（3、經(jīng)皮膚）經(jīng)皮膚染毒程序給予受試物前24h，確定受試部位機(jī)械或化學(xué)脫毛面積10%～15%體表面積檢查去毛部位有無異常現(xiàn)象單位體重相同容積染毒接觸時(shí)間與人實(shí)際接觸該化學(xué)物的時(shí)間相仿7/23/202329三、染毒途徑

（4、注射）注射途徑可分為靜脈注射或滴注、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射、椎管內(nèi)注射等。使用注射途徑染毒時(shí)需注意控制注射量、注射速度。應(yīng)調(diào)整受試物的pH及滲透壓，pH一般應(yīng)為5~8，用等滲溶液。毒物代謝動(dòng)力學(xué)研究，注射藥品毒性7/23/202330三、染毒途徑

（4、注射）注射方式小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2~1.01~32~55~105~15肌肉0.1~0.20.2~0.50.2~0.50.5~12~5靜脈0.2~0.51~21~53~105~15皮下0.1~0.50.5~10.5~21~33~10常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給于受試物的體積（ml）7/23/202331四、染毒劑量染毒劑量的確定劑量選擇是一般毒性試驗(yàn)成功的基礎(chǔ)。首先了解分析受試化學(xué)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和其理化性質(zhì)，查閱文獻(xiàn)，找出毒性資料，并以前期研究得到的毒性參數(shù)為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)。做預(yù)試驗(yàn)。每個(gè)劑量組間的組距可以大些，有利于找出受試化學(xué)物的致死劑量范圍。7/23/202332五、效應(yīng)觀察

（1、觀察時(shí)間和周期）觀察時(shí)間和周期測(cè)定外源化學(xué)物的LD50(LC50)，一般要求計(jì)算實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸化學(xué)物之后兩周（14天）內(nèi)的總死亡數(shù)對(duì)于一些速死性化學(xué)物求其LD50(LC50)也可僅計(jì)算24小時(shí)的死亡率有些速死性化學(xué)物的24小時(shí)LD50與兩周LD50值往往沒有差別但應(yīng)注明是多少時(shí)間的LD50值，以便于在進(jìn)行毒性比較時(shí)有共同的基礎(chǔ)7/23/202333五、效應(yīng)觀察

（2、整體毒效應(yīng)觀察）中毒體征及發(fā)生過程（發(fā)生時(shí)間）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒性表現(xiàn)有一些規(guī)律，許多毒物染毒后，往往出現(xiàn)：興奮→抑制→死亡。含有氰基（－CN）的氫氰酸和丙烯腈對(duì)大鼠和小鼠染毒抑制→死亡。N–苯甲酰基-（3，4–二氯苯基）-2–氨基–丙酸乙酯，一般性的中毒表現(xiàn)，很快恢復(fù)，數(shù)日內(nèi)均“安然無恙”，近一周后才逐漸表現(xiàn)為抑制、拒食、消瘦、衰弱，昏迷直至死亡。二磷酸鹽類藥物7/23/202334五、效應(yīng)觀察

（2、整體毒效應(yīng)觀察）死亡情況及時(shí)間分布：計(jì)算LD50

體重變化：有助于了解受試化學(xué)物所致的中毒效應(yīng)是短暫的或較長期的效應(yīng)體重可以反映動(dòng)物中毒后的整體變化體重改變的原因很多，若化學(xué)毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗(yàn)動(dòng)物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。若化學(xué)毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也會(huì)減輕。如果化學(xué)毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來。7/23/202335五、效應(yīng)觀察

（3、病理檢查和生化檢驗(yàn)）病理檢查凡中毒死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)解剖做病理學(xué)檢查，檢查器官有無充血、出血、水腫或其它改變，并對(duì)有變化的臟器作病理組織學(xué)檢查對(duì)存活動(dòng)物于觀察期結(jié)束后應(yīng)做病理學(xué)檢查生化檢驗(yàn)7/23/202336五、效應(yīng)觀察

（4、標(biāo)本檢測(cè)原則）1、首先估算每只動(dòng)物檢測(cè)樣本的量（如，采血量、肝臟、脾臟、腎臟重量）2、估算各檢測(cè)項(xiàng)目需檢測(cè)標(biāo)本的量，是否能滿足全部設(shè)計(jì)的檢測(cè)項(xiàng)目。3、首先應(yīng)滿足接觸標(biāo)志物和效應(yīng)標(biāo)志物，其次能反映靶標(biāo)和有助于機(jī)制探索的檢測(cè)項(xiàng)目。7/23/202337第二節(jié)急性毒性作用

(acutetoxicitytest)急性毒性概念急性實(shí)驗(yàn)?zāi)康募毙远拘詫?shí)驗(yàn)方法要點(diǎn)急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)7/23/202338概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（一）急性毒性概念

急性毒性(acutetoxicity)：是指機(jī)體(人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物)一次或24小時(shí)內(nèi)多次接觸外源化學(xué)物后在短期內(nèi)(一般到14天)所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。包括一般行為、外觀改變、大體改變及死亡效應(yīng)，最主要觀察指標(biāo)是LD50。7/23/202339概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（二）注意事項(xiàng)（1.染毒次數(shù)與時(shí)間）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸化學(xué)物的方式或途徑不同，“一次”的含義也有所不同：經(jīng)口和注射接觸，“一次”是指在瞬間將受試化學(xué)物輸入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)呼吸道吸入與經(jīng)皮膚接觸，“一次”是指在一個(gè)特定的期間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物持續(xù)地接觸受試化學(xué)物的過程所以“一次”含有時(shí)間因素7/23/202340概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（二）注意事項(xiàng)（1.染毒次數(shù)與時(shí)間）“24小時(shí)多次”的概念是指當(dāng)外源化學(xué)物毒性很低，一次最大染毒給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后還不能達(dá)到充分了解該毒物急性毒性作用的目的，從而在24小時(shí)內(nèi)分次染毒，即為“多次”。國內(nèi)一般規(guī)定為24小時(shí)內(nèi)不超過3次。7/23/202341概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（二）注意事項(xiàng)（2.毒效應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間）不能僅以接觸毒物后毒性癥狀出現(xiàn)的時(shí)間來判定該毒物的某種毒性效應(yīng)是否屬于急性毒性，因?yàn)椋河械幕瘜W(xué)毒物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸數(shù)分鐘內(nèi)即可產(chǎn)生嚴(yán)重中毒癥狀，甚至瞬間死亡；而有些化學(xué)毒物幾天、十幾天后動(dòng)物才產(chǎn)生明顯的中毒癥狀和死亡，呈現(xiàn)遲發(fā)毒效應(yīng)和死亡。有的化學(xué)毒物在出現(xiàn)快速和劇烈的毒效應(yīng)后很快恢復(fù)；有的化學(xué)物早期僅有較輕微癥狀，很快恢復(fù)，但在幾天后又出現(xiàn)嚴(yán)重中毒癥狀甚至死亡。7/23/202342概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（二）注意事項(xiàng)（2.毒效應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間）一般急性大劑量染毒可引起速發(fā)毒性也能引起遲發(fā)毒性，可能產(chǎn)生也可能不產(chǎn)生與重復(fù)染毒類似的毒性。應(yīng)主要以接觸毒物的時(shí)間，規(guī)定的“一次或24小時(shí)內(nèi)多次接觸”后所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。觀察急性毒效應(yīng)一般為14天，如有必要可延長至14天以上。7/23/202343概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（二）注意事項(xiàng)（3.毒效應(yīng)強(qiáng)度）急性毒性與亞慢性、慢性中毒相比其癥狀常常是很劇烈的，機(jī)體急性一次性大劑量接觸毒物后所表現(xiàn)出的一般行為，外觀、大體形態(tài)的改變十分明顯，中毒癥狀嚴(yán)重，常常發(fā)生死亡。急性毒性常常以死亡為觀察重點(diǎn)和觀察終點(diǎn)。7/23/202344概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)各個(gè)劑量組的確定急性毒性試驗(yàn)除設(shè)立幾個(gè)劑量組外，是否設(shè)正常和溶劑對(duì)照組，有不同意見。但在實(shí)際工作中，除有特殊規(guī)定外，均不設(shè)立對(duì)照組。劑量組數(shù)需根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選用的LD50計(jì)算方法來確定。如寇氏法、Bliss法一般設(shè)5~8個(gè)劑量組；霍恩氏法設(shè)4個(gè)劑量組。利用外源化學(xué)物L(fēng)D50時(shí)設(shè)置劑量組，應(yīng)依預(yù)試驗(yàn)結(jié)果而定一般設(shè)置5~7個(gè)劑量組即可，它即符合統(tǒng)計(jì)計(jì)算要求又可節(jié)省人力和財(cái)力。每個(gè)劑量組的動(dòng)物數(shù)，小鼠不少于10只、大鼠6~8只、家兔4~6只7/23/202345概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)經(jīng)典急性毒性劑量確定與分組陰性對(duì)照組低劑量組(毒性作用明顯，但沒有或僅有個(gè)別動(dòng)物死亡，相當(dāng)于LD0)中劑量組(毒性作用明顯，有50%動(dòng)物死亡，相當(dāng)于LD50)高劑量組(介于LD50-LD95之間)溶劑對(duì)照組陽性對(duì)照7/23/202346概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（三）急性實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.測(cè)試和求出毒物的致死劑量以及其他急性毒性參數(shù)，通常以LD50（半數(shù)致死劑量）為最主要的參數(shù)，并根據(jù)LD50值進(jìn)行急性毒性分級(jí)。2.通過觀察動(dòng)物中毒表現(xiàn)、毒作用強(qiáng)度和死亡情況，初步評(píng)價(jià)毒物對(duì)機(jī)體的毒效應(yīng)特征、靶器官、劑量－反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系和對(duì)人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性。3.為亞慢性、慢性毒性試驗(yàn)研究以及其他毒理試驗(yàn)提供接觸劑量和觀察指標(biāo)選擇的依據(jù)。4.為毒理學(xué)機(jī)理研究提供線索。7/23/202347概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（四）急性毒性實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：了解外源化學(xué)物對(duì)機(jī)體產(chǎn)生急性毒性的主要依據(jù)，是毒理學(xué)研究中最基礎(chǔ)的工作。對(duì)于和人類生活密切接觸的化學(xué)物如新的食品、藥品、農(nóng)藥、化妝品、工業(yè)毒物等毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)，通常是必做的試驗(yàn)。是評(píng)估毒性大小的第一步工作。7/23/202348概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)（五）急性毒性實(shí)驗(yàn)分類1.經(jīng)典急性毒性實(shí)驗(yàn)：以死亡為其觀察終點(diǎn)，所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量多。概率單位法改進(jìn)寇氏法霍恩法（Horn）7/23/202349概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)的局限性1.消耗的動(dòng)物量大2.獲得的信息有限3.測(cè)得的LD50僅僅是一個(gè)近似值4.在安全性評(píng)價(jià)中僅評(píng)價(jià)動(dòng)物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗(yàn)檢查所提供的深入細(xì)致的毒性信息。7/23/202350概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)2.急性毒性替代實(shí)驗(yàn)：減少了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量；優(yōu)化了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。向3R方向發(fā)展。1）固定劑量法(fixeddoseprocedure)：不以死亡為觀察終點(diǎn)；固定劑量。利用預(yù)先選定的或固定的一系列劑量染毒，從而觀察化學(xué)物的毒性反應(yīng)來對(duì)化學(xué)無毒性進(jìn)行分級(jí)。7/23/202351概述—急性毒性實(shí)驗(yàn)2.急性毒性替代實(shí)驗(yàn)：2）急性毒性分級(jí)法(acutetoxicclassmethod)：以死亡為觀察終點(diǎn)；分階段實(shí)驗(yàn)。每階段3只動(dòng)物，根據(jù)死亡動(dòng)物數(shù)，判定毒性。3）上-下移動(dòng)法(up/downmethod)或階梯法：多種觀察終點(diǎn)；初步資料第一只動(dòng)物劑量毒性反應(yīng)第二只動(dòng)物劑量·······7/23/202352急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)我國或國際上的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)均還存在不少缺點(diǎn)，因?yàn)樗鼈冎饕歉鶕?jù)經(jīng)驗(yàn)確定，客觀性還不足。目前還沒有全世界公認(rèn)、統(tǒng)一的毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。急性毒性試驗(yàn)求出LD50(LC50)值，通過LD50值進(jìn)行急性毒性分級(jí)(acutetoxicityclassification)，評(píng)價(jià)毒物的急性毒性的強(qiáng)弱，比較毒物的急性毒性大小。應(yīng)注意急性毒性試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，除報(bào)告該毒物的LD50值和急性毒性級(jí)別外，還應(yīng)對(duì)中毒和死亡特征加以報(bào)告。7/23/202353急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)在毒理學(xué)中為什么選用LD50作為判斷化合物急性毒性的分級(jí)指標(biāo)？LD50是通過對(duì)各試驗(yàn)組的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得來的，其作為判斷化合物急性毒性的分級(jí)指標(biāo)的原因是：LD50代表受試群體感受性的平均情況，因而代表性好。位于劑量反應(yīng)關(guān)系S形曲線中央，LD50不受兩端個(gè)別動(dòng)物感受性特高或特低的影響。此處曲線的坡度最大，因而LD50靈敏性高。其附近的曲線近似直線，因而LD50穩(wěn)定性好。死亡比非死亡的許多效應(yīng)便于準(zhǔn)確觀察。7/23/202354急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)外源化學(xué)物急性毒性分級(jí)（WHO）毒性分級(jí)大鼠一次經(jīng)口LD50(mg/kg)6只大鼠吸入4小時(shí)，死亡2~4只的濃度(ppm)兔經(jīng)皮LD50(/mg/kg)對(duì)人可能致死的估計(jì)量g/kg總量(g/60kg)劇毒<1<10<5<0.050.1高毒1~10~5~0.05~3中等毒50~100~44~0.5~30低毒500~1000~350~5~250實(shí)際無毒5000~10000~2180~>15>10007/23/202355急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)我國食品毒理急性毒性分級(jí)法(1994)急性毒性分級(jí)大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)大致相當(dāng)于70kg人的致死量6級(jí)(極毒)<1稍嘗,<7滴5級(jí)(劇毒)1~507滴~1茶匙4級(jí)(中等毒)51~5001茶匙~35克3級(jí)(低毒)501~500035~350克2級(jí)(實(shí)際無毒)5001~15000350~1050克1級(jí)(無毒)>15000>1050克7/23/202356第三節(jié)局部刺激實(shí)驗(yàn)局部刺激實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖橇私馔庠椿瘜W(xué)物對(duì)眼睛和皮膚的局部刺激作用和腐蝕作用。包括眼刺激實(shí)驗(yàn)、皮膚刺激和致敏實(shí)驗(yàn)。我國農(nóng)藥、化學(xué)品和消毒劑毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)程序均規(guī)定局部刺激實(shí)驗(yàn)為必做項(xiàng)目。7/23/202357Draize實(shí)驗(yàn)由FDAJohnDraize于1944年建立。作為眼刺激和皮膚刺激鑒定實(shí)驗(yàn)。局限性：實(shí)驗(yàn)評(píng)分主觀性強(qiáng)；結(jié)果重復(fù)性差；種屬差異。7/23/202358眼刺激實(shí)驗(yàn)一、概述眼睛刺激性(EyeIrritation)：指眼球表面接觸受試樣品后產(chǎn)生的可逆性炎性變化。眼睛腐蝕性(EyeCorrosion)：指眼球表面接觸受試樣品后引起的不可逆性組織損傷。7/23/202359眼刺激實(shí)驗(yàn)二、試驗(yàn)基本原則受試樣品以一次劑量滴入每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一側(cè)眼睛結(jié)膜囊內(nèi)，以未作處理的另一側(cè)眼睛作為自身對(duì)照；在規(guī)定的時(shí)間間隔內(nèi)，觀察對(duì)動(dòng)物眼睛的刺激和腐蝕作用程度并評(píng)分，以此評(píng)價(jià)受試樣品對(duì)眼睛的刺激作用。觀察時(shí)間應(yīng)能足以評(píng)價(jià)刺激效應(yīng)的可逆性和不可逆性。觀察時(shí)間最少72h，一般7d，但一般不超過21d；當(dāng)動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重和持久的痛苦跡象時(shí)，以適當(dāng)?shù)姆绞綄?dòng)物處死；7/23/202360眼刺激實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物數(shù)量首選家兔。一般4只。如果受試樣品的顯著效應(yīng)是可預(yù)見的，可以考慮用一只動(dòng)物。如果用一只動(dòng)物試驗(yàn)得出的結(jié)果提示受試樣品有嚴(yán)重的刺激性和腐蝕性，則不必進(jìn)行進(jìn)一步的試驗(yàn)。如果結(jié)果相反，則至少需要3只家兔。有時(shí)，在增加動(dòng)物的進(jìn)一步試驗(yàn)中應(yīng)該適當(dāng)?shù)年U明可疑反應(yīng)。7/23/202361眼刺激實(shí)驗(yàn)四、不適宜做眼刺激實(shí)驗(yàn)的情況：強(qiáng)酸或強(qiáng)堿物質(zhì)如pH≤2或pH≥11.5，由于其可預(yù)見的腐蝕特性，不必做本試驗(yàn)；已在皮膚試驗(yàn)中證實(shí)具有腐蝕或嚴(yán)重刺激毒性的物質(zhì)不必進(jìn)行眼刺激試驗(yàn)，可以推測(cè)該物質(zhì)對(duì)眼睛將會(huì)引起相似的嚴(yán)重結(jié)果；在充分并公認(rèn)的體外試驗(yàn)結(jié)果中確定可能產(chǎn)生刺激性或腐蝕性的物質(zhì)不必進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。7/23/202362眼刺激實(shí)驗(yàn)五、結(jié)果急性眼刺激試驗(yàn)結(jié)果從動(dòng)物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對(duì)有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其它品系動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)也得到類似結(jié)果，則會(huì)增加從動(dòng)物外推到人的可靠性。7/23/202363皮膚刺激實(shí)驗(yàn)一、概述皮膚刺激性(DermalIrritation)：皮膚涂敷受試樣品后局部產(chǎn)生的可逆性炎性變化。皮膚腐蝕性(DermalCorrosion)：皮膚涂敷受試樣品后局部引起的不可逆組織損傷。7/23/202364皮膚刺激實(shí)驗(yàn)二、試驗(yàn)基本原則和要求1、將受試樣品一次（或多次）涂（敷）于健康無破損的皮膚上，并作自身對(duì)照（除非懷疑有嚴(yán)重的刺激/腐蝕并逐漸發(fā)展）；2、在規(guī)定時(shí)間間隔內(nèi)觀察和評(píng)價(jià)刺激反應(yīng)的程度，并作詳細(xì)的記錄。3、試驗(yàn)前24h，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脊柱兩側(cè)毛剪去或剃掉，不可損傷表皮，去毛范圍左右各3cm×3cm。24h后，選擇皮膚健康完整無損的動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。不應(yīng)在長有濃密島狀毛的部位進(jìn)行受試樣品試驗(yàn)。7/23/202365皮膚刺激實(shí)驗(yàn)二、試驗(yàn)基本原則4、取受試樣品直接涂布在皮膚上，用二層紗布和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定。另一側(cè)皮膚作為對(duì)照。采用封閉試驗(yàn)，敷用時(shí)間為4h。試驗(yàn)結(jié)束后，用溫水或無刺激性溶劑清除殘留受試樣品。5、觀察時(shí)間的確定應(yīng)足以觀察到可逆和不可逆刺激作用的全過程，以便進(jìn)行完整的評(píng)價(jià)，一般不超過14d。7/23/202366皮膚刺激實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境首選健康成年白色家兔，其次為白色豚鼠。如果使用其他的哺乳動(dòng)物做試驗(yàn)，試驗(yàn)者應(yīng)提供選擇的依據(jù)。至少需要4只健康成年動(dòng)物（雄性和/或雌性均可），每只動(dòng)物相鄰的未處理的皮膚可作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)前動(dòng)物要在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中至少適應(yīng)3d時(shí)間。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合國家相應(yīng)規(guī)定。常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由飲水。7/23/202367皮膚刺激實(shí)驗(yàn)四、不適宜做皮膚刺激實(shí)驗(yàn)的情況：強(qiáng)酸或強(qiáng)堿物質(zhì)如pH≤2或pH≥11.5，由于可預(yù)見其腐蝕特性，不必做本試驗(yàn)；在充分并公認(rèn)的體外試驗(yàn)結(jié)果中確定可能產(chǎn)生腐蝕或刺激毒性的物質(zhì)不必進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。如果從受試樣品的結(jié)構(gòu)活性構(gòu)效關(guān)系可以預(yù)見潛在的腐蝕毒性，則不必做本試驗(yàn)。若已知受試樣品有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性（LD50≤200mg/kgbw）的物質(zhì)（系統(tǒng)毒性）不必進(jìn)行本試驗(yàn)；在急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中染毒劑量達(dá)2000mg/kgbw時(shí)仍未產(chǎn)生皮膚刺激體征的物質(zhì)。7/23/202368皮膚刺激實(shí)驗(yàn)五、結(jié)果急性皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果從動(dòng)物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對(duì)有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其它品系動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)也得到類似結(jié)果，則會(huì)增加從動(dòng)物外推到人的可靠性。試驗(yàn)中使用封閉式接觸是一種超常的實(shí)驗(yàn)室條件下的試驗(yàn)，在人類實(shí)際接觸化學(xué)品過程中很少存在這種接觸方式。7/23/202369眼和皮膚刺激試驗(yàn)的替代一、離體細(xì)胞、組織器官模型指利用廢棄的離體動(dòng)物眼球、角膜作為眼刺激試驗(yàn)材料替代整體動(dòng)物的試驗(yàn)。目前開展的主要有離體雞眼試驗(yàn)(chickenenucleatedeyetest,CEET)、離體兔眼試驗(yàn)(isolatedrabbiteyetest,IRE)、牛角膜混濁與滲透力(bovinecornealopacityandpermeability,BCOP)影響試驗(yàn)體外細(xì)胞培養(yǎng)：人角朊細(xì)胞,以避免不同種屬之間結(jié)果外推的不確定性。皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)皮膚組織培養(yǎng)7/23/202370眼和皮膚刺激試驗(yàn)的替代二、絨毛膜尿囊膜(chorioallantoicmembrane,CAM)試驗(yàn)

絨毛膜尿囊膜是雞胚外的循環(huán)系統(tǒng),與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，是眼刺激性試驗(yàn)替代方法中廣泛使用的模型之一。目前研究的主要有雞胚絨毛膜尿囊膜(hen’segg2chorioallantoicmembrane,HET2CAM)試驗(yàn)、絨毛膜尿囊膜-臺(tái)盼藍(lán)染色(chorioallantoicmembrane-trypanbluestraining,CAM-TBS)試驗(yàn)絨毛膜尿囊膜血管試驗(yàn)(chorioallantoicmembranevas-cularassay,CAMVA)。7/23/202371皮膚致敏實(shí)驗(yàn)一、概述皮膚致敏反應(yīng)/過敏性接觸性皮炎(SkinSensitization/AllergicContactDermatitis)：是皮膚對(duì)一種物質(zhì)產(chǎn)生的免疫源性皮膚反應(yīng)。對(duì)于人類這種反應(yīng)可能以搔癢、紅斑、丘疹、水皰、融合水皰為特征。動(dòng)物的反應(yīng)不同，可能只見到皮膚紅斑和水腫。7/23/202372皮膚致敏實(shí)驗(yàn)二、試驗(yàn)基本原則1、誘導(dǎo)接觸(InductionExposure)：指機(jī)體通過接觸受試樣品以達(dá)到誘導(dǎo)產(chǎn)生致敏狀態(tài)目的的試驗(yàn)性暴露；誘導(dǎo)期(InductionPeriod)：指機(jī)體通過接觸受試樣品而誘導(dǎo)出過敏狀態(tài)所需的時(shí)間；2、激發(fā)接觸(ChallengeExposure)：機(jī)體接受誘導(dǎo)暴露后，再次接觸受試樣品的試驗(yàn)性暴露，以確定皮膚是否會(huì)出現(xiàn)過敏反應(yīng)。7/23/202373皮膚致敏實(shí)驗(yàn)二、試驗(yàn)基本原則3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通過多次皮膚涂抹誘導(dǎo)接觸受試樣品10～14d（誘導(dǎo)期）后，給予激發(fā)劑量的受試樣品，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并與對(duì)照動(dòng)物比較對(duì)激發(fā)接觸受試樣品的皮膚反應(yīng)強(qiáng)度。7/23/202374皮膚致敏實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)和飼養(yǎng)環(huán)境首選健康、成年的白色豚鼠，體重250～300g。如選擇其它種屬，試驗(yàn)者需提供選擇的依據(jù)。7/23/202375第四節(jié)短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)（一）基本概念蓄積作用(accumulation)：當(dāng)化學(xué)物與機(jī)體發(fā)生亞慢性接觸，將反復(fù)進(jìn)入機(jī)體，而且當(dāng)進(jìn)入的速度或總量超過代謝轉(zhuǎn)化與排出的速度或總量時(shí)，化學(xué)物就有可能在機(jī)體內(nèi)逐漸增加并貯留的現(xiàn)象7/23/202376短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)

一種外源化學(xué)物有無蓄積作用是評(píng)定該化學(xué)物是否可能引起潛在慢性中毒的論據(jù)之一，也是制定衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)安全系數(shù)的一種依據(jù)。7/23/202377短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)物質(zhì)蓄積(materialaccumulation)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物反復(fù)多次接觸化學(xué)物后，用化學(xué)分析方法能夠測(cè)得機(jī)體內(nèi)存在該化學(xué)物或其代謝產(chǎn)物。功能蓄積(functionalaccumulation)：有的化學(xué)物在長期接觸后，機(jī)體內(nèi)雖不能測(cè)出其原型或代謝產(chǎn)物，卻出現(xiàn)了慢性毒性作用。7/23/202378短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)功能蓄積可能是

由于貯存體內(nèi)的化學(xué)物或其代謝產(chǎn)物的數(shù)量極微，不能檢出物質(zhì)的蓄積。或者是由于每次機(jī)體接觸化學(xué)物之后所引起的損害累積所致。7/23/202379短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)（二）、概念短期（重復(fù)劑量）毒性：是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人連續(xù)接觸外源化學(xué)物14~30天所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)。亞慢性毒性(subchronictoxicity)：是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人連續(xù)較長期接觸外源化合物所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)。1~3個(gè)月。慢性毒性作用(chronictoxicity)：是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人長期（甚至終生）反復(fù)接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。3個(gè)月以上。7/23/202380短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)研究目的1.觀察長期接觸受試物的毒性效應(yīng)譜，毒作用特點(diǎn)和毒作用的靶器官。了解其毒性機(jī)制。2.觀察長期接觸受試物毒性作用的可逆性.3.研究重復(fù)接觸受試物毒性作用的劑量一反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，從初步了解到確定未觀察到有害作用的劑量(NOAEL)和觀察到有害作用的最低劑量(LOAEL)，為對(duì)該受試物的危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)和制定安全限量提供參考值。4.確定不同動(dòng)物對(duì)受試物的毒效應(yīng)差異，為將研究結(jié)果外推到人提供依據(jù)7/23/202381短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)二、研究方法（一）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受試物染毒方法和染毒期限染毒劑量和分組效應(yīng)觀察結(jié)果統(tǒng)計(jì)和描述討論和評(píng)價(jià)（二）長期毒性實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)7/23/202382短期、亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)（三）、結(jié)果評(píng)價(jià)：應(yīng)全面、綜合、科學(xué)分析1.劑量相關(guān)趨勢(shì)2.反應(yīng)重現(xiàn)性3.相關(guān)指標(biāo)變化4.性別差異5.差異大小6.歷史性對(duì)照作用7/23/202383ThankYou！Theend！7/23/202384重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇原則與急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇原則相似：與人接近；品系純化；易于飼養(yǎng)；便于操作；保障供應(yīng)；易于獲得。與急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的主要區(qū)別在于：年齡（體重）和數(shù)量7/23/202385重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)一般要求選擇兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一種為嚙齒類，另一種為非嚙齒類，如大鼠和狗，以便全面了解受試物的毒性特征。慢性毒性試驗(yàn)選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的條件與亞慢性毒性試驗(yàn)相同。但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最好為純系甚至同窩動(dòng)物均勻分布于各劑量組。7/23/202386重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

亞慢性毒性試驗(yàn)

年齡：大鼠80~100g狗8~12月小鼠10~15g數(shù)量：小動(dòng)物≥20

大動(dòng)物≥6性別：雌雄各半

慢性毒性試驗(yàn)?zāi)挲g：大鼠初斷乳(出生后3~4周);50~70g小鼠初斷乳(出生后3周);10~12g狗<8月數(shù)量：小動(dòng)物≥40大動(dòng)物≥8性別：雌雄各半亞慢性、慢性毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡應(yīng)較?。粩?shù)量應(yīng)較大。7/23/202387重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—染毒途徑亞慢性毒性試驗(yàn)接觸外源化學(xué)物途徑的選擇，應(yīng)考慮兩點(diǎn)：1.盡量模擬人類在環(huán)境中接觸該化合物的途徑或方式2.應(yīng)與預(yù)期進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)的接觸途徑相一致具體接觸途徑主要有經(jīng)口、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮膚三種7/23/202388重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—染毒途徑慢性毒性試驗(yàn)多為經(jīng)口與經(jīng)呼吸道接觸染毒途徑經(jīng)口染毒小動(dòng)物常采用灌胃法，大動(dòng)物常采用灌胃法和膠囊法。經(jīng)呼吸道接觸，每日接觸時(shí)間，依試驗(yàn)要求而定間歇性吸入適于工業(yè)毒物，每日吸入6～8小時(shí)連續(xù)性吸入適于環(huán)境污染物，全天性吸入。7/23/202389重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—染毒期限慢性毒性試驗(yàn)期限一般認(rèn)為工業(yè)毒理學(xué)慢性試驗(yàn)動(dòng)物染毒6個(gè)月或更長時(shí)間環(huán)境毒理學(xué)與食品毒理學(xué)則要求實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒1年以上或2年也有學(xué)者主張動(dòng)物終生接觸外源化學(xué)物才能全面反映外源化學(xué)物的慢性毒性效應(yīng)，以及求出閾劑量或無作用劑量7/23/202390重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)

—染毒期限7/23/202391重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)—

劑量選擇與分組亞慢性、慢性實(shí)驗(yàn)的劑量選擇的依據(jù)：一、急性、短期毒性實(shí)驗(yàn)資料為依據(jù)。劑量選擇的一般步驟：急性毒性試驗(yàn)亞急性毒性試驗(yàn)（28天）亞慢性毒性試驗(yàn)（90天）慢性毒性試驗(yàn)7/23/202392重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)—

劑量選擇與分組亞慢性一是以急性毒性的閾劑量為亞慢性試驗(yàn)的最高劑量；一是以此化合物L(fēng)D50的1/20~1/5為最高劑量。亞慢性試驗(yàn)的上限劑量，需控制在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸受試化合物的整個(gè)過程中，不發(fā)生死亡或僅有個(gè)別動(dòng)物死亡，但有明顯的中毒效應(yīng)，或靶器官出現(xiàn)典型的損傷。7/23/202393重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)—

劑量選擇與分組慢性一是以亞慢性閾劑量或其1/5~1/2劑量為慢性毒性試驗(yàn)的最高劑量，以這一閾劑量的1/50~1/10為慢性毒性試驗(yàn)的預(yù)計(jì)閾劑量組，并以其1/100為預(yù)計(jì)的慢性無作用劑量組一是以急性毒性的LD50劑量為出發(fā)點(diǎn)，即以LD50的1/10、1/100和1/1000為染毒劑量7/23/202394重復(fù)染毒毒性實(shí)驗(yàn)—

劑量選擇與分組亞慢性、慢性實(shí)驗(yàn)的劑量選擇的依據(jù)：二、人群主動(dòng)攝入（食品和藥品）的最高劑量為依據(jù)。大鼠可用人臨床擬用劑量的10、30和100倍，非嚙齒類可用5、15、50倍。當(dāng)預(yù)期受試物沒有明顯毒性時(shí)，亞慢性和慢性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)至少等于人擬用劑量的最大倍數(shù)，保健食品為100倍，化學(xué)藥品為30倍，中藥為