免疫學(xué)應(yīng)用-課件

免疫學(xué)應(yīng)用1ppt課件

第一節(jié)免疫學(xué)診斷一、抗原抗體的檢測二、淋巴細(xì)胞的檢測2ppt課件一、抗原抗體的檢測原理：

Ag與相應(yīng)Ab在體內(nèi)與體外可發(fā)生特異性結(jié)合檢測原則：1.已知Ag檢測未知Ab2.已知Ab檢測未知Ag3ppt課件

細(xì)菌學(xué)診斷標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)注意無菌操作，盡量避免雜菌污染。根據(jù)致病菌在不同病期的體內(nèi)分布和排出部位，采取不同標(biāo)本。應(yīng)在使用抗菌藥物前采集標(biāo)本，否則在培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加入拮抗劑。盡可能采集病變明顯部位的材料。標(biāo)本必須新鮮，采集后盡快送檢。送檢過程中要采取適當(dāng)?shù)谋４娣绞健?biāo)本采集與送檢原則4ppt課件致病菌的檢驗(yàn)程序標(biāo)本生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)直接涂片檢查分離培養(yǎng)分子生物學(xué)技術(shù)（核酸雜交、PCR）

其它(HPLC)5ppt課件人體受致病菌感染后，其免疫系統(tǒng)被刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生特異性抗體。抗體的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價(jià)（滴度）的升高。因此，用已知的細(xì)菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異抗體和其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。一般采取病人的血清進(jìn)行試驗(yàn)，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。血清學(xué)診斷試驗(yàn)最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本，當(dāng)后者的抗體效價(jià)比前者升高大于等于4倍時(shí)方有意義。常用方法：直接凝集試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、ELISA。

血清學(xué)診斷6ppt課件

抗原抗體反應(yīng)1、抗原抗體的結(jié)合與析出2、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)3、抗原抗體反應(yīng)的影響因素7ppt課件引起抗原抗體結(jié)合的作用力1、電荷引力（庫侖引力）2、電子云引力（VanderWaals力）3、氫鍵結(jié)合力4、疏水作用力8ppt課件抗原抗體結(jié)合物析出的原因析出+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—電解質(zhì)+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—9ppt課件

抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1、特異性2、適合比例性3、可逆性10ppt課件網(wǎng)格學(xué)說（latticetheory）抗體過?？乖^?？贵w抗體比例合適11ppt課件可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAgAb12ppt課件

抗原抗體反應(yīng)的影響因素1、電解質(zhì)2、酸堿度（pH值6-8）3、溫度（37-42。C）13ppt課件抗原或抗體的檢測方法類型抗原抗體輔助物敏感度（g抗體氮）凝集反應(yīng)顆粒性凝集素0.01沉淀反應(yīng)可溶性沉淀素5-10補(bǔ)體溶血反應(yīng)紅細(xì)胞溶血素補(bǔ)體0.001-0.3G-細(xì)菌溶菌素補(bǔ)體（同上）補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)固定補(bǔ)體抗體補(bǔ)體SRBC溶血素0.1

中和反應(yīng)外毒素抗毒素靶細(xì)胞0.01

病毒中和抗體靶細(xì)胞（同上）14ppt課件凝集反應(yīng)15ppt課件直接凝集反應(yīng)

玻片法：ABO血型鑒定試管法：肥達(dá)試驗(yàn)顆粒性抗原抗體（凝集素）16ppt課件肥達(dá)試驗(yàn)是一種試管凝集反應(yīng)，最早由肥達(dá)（Widal）用于臨床，故名。用已知的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原，與待測血清作試管或微孔板凝集實(shí)驗(yàn),以測定血清中有無相應(yīng)抗體存在，作為傷寒、副傷寒診斷的參考。原理傷寒桿菌有三種抗原：分別為菌體抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）、體表抗原（Vi抗原）。其中以O(shè)抗原及H抗原的抗原性較強(qiáng)，而Vi抗原的抗原性不強(qiáng)，且相應(yīng)抗體效價(jià)低且為時(shí)短暫，隨細(xì)菌的消除而消失，故不列為肥達(dá)試驗(yàn)的檢測項(xiàng)目。（但其檢查有助于發(fā)現(xiàn)傷寒帶菌者。）當(dāng)抗原遇到特異性抗體（抗O及抗H）時(shí)，便會(huì)發(fā)生凝集反應(yīng)，通過對凝集物量多少來推算病人體內(nèi)抗體的多少，以協(xié)助診斷、治療及判斷預(yù)后。值得一提的是：由于檢查抗體的肥達(dá)試驗(yàn)是一種間接診斷試驗(yàn)，故對結(jié)果的判斷要綜合分析。肥達(dá)試驗(yàn)陰性，亦不能排除患傷寒的可能。如有些傷寒患者，肥達(dá)試驗(yàn)始終陰性。17ppt課件正向間接凝集反應(yīng)如：類風(fēng)濕因子的檢測可溶性抗原載體顆?？贵w（凝集素）18ppt課件反向間接凝集反應(yīng)抗體可溶性抗原載體顆粒19ppt課件間接凝集抑制反應(yīng)如妊娠診斷試驗(yàn)檢測HCG凝集凝集抑制待檢樣品待檢樣品20ppt課件沉淀反應(yīng)21ppt課件液相內(nèi)沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)如法醫(yī)學(xué)血跡鑒定++——抗血清抗原抗原抗體22ppt課件凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)免疫擴(kuò)散技術(shù)免疫電泳技術(shù)單向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)火箭電泳對流電泳免疫電泳23ppt課件主要的免疫標(biāo)記物類別標(biāo)記物用途熒光素

FITC、RB200、TRITC免疫組化鑭系元素螯合物免疫分析測定放射性核素

3H、14C、32P、57Gr免疫分析測定

125I、131I酶

HRP、AP免疫組化免疫分析測定化學(xué)發(fā)光物L(fēng)uminol、lucigenin免疫分析測定金屬顆粒膠體金、鐵蛋白免疫組化免疫分析測定

24ppt課件標(biāo)記免疫技術(shù)的分類一、按測定用途分類：1、免疫組化技術(shù)2、免疫測定技術(shù)二、按標(biāo)記物分類：1、酶免疫技術(shù)2、熒光免疫技術(shù)3、放射免疫技術(shù)4、發(fā)光免疫技術(shù)5、金免疫技術(shù)25ppt課件免疫熒光技術(shù)26ppt課件直接法間接法補(bǔ)體法雙標(biāo)記法27ppt課件放射免疫分析28ppt課件結(jié)合相游離相29ppt課件酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA30ppt課件間接法31ppt課件夾心法32ppt課件競爭法33ppt課件二、免疫細(xì)胞檢測技術(shù)1、細(xì)胞表面標(biāo)志檢測2、細(xì)胞功能檢測3、細(xì)胞因子檢測34ppt課件常用的免疫細(xì)胞表面標(biāo)志檢測技術(shù)一、免疫標(biāo)記檢測1、熒光抗體法2、酶免疫檢測法3、免疫金銀染色法二、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）三、E花環(huán)形成試驗(yàn)35ppt課件SmIg的熒光抗體檢測法36ppt課件SmIg的酶免疫檢測法37ppt課件補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）染料補(bǔ)體38ppt課件1.補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗(yàn)(complementdependentcytotoxicity,CDC)基本步驟是分離純化外周血中的淋巴細(xì)胞，加一組已知的抗血清，20℃60分鐘后，再加家兔補(bǔ)體，37℃60分鐘后加染料觀察結(jié)果，如淋巴細(xì)胞被染色則為陽性，表明待檢淋巴細(xì)胞表面具有與已知抗血清相應(yīng)的抗原。

2.以HLA抗原I類抗原的血清學(xué)型為例。

美國國家衛(wèi)生研究院（NIH）的標(biāo)準(zhǔn)方法如下：將一系列已知特異性的標(biāo)準(zhǔn)分型血清（1μl/孔）按設(shè)計(jì)好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中（如暫時(shí)不用可以冰凍保存）；加入待檢淋巴細(xì)胞2000個(gè)/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合；加入補(bǔ)體（多為家兔混合血清）5μl，置室溫60min；每孔加入5％伊紅2～3μl，使死細(xì)胞著色；3～5min后每孔加12％福爾馬林8μl固定細(xì)胞；待細(xì)胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細(xì)胞超過50個(gè)即為陽性反應(yīng)，說明被檢細(xì)胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致；否則為不一致。

3.兔的補(bǔ)體在CDC免疫過程發(fā)揮怎樣的作用？

以你的小鼠CDC實(shí)驗(yàn)為例，小鼠的淋巴細(xì)胞+已知的抗體后，若細(xì)胞表面的抗原與已知抗體相互結(jié)合，加入補(bǔ)體后，補(bǔ)體與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，同時(shí)抗原抗體復(fù)合物活化補(bǔ)體，通過補(bǔ)體激活途徑溶解細(xì)胞，死細(xì)胞變大，染料進(jìn)入胞內(nèi)。39ppt課件E-花環(huán)T細(xì)胞B細(xì)胞花環(huán)形成細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞40ppt課件一、轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)1、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)2、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)二、細(xì)胞毒檢測1、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)2、NK活性測定3、ADCC作用測定常用的免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)41ppt課件放射性測定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)原理示意42ppt課件放射性測定細(xì)胞毒試驗(yàn)原理示意靶細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞分離上清43ppt課件可檢測的細(xì)胞因子白細(xì)胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干擾素（Interferon）——IFN-、IFN-、IFN-腫瘤壞死因子（Tumornecrosisfactor）——TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）——M-CSF、G-CSF轉(zhuǎn)化生長因子（Transforminggrowthfactor）——TGF-趨化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生長因子（Growthfactor）——EGF、FGF、IGF、PDGF44ppt課件細(xì)胞因子檢測的特點(diǎn)1、免疫原性較弱2、樣品含量低3、樣品具有時(shí)效性4、生物效應(yīng)特異性差45ppt課件細(xì)胞因子檢測的方法1、免疫標(biāo)記技術(shù)檢測——抗原性測定2、細(xì)胞生物學(xué)方法檢測——生物活性測定3、分子生物學(xué)技術(shù)檢測——mRNA表達(dá)測定46ppt課件特異性免疫獲得方式：自然免疫、人工免疫自然被動(dòng)免疫：如胎兒從母體獲得IgG嬰兒從母體獲得IgM自然自動(dòng)免疫：感染病原體后獲得免疫力人工自動(dòng)免疫:接種類毒素、疫苗等人工被動(dòng)免疫：注射抗毒素、丙種球蛋白等第二節(jié)

免疫預(yù)防47ppt課件

思考題：1.你知道注射“乙肝疫苗、卡介苗、白白破三聯(lián)疫苗”的目的是什么？機(jī)制？屬于何種免疫？2.你知道注射“丙球、胎盤球蛋白、抗毒素、IL-2、IFN”的目的是什么？機(jī)制？屬于何種免疫？3.注射疫苗和注射丙球等制劑獲得免疫力的方式各有什么特點(diǎn)？4．請你舉一個(gè)實(shí)例說明何時(shí)使用疫苗、何時(shí)使用丙球等制劑？理由及注意事項(xiàng)。48ppt課件人工免疫定義：根據(jù)特異性免疫應(yīng)答的原理，采用人工方法將Ag/Ab制成各種制劑，接種于人體，使其產(chǎn)生/獲得特異性免疫力，達(dá)到預(yù)防某些疾病的目的。分類：1、人工主動(dòng)免疫用疫苗或類毒素等抗原接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異免疫，從而預(yù)防感染的措施。

2、人工被動(dòng)免疫用抗體或細(xì)胞因子等制劑，使之獲得特異免疫，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。49ppt課件一、人工主動(dòng)免疫

(artificialactiveimmunity)：定義：人工主動(dòng)免疫將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機(jī)體產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。50ppt課件人工主動(dòng)免疫生物制劑：滅活疫苗（死疫苗）：選用免疫原性強(qiáng)的細(xì)菌，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死而成。減毒活疫苗：用減毒或無毒力的活病原體制成。類毒素：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛液作用3-4周后，毒性消失但仍保持免疫原性。亞單位疫苗：根據(jù)細(xì)菌抗原分析，查明不同致病菌的主要保護(hù)性免疫原存在的組分，然后將之制成的疫苗。DNA重組疫苗：通過DNA重組技術(shù)制備所需的疫苗。核酸疫苗：或稱DNA疫苗、基因疫苗，是將能編碼引起保護(hù)性免疫應(yīng)答的病原體免疫原基因片段和質(zhì)粒載體直接注射入宿主體以表達(dá)目的免疫原，進(jìn)而誘導(dǎo)出體液和細(xì)胞免疫的新型疫苗。治療性疫苗51ppt課件

1、疫苗

死疫苗與活疫苗的比較種類死疫苗活疫苗制劑性狀殺死病原體毒力減弱（無毒）的活病原體接種次數(shù)及量2-3次，用量大（間隔7-10天）1次，用量小穩(wěn)定性穩(wěn)定，易保存穩(wěn)定性差，不易保存副作用無毒力回復(fù)突變有毒力回復(fù)突變52ppt課件

2、類毒素（接種2次，吸收緩慢，間隔4-6周）

外毒素0.3-0.4%甲醛類毒素如：百-白-破精致吸附類毒素

3、新型疫苗1）亞單位疫苗：提取有效免疫原成分。(減少不良反應(yīng)，排除致癌的可能性）如HA、NA，HBSAg

53ppt課件2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。（無需培養(yǎng)微生物，可大量生產(chǎn)，無致癌、返祖的危險(xiǎn)性）3）基因工程疫苗圖示：編碼免疫原基因→載體→體內(nèi) ↓ 酵母菌、大腸桿菌（體外培養(yǎng)）如：重組抗原疫苗、重組載體疫苗、DNA疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗等54ppt課件人工主動(dòng)免疫注意事項(xiàng)接種對象：凡免疫力差、與病原體接觸機(jī)會(huì)多、疾病危害大、流行地區(qū)易感者。接種劑量、次數(shù)和間隔時(shí)間（計(jì)劃免疫程序表）接種途徑：皮內(nèi)、皮下、吸入、口服接種后反應(yīng)：24h內(nèi)局部紅腫、疼痛、淋巴結(jié)大；全身發(fā)熱、頭痛、惡心，數(shù)天恢復(fù)。禁忌癥：高熱、急性傳染病、嚴(yán)重心血管病、自身免疫病、免疫缺陷病。55ppt課件56ppt課件二、人工被動(dòng)免疫

(artificialpasstiveimmunity)人工被動(dòng)免疫定義：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時(shí)。但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生的，故維持時(shí)間短。主要用于治療或緊急預(yù)防。57ppt課件人工被動(dòng)免疫生物制品：抗毒素(antitoxin)：外/類毒素→馬→Ab丙種球蛋白：正常人血清或健康產(chǎn)婦胎盤中提取人特異性Ig：1.含高效價(jià)特異性抗體且超敏反應(yīng)發(fā)生率低

2.來源①恢復(fù)期病人，含高效價(jià)特異性抗體供血者血漿②接種疫苗/類毒素的免疫者血漿。58ppt課件人工被動(dòng)免疫注意事項(xiàng)：注意防止超敏反應(yīng)早期和足量不濫用丙球應(yīng)用范圍：易感人群、患者59ppt課件人工主動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的區(qū)別區(qū)別要點(diǎn)人工主動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫輸入物質(zhì)抗原抗體或細(xì)胞因子免疫生效時(shí)間慢，2-4周快，立即免疫維持時(shí)間長，數(shù)月-數(shù)年短，2-3周主要用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防區(qū)別點(diǎn)60ppt課件第三節(jié)免疫治療

概念：根據(jù)免疫學(xué)原理，應(yīng)用物理、化學(xué)和生物學(xué)的方法增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫機(jī)能，人為地糾正免疫異常狀態(tài)，達(dá)到治療的目的的措施。

61ppt課件分類（作用機(jī)制）：1、免疫增強(qiáng)療法免疫抑制療法

2、特異性免疫治療非特異性免疫治療

3、主動(dòng)免疫治療：主動(dòng)增強(qiáng)，“疫苗”，直接作用 被動(dòng)免疫治療：被動(dòng)增強(qiáng)，抗體、免疫效應(yīng)細(xì)胞、小分子免疫肽，間接作用，過繼免疫62ppt課件一抗體為基礎(chǔ)的免疫治療二抗原為基礎(chǔ)的免疫治療三細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療四細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療五免疫調(diào)節(jié)劑治療六免疫重建63ppt課件一、特異性被動(dòng)免疫治療

（抗體為基礎(chǔ)的免疫治療）定義：輸入特異性免疫效應(yīng)物質(zhì)，使機(jī)體立即獲得某種特定的免疫力，以達(dá)到治療目的。特點(diǎn)：見效快，維持時(shí)間短作用：緊急預(yù)防和治療傳染病、抗腫瘤和抗移植物排斥反應(yīng)。如：破傷風(fēng)、白喉抗毒素，丙種球蛋白抗病毒血清、抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白腫瘤特異性McAb（免疫導(dǎo)向療法）64ppt課件二、特異性主動(dòng)免疫治療

（抗原為基礎(chǔ)的免疫治療）定義：利用抗原性疫苗對機(jī)體進(jìn)行免疫接種，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答或免疫耐受，達(dá)到治療目的。特點(diǎn)：見效慢，維持時(shí)間長作用：預(yù)防傳染病、抗腫瘤。如：卡介苗、乙肝V多肽疫苗、流感V亞單位疫苗、腫瘤疫苗65ppt課件三、非特異性免疫治療

（細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療）定義：采用非特異性免疫調(diào)節(jié)劑（如細(xì)胞因子及其拮抗劑）來調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能失衡的狀況，以達(dá)到治療或輔助治療的目的。BRM：（生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑）調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，抵抗病原微生物或癌細(xì)胞的侵襲。66p