藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)與設(shè)計(jì)-課件

藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)與設(shè)計(jì)2020/12/171ppt課件一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的三個(gè)基本要素處理因素實(shí)驗(yàn)對(duì)象實(shí)驗(yàn)效應(yīng)2020/12/172ppt課件精品資料你怎么稱呼老師？如果老師最后沒有總結(jié)一節(jié)課的重點(diǎn)的難點(diǎn)，你是否會(huì)認(rèn)為老師的教學(xué)方法需要改進(jìn)？你所經(jīng)歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽曬，也不怕那風(fēng)雨狂，只怕先生罵我笨，沒有學(xué)問無顏見爹娘……”“太陽當(dāng)空照，花兒對(duì)我笑，小鳥說早早早……”根據(jù)研究目的由實(shí)驗(yàn)者施加給受試對(duì)象的因素。(一)處理因素藥物1.處理因素的標(biāo)準(zhǔn)化有來源、批號(hào)、劑型、給藥途徑、給藥劑量等2.處理因素的數(shù)量、水平與設(shè)計(jì)分單、多因素設(shè)計(jì)，單、多水平設(shè)計(jì)等。3.消除非處理因素干擾年齡、性別等，注意構(gòu)成比，要一致。2020/12/175ppt課件(二)實(shí)驗(yàn)對(duì)象

整體動(dòng)物：正常動(dòng)物、麻醉動(dòng)物、病理模型 離體器官：子宮、心臟、小腸 組織：肛尾肌、血管條 細(xì)胞：肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞2020/12/176ppt課件動(dòng)物種屬的選擇 中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物—猴抗過敏藥物—豚鼠2.正常動(dòng)物選擇的一般原則

(1)年齡、體重 如小鼠18-28g,大鼠180-280g,兔2-3kg (2)性別 藥效多有差異

(3)生理與健康狀況 需動(dòng)物合格證、上崗證2020/12/177ppt課件(三)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)（指標(biāo)）

1.指標(biāo)分類及統(tǒng)計(jì)方法計(jì)數(shù)指標(biāo)（定性指標(biāo)） 如驚厥或不驚厥、死亡或存活等。用2方檢驗(yàn)。計(jì)量指標(biāo)（定量指標(biāo)） 如血壓值、酶活性單位、時(shí)間等。用t-檢驗(yàn)、ANOVA、配對(duì)檢驗(yàn)等。2020/12/178ppt課件2.注意事項(xiàng)(1)特異性能反映某一特定現(xiàn)象且不與其他現(xiàn)象相混淆。(2)客觀性易于量化的、經(jīng)過儀器測(cè)量和檢驗(yàn)而獲得的。(3)

重復(fù)性在相同條件下指標(biāo)可以重復(fù)出現(xiàn)。2020/12/179ppt課件靈敏性根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求相應(yīng)顯示出微小的變化，由實(shí)驗(yàn)方法和儀器的靈敏度共同決定(5)可行性既有文獻(xiàn)依據(jù)，又符合本實(shí)驗(yàn)室條件和研究者實(shí)際水平。2020/12/1710ppt課件二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的三個(gè)基本原則

對(duì)照原則隨機(jī)原則重復(fù)原則2020/12/1711ppt課件(一)對(duì)照原則以消除各非處理因素的干擾實(shí)驗(yàn)對(duì)象來源、種屬、性別、年齡、體重構(gòu)成等要一致。實(shí)驗(yàn)室條件和方法也要一致。2020/12/1712ppt課件(1)空白對(duì)照(正常對(duì)照，陰性對(duì)照)

在不加任何處理?xiàng)l件下所設(shè)的對(duì)照

(2)實(shí)驗(yàn)對(duì)照(模型對(duì)照)

在某種有關(guān)實(shí)驗(yàn)條件下所設(shè)的對(duì)照，如動(dòng)物模型(3)自身對(duì)照用同體實(shí)驗(yàn)前資料作為對(duì)照(4)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照(陽性對(duì)照)

用已證實(shí)有效或已批準(zhǔn)上市的藥物作為對(duì)照(5)相互對(duì)照實(shí)驗(yàn)中各實(shí)驗(yàn)組互為對(duì)照2020/12/1713ppt課件常見動(dòng)物分組：(1)正常對(duì)照組(2)模型對(duì)照組(3)受試藥小劑量組(4)受試藥中劑量組(5)受試藥大劑量組(6)陽性藥對(duì)照組2020/12/1714ppt課件(二)隨機(jī)原則

使每個(gè)研究對(duì)象有同等的機(jī)會(huì)被分配到各組中，以均分樣本的生物差異。2020/12/1715ppt課件常用方法:

(1)簡化分層隨機(jī)法常用于單因素小樣本的一般實(shí)驗(yàn)。即將同一性別動(dòng)物按體重大小順序排列，分組時(shí)由體重小的到大的按次序隨機(jī)分到各組。在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中體重不宜相差過大。一種性別的動(dòng)物分配完后，再分配另一性別的動(dòng)物。各組雌雄性別數(shù)目應(yīng)一致。

2020/12/1716ppt課件

完全隨機(jī)法主要用于單因素大樣本的實(shí)驗(yàn)。先將樣本編號(hào)后，按隨機(jī)數(shù)字表任取一段數(shù)字，依次排序各樣本。然后按這些新號(hào)碼的奇偶(兩組)或除以組數(shù)后的余數(shù)(兩組以上)作為分配歸入的組次。最后仍同前再隨機(jī)調(diào)整，以使各組樣本數(shù)達(dá)到均衡。

2020/12/1717ppt課件(三)重復(fù)原則

一般而言，計(jì)量資料的樣本數(shù)每組不少于5例，以10–20例為好。計(jì)數(shù)資料的樣本數(shù)則需每組不少于10例，以30例為好。

表9-1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)每組所需的樣本數(shù)

動(dòng)物計(jì)量資料計(jì)數(shù)資料小(小鼠、大鼠、蛙)≥10≥30中(兔、豚鼠)≥6≥20大(犬、貓)≥5≥102020/12/1718ppt課件三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的步驟與內(nèi)容2020/12/1719ppt課件1.查閱文獻(xiàn)，確定選題和提出立題依據(jù)注意科學(xué)性、創(chuàng)新性和可行性。2.明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)步驟以完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)、隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)多見。3.進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢查各項(xiàng)準(zhǔn)備工作是否完備，實(shí)驗(yàn)方法和步驟是否切實(shí)可行，測(cè)試指標(biāo)是否穩(wěn)定可靠，以便調(diào)整或修改設(shè)計(jì)方案，確定正式實(shí)驗(yàn)條件。

2020/12/1720ppt課件設(shè)計(jì)內(nèi)容包括：

(1)確定受試藥給藥途徑、給藥劑量

(2)選擇實(shí)驗(yàn)對(duì)象

(3)確定動(dòng)物模型

(4)確定樣本例數(shù)及分組方法

(5)確定觀察時(shí)間、指標(biāo)及測(cè)定方法

(5)擬定數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法2020/12/1721ppt課件四、藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)范例與實(shí)踐2020/12/1722ppt課件【立題依據(jù)】患者反映使用X藥期間伴有血壓升高現(xiàn)象，己有資料證實(shí)該藥無直接影響心臟泵血功能的作用，也未見有升血壓的報(bào)道，其升壓作用推測(cè)與血管收縮或血量增多有關(guān)。

【目的】初步驗(yàn)證該藥的升壓效應(yīng)，并探索其升壓機(jī)制。

【藥品】X藥(要求配好濃度)。

【儀器】D-951信號(hào)接收系統(tǒng)(含壓力換能器)，動(dòng)物手術(shù)器械。

【動(dòng)物】家兔。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)X藥對(duì)家兔動(dòng)脈血壓的影響2020/12/1723ppt課件【方法】取家兔1只，稱重，耳緣靜脈用3%戊巴比妥鈉緩慢注射常規(guī)麻醉，分離頸動(dòng)脈，插入聯(lián)接D-951信號(hào)接收系統(tǒng)的壓力傳感器，測(cè)動(dòng)脈壓(指標(biāo))，實(shí)驗(yàn)采用自身對(duì)照及拉丁方設(shè)計(jì)。

【分組】實(shí)驗(yàn)分為①甲藥組；②受體阻斷藥1＋X藥組；③受體阻斷藥2＋X藥組。

【預(yù)期結(jié)果】X藥有升血壓作用，并可能通過某受體起作用。

2020/12/1724ppt課件

【目的】觀察肝功能損傷對(duì)戊巴比妥鈉作用的影響。【器材】天平，1ml注射器，組織剪?！舅幤贰?5％四氯化碳油溶液，0.15％戊巴比妥鈉?！緞?dòng)物】小白鼠?！痉椒ā吭趯?shí)驗(yàn)前24h先取小鼠2只，25％四氯化碳油溶液灌胃0.1ml/10g造成肝損傷。實(shí)驗(yàn)時(shí)取給予四氯化碳小鼠和正常小鼠各2只，均腹腔注射0.15％戊巴比妥鈉0.2ml/10g，觀察動(dòng)物反應(yīng)。記錄各鼠翻正發(fā)射消失和恢復(fù)時(shí)間，并計(jì)算入睡時(shí)間和睡眠時(shí)間?！窘Y(jié)果】將所觀察的實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（二）實(shí)驗(yàn)八肝損傷對(duì)藥物作用的影響2020/12/1725ppt課件表8肝功能損傷對(duì)戊巴比妥鈉作用的影響鼠號(hào)肝損傷狀態(tài)入睡時(shí)間(min)睡眠時(shí)間(min)肝臟外觀

1

2

2020/12/1726ppt課件表8肝功能損傷對(duì)戊巴比妥鈉作用的影響鼠號(hào)肝損傷狀態(tài)入睡時(shí)間(min)睡眠時(shí)間(min)肝臟外觀

1

正常

5

30

暗紅

2

肝損傷

2

10

蒼白2020/12/1727ppt課件

【目的】了解大劑量可拉明的中毒表現(xiàn)——驚厥，觀察巴比妥類藥物的抗驚厥作用?！酒鞑摹?50ml燒杯，鐵絲籠，1ml注射器，注射針頭?！舅幤贰?%苯巴比妥鈉，5%可拉明，0.5%戊巴比妥鈉【方法】取體重相近的小白鼠3只，稱重，編號(hào)。1號(hào)鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g，2號(hào)鼠腹腔注射2%苯巴比妥鈉溶液0.1ml/10g，15min后3只鼠同時(shí)皮下注射5%可拉明溶液0.1ml/10g，待發(fā)生驚厥后

(以后肢強(qiáng)直為驚厥指標(biāo))，3號(hào)鼠立即腹腔注射0.5%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g，1號(hào)鼠不再給藥。觀察3只鼠出現(xiàn)的癥狀?！窘Y(jié)果】將所觀察的實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（三）實(shí)驗(yàn)十九巴比妥類藥物的抗驚厥作用2020/12/1728ppt課件表19巴比妥類藥物對(duì)可拉明所致小鼠驚厥作用的影響鼠號(hào)藥

物劑量(mg/kg)驚厥反應(yīng)死亡情況1生理鹽水

2苯巴比妥鈉

3戊巴比妥鈉

2020/12/1729ppt課件表19巴比妥類藥物對(duì)可拉明所致小鼠驚厥作用的影響鼠號(hào)藥

物劑量(mg/kg)驚厥反應(yīng)死亡情況1生理鹽水

/有

有2苯巴比妥鈉

200

無無3戊巴比妥鈉

50

有無2020/12/1730ppt課件【目的】通過制備急性腎功能衰竭的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，以及選擇有效的觀察指標(biāo)，證實(shí)A藥在急性腎功能衰竭的治療作用。【藥品】慶大霉素、維拉帕米、生理鹽水。【試劑】尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)試劑盒，甲醛?！緝x器】低速離心機(jī)，分光光度計(jì)。【動(dòng)物】雄性Wistar大鼠。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（四）X藥對(duì)急性腎功能衰竭作用的影響2020/12/1731ppt課件【方法與指標(biāo)】取健康雄性Wistar大鼠40只，體重250~300，隨機(jī)分成模型對(duì)照組，X藥小劑量、中劑量、大劑量組和維拉帕米對(duì)照組。將大鼠置于代謝籠中，收集并記錄24h正常尿量。各組大鼠腹腔注射慶大霉素140mg/kg，連續(xù)7日。于注射慶大霉素的同時(shí)，分別經(jīng)口灌胃(ig)小、中、大劑量X藥和維拉帕米ig15mg/kg，模型對(duì)照組ig等容量生理鹽水。于末次注射慶大霉素后，收集24h總尿量，并斷頭處死動(dòng)物。取血制備血清，測(cè)定血清BUN和Cr。剖腹取腎，經(jīng)10%甲醛固定后，常規(guī)制片，進(jìn)行組織學(xué)檢查?！窘y(tǒng)計(jì)】血清BUN、Cr和24h總尿量采用組間t檢驗(yàn)，腎組織切片采用光鏡觀察。2020/12/1732ppt課件實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（五）

當(dāng)歸注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性IUGR的保護(hù)作用及機(jī)制2020/12/1733ppt課件實(shí)驗(yàn)材料 市售香煙，武漢卷煙廠生產(chǎn)，烤煙型，焦油含量15mg，煙堿含量1.1mg。

25%當(dāng)歸注射液由武漢大學(xué)中南醫(yī)院生產(chǎn)，批號(hào)：030322。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠，雌:雄=2:1

雌性：180~200g，雄性：200-250g2020/12/1734ppt課件動(dòng)物處理 參照文獻(xiàn)，采用被動(dòng)吸煙法，并進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)。 受孕:大鼠于每日6PM雌雄合籠(2:1),次晨6AM觀察陰栓,觀察到陰栓者為受孕0天。

IUGR動(dòng)物模型：模型對(duì)照組從孕7天起被動(dòng)吸煙,每天置于煙氣中4次(8AM,12AM,2PM,5PM),每次15min。被動(dòng)吸煙時(shí)孕鼠置于0.02m3半封閉容器內(nèi)，2min內(nèi)連續(xù)抽吸0.3只香煙，煙霧濃度10g/m3。正常對(duì)照組每天同時(shí)半封閉容器內(nèi)4次,每次15min。 標(biāo)本采集：妊娠第20天，2%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉。剖腹取胎，留取胎盤。2020/12/1735ppt課件動(dòng)物分組

A：正常對(duì)照組(生理鹽水20ml/kg) B：模型對(duì)照組(生理鹽水20ml/kg) C：當(dāng)歸注射液小劑量組(0.125g生藥/kg，20ml/kg，ig) D：當(dāng)歸注射液中劑量組(0.25g生藥/kg，20ml/kg，ig) E：當(dāng)歸注射液大劑量組(0.5g生藥/kg，20ml/kg，ig) F:陽性對(duì)照組(復(fù)方丹參注射液10ml/kg，ig)

均于孕14天起給藥，直至孕20天。2020/12/1736ppt課件觀察指標(biāo)一般指標(biāo)孕鼠體重情況、仔鼠生產(chǎn)情況、胎盤重量胎盤功能指標(biāo) 胎盤催乳素(hPL)（放免法） 雌三醇(E3)（放免法）

-絨毛膜促性腺激素(-HCG)（放免法）胎盤病理學(xué)檢查 2020/12/1737ppt課件氧化與抗氧化酶活性胎盤MDA含量、GSH含量 胎盤SOD、GSH-Px和Cat活性血液流變學(xué)指標(biāo)全血：全血(低、中、高切)、全血還原(低、中、高切)

紅細(xì)胞：壓積、聚集指數(shù)、剛性指數(shù)、變形指數(shù)血小板：聚集率(1、2、3)胎盤代謝酶和胎盤P-gp表達(dá)

CYP1A1活性（酶學(xué)方法）

CYP1A1和P-gpmRNA表達(dá)（RT-PCR法）

P-gp表達(dá)（免疫組化法）2020/12/1738ppt課件實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（六）

大蒜多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

中毒性心肌炎的保護(hù)作用2020/12/1739ppt課件第一部分大蒜多糖對(duì)大鼠原代心肌細(xì)胞中毒性心肌炎的作用2020/12/1740ppt課件實(shí)驗(yàn)步驟：1、心肌細(xì)胞的分離和培養(yǎng)2、心肌炎模型的建立3、分組及大蒜多糖的處理4、標(biāo)本收集及指標(biāo)測(cè)定2020/12/1741ppt課件剪碎，胰酶消化新生SD大鼠心臟終止消化，離心收集細(xì)胞組織塊進(jìn)一步消化差速貼壁法收集心肌細(xì)胞，計(jì)數(shù)，接種加入不同濃度的阿霉素不同時(shí)間內(nèi)測(cè)定生化指標(biāo)1、心肌細(xì)胞培養(yǎng)和心肌炎模型的建立2020/12/1742ppt課件細(xì)胞分組及大蒜多糖的處理 細(xì)胞分組：正常對(duì)照組 阿霉素模型對(duì)照組 小劑量大蒜多糖組 中劑量大蒜多糖組 大劑量大蒜多糖組

VitE陽性對(duì)照組心肌細(xì)胞培養(yǎng)48h后，貼壁的心肌細(xì)胞簇開始搏動(dòng)，觀察細(xì)胞簇搏動(dòng)頻率情況至72h后，加入不同濃度大蒜多糖及VitE，1h后加入阿霉素，繼續(xù)培養(yǎng)24h，用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞搏動(dòng)百分比及搏動(dòng)頻率。2020/12/1743ppt課件標(biāo)本收集及分析 上清乳酸脫氫酶釋放量（丙酮法） 胞內(nèi)超氧化物歧化酶活力（聯(lián)苯三酚法） 胞內(nèi)丙二醛含量（硫代巴比妥比色法） 胞內(nèi)游離Ca2＋濃度 細(xì)胞凋亡（流式細(xì)胞儀）2020/12/1744ppt課件第二部分大蒜多糖對(duì)小鼠急性中毒性心肌炎的作用2020/12/1745ppt課件實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠60只，雌雄各半，每組10只。動(dòng)物造模 給藥第4天20mg/kg阿霉素腹腔注射。動(dòng)物分組及處理 正常對(duì)照組（NS10ml/kg，qd10

） 模型對(duì)照組（NS10ml/kg，qd10

） 大蒜多糖小劑量組（1g/kg，qd10） 大蒜多糖中劑量組（2g/kg，qd10

） 大蒜多糖大劑量組（4g/kg，qd10

）

VitE陽性對(duì)照組（0.4g/kg，