中藥制劑的檢查1課件

第四章中藥制劑的檢查第一節(jié)中藥制劑中的雜質檢查一、雜質及其來源中藥制劑評價：首先是效力及其副作用；其次是所含雜質的程度及其影響。

雜質的分類：一般雜質，檢查方法均在藥典附錄中加以規(guī)定。特殊雜質，在藥典中列入個別制劑的檢查項下。

雜質來源：一是由中藥材原料中帶入；二是在生產(chǎn)制備過程中引入；三是貯存過程中，制劑的理化性質改變而產(chǎn)生。

二、雜質限量的控制藥典中規(guī)定的雜質檢查均為限量(或限度)檢查(LimitTest)，雜質限量是指藥物中所含雜質的最大允許量。限量檢查：取一定量與被檢雜質相同的純物質或其它對照品配制成標準溶液，與一定量供試藥物的溶液，在相同處理條件下，比較反應結果，從而確定雜質限量是否超過規(guī)定。三、一般雜質的檢查方法(一)重金屬檢查法重金屬是指在一定條件下的溶液中，能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用，生成不溶性硫化物的金屬雜質。在酸性溶液中檢查重金屬，以硫代乙酰胺作為顯色劑；在堿性溶液中，則用硫化鈉試劑作為顯色劑；凡溶于堿不溶于稀酸的藥物，均在堿性溶液中以硫化鈉試液作為顯色劑。

標準鉛溶液的制備稱取硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液lOml，置lOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當于lOug的Pb)。

配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。第一法除另有規(guī)定外，取25ml納氏比色管兩支，甲管中加一定量標準鉛溶液與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml后，加水或該藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml，乙管中加入該藥品項下規(guī)定的方法制成的供試液25ml；若供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，使之與乙管一致；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。

供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時，可取該藥品項下規(guī)定方法制成的供試液，加抗壞血酸0.5-1.0g，并在對照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。

配制供試品溶液時，如使用的鹽酸超過1.0ml(或與鹽酸1.0ml相當?shù)南←}酸)，氨試液超過2ml，或加入其他試劑進行處理者，除另有規(guī)定外，對照液中應取同樣同量的試劑量瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加一定量標準鉛溶液，再用水稀釋成25ml第二法除另有規(guī)定外，取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后(或取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5～1.0ml，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500～600℃熾灼使完全灰化)，放冷，加鹽酸2m1，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml，另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標準鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml；照第一法檢查即得。

第三法除另有規(guī)定外，取供試品適量，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置納氏比色管中，加硫化鈉試液5滴，搖勻，與一定量的標準鉛溶液同樣處理后的顏色比較，不得更深。

第四法標準鉛斑法見“中藥制劑分析”P98-99。

(二)砷鹽檢查法標準砷溶液的制備稱取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20％氫氧化鈉溶液5ml溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每lml相當于1ug的As)。

1．古蔡法

(1)原理：采用鋅和酸作用產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應生成揮發(fā)性砷化氫，再與溴化汞或氧化汞試紙作用生成黃色或棕黃色砷斑。比較供試品與標準砷溶液在同一條件下所顯的砷斑的顏色深淺，以測得供試品的含砷限度。反應式如下：

As033-

+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H20As033-+4Zn+llH+→AsH3↑

+4Zn2++4H20產(chǎn)生砷化氫與溴化汞試紙作用

AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(黃色)2As(HgBr)3+AsH3→3AsH(HgBr)2(棕色)

As(HgBr)3+AsH3→3HBr+As2Hg3(黑色)

(2)儀器裝置

A為100ml標準磨口錐形瓶，B為標準磨口塞，C為導氣管(外徑8.0mm，內徑6.0mm)，長約180mm，D為有機玻璃旋塞，其上部為圓形平面，中央有一孔徑與C內徑一致的圓孔，其下部孔徑與C的外徑相適應，將C的頂端套入D下部孔內，粘合固定，E為中央具有圓孔(孔徑6.0mm)的有機玻璃旋塞蓋，與D緊密吻合。測試時，于C中裝入醋酸鉛棉花60mg(裝管高度為60—80mm)，再于D的頂端平面上放一片溴化汞試紙，蓋上旋塞蓋E并旋緊，即得。

(3)標準砷斑的制備精密量取標準砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置25～40℃水浴中，反應45分鐘，取出溴化汞紙試，即得。若供試品需經(jīng)有機破壞后再行檢砷，則應取標準砷溶液代替供試品，照各藥品項下規(guī)定的方法同法處理后，依法制備標準砷斑。

（4）檢查法取照各藥品項下規(guī)定方法制成的供試液，置A瓶中，照標準砷斑的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深。

（5）注意事項

中國藥典中規(guī)定砷斑為2ugAs(即取2ml標準砷液)。供試品中砷的限度各有不同，可按規(guī)定，改變供試品的取用量，來與標準砷斑比較。但不宜改變標準砷的量(如未指明時，一般常以2ml標準砷液)。碘化鉀試液不得超過10日，酸性氯化亞錫不得超過3個月，鋅粒應無砷，以能通過一號篩的細粒為宜。藥典采用堿破壞法—石灰法：取一定量的供試品，加入等量的無砷氫氧化鈣混勻后，加水濕潤，烘干，在小火上小心熾灼至煙霧除盡，移入高溫爐中在500～600℃熾灼至灰化，取出放冷，加蒸餾水5ml，再緩緩加入鹽酸5ml及濃溴液數(shù)滴，置水浴上加熱至溶液中的紅色溴驅盡，滴加氯化亞錫試液數(shù)滴，再全部轉入測砷瓶中，一般不含硫的檢品可不加濃溴液，只需加鹽酸5ml即轉入測砷瓶中，依法測定，作空白試驗校正。操作注意點：熾灼溫度以600℃左右較為合適；一定要灰化完全。

2.二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）

1）原理利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中銀還原為紅色的膠態(tài)銀，其反應如下：

AsH3+6Ag-DDC→AsAg3·3Ag-DDC+3HDDCAsAg3·3Ag-DDC+3C5H5N+3HDDC→Ag(DDC)3+6Ag+3C5H5N-HDDC

2）儀器裝置

A為100ml標準磨口錐形瓶，B為中空的標準磨口塞，上連導氣管C(一端的外徑為8mm，內徑為6mm，另一端長180mm，外徑4mm，內徑1.6mm，尖端內徑為lmm)。D為平底玻璃管(180mm，內徑10mm，于5.0ml處有一刻度)。測試時，于導氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg(裝管高度約80mm)，并于D管中精密加入Ag-DDC試液5ml。

標準砷對照液的制備精密量取標準砷溶液5ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將導氣管C與A瓶密塞，使生成的砷化氫氣體導入D管中，并將A瓶置25～40℃水浴中反應45分鐘，取出D管，添加氯仿至刻度，混勻，即得。若供試品需經(jīng)有機破壞后再行檢砷，則應取標準砷溶液代替供試品，照各藥品項下規(guī)定的方法同法處理后，依法制備標準砷對照液。

檢查法取照各藥品項下規(guī)定方法制成的供試液，置A瓶中，照標準砷對照液的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作。將所得溶液與標準砷對照液同置白色背景上，從D管上方向下觀察、比較，所得溶液的顏色不得比標準砷對照液更深。必要時，可將所得溶液轉移至lcm吸收池中，用適宜的分光光度計或比色計在510nm波長處以二乙基二硫代氨基甲酸銀試液作空白，測定吸收度，與標準砷對照液按同法測得的吸收度比較，即得。(三）鐵鹽檢查法

標準鐵溶液的制備稱取硫酸鐵銨0.863g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當于10ug的Fe)。

檢查法除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml，移置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35ml后，加30％硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻；如顯色，立即與標準鐵溶液一定量制成的對照溶液(取各藥品項下規(guī)定量的標準鐵溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成25ml，……)比較，即得。如供試管與對照管色調不一致時，可分別移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，分層后，將正丁醇層移置50ml納氏比色管中，再用正丁醇稀釋至25ml，比較，即得。

第二節(jié)藥典規(guī)定中藥制劑的檢查項目

一、干燥失重測定法取供試品，混合均勻（若供試品為較大結晶，應先迅速搗碎成2mm以下的小粒）。分取約1g或各藥品項下規(guī)定重量，置與供試品同樣條件下干燥至恒重的扁形稱瓶中，精密稱定，除另有規(guī)定外，照各藥品項下規(guī)定的條件干燥至恒重。從減失的重量和取樣量計算供試品的干燥失重。供試品干燥時，應平鋪在扁形稱量瓶中，厚度不可超過5mm，如為疏松物質，厚度不可超過10mm，干燥時應將瓶蓋取下，置于稱量瓶旁，或將瓶蓋半開進行干燥；取出時，須將瓶蓋好。在每次干燥后應先置干燥器內放冷至室溫，然后稱定重量。如供試品未達到規(guī)定的干燥溫度即融化時，應先將供試品置較低的溫度中，干燥至大部分水份除去后，再按規(guī)定條件下干燥。當用減壓干燥器時，除另有規(guī)定外，壓力應在2.67kPa以下；干燥器中常用的干燥劑為無水氯化鈣、硅膠或五氧化二磷，減壓干燥器中常用的干燥劑為五氧化二磷。二、水分測定法

中國藥典一部收載三種方法：烘干法，甲苯法，減壓干燥法。藥典規(guī)定，一般將供試品先破碎成直徑不超過3mm的顆?；蛩槠?破碎時不得用高速粉碎機)。直徑和長度在3mm以下者不可破碎。如使用減壓干燥法需先經(jīng)二號篩。

1．烘干法本法適用于不含或含少量揮發(fā)性成分的藥品。取供試品2～5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，疏松樣品不超過10mm，精密稱定，打開瓶蓋在100～105℃干燥5小時，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量，再在上述溫度干燥1小時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量。計算供試品中含有水分的百分數(shù)。

2．甲苯法本法適用于含揮發(fā)性成分的藥材。

儀器裝置如圖。A為500mL的短頸圓底燒瓶，B為水分測定管；C為直形冷凝管，外管長40cm。使用前，全部儀器應清潔，并置烘箱中烘干。

測定法：取供試品適量(約相當于含水量1～4mL)精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200mL，必要時加入玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細部分。將A瓶置電熱套中或其它適當方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時，調節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，將冷凝管內部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長刷或其他適當方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水粘附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離。檢讀水量，并計算成供試品中含有水分的百分數(shù)。

3．減壓干燥法本法適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。先取直徑12cm的培養(yǎng)皿，加入新鮮五氧化二磷干燥劑適量，使鋪成0.5～1cm的厚度，放入直徑30cm的減壓干燥器中。然后取供試品2-4g，混合均勻。分取約0.5-1g，置已在與供試品相同條件下干燥并稱重的瓶中，精密稱定，打開瓶蓋，放入上述減壓干燥器中，減壓至2.67kPa以下持續(xù)半小時，室溫放置24小時，在減壓干燥器出口連接新鮮無水氯化鈣干燥管，打開活塞，待內外壓一致，關閉活塞，打開干燥器，蓋上瓶蓋，取出稱量瓶迅速精密稱定重量，計算供試品中含有水分的百分數(shù)。三、灰分測定法

1.總灰分測定法測定前先將供試品稱取適量粉碎，使其能通過2號篩，將粉末混合均勻后，稱取供試品2～3g(如需測定酸不溶性灰分，可取供試品3～5g)，置于熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準確至0.01g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全炭化并至恒重，根據(jù)殘渣重量，即可計算供試品中含灰分的百分數(shù)。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10％硝酸銨溶液2mL；使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，殘渣照前法熾灼至坩堝內容物完全灰化。

2.酸不溶性灰分測定法取上項所得灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸10mL，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱水5mL沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應為止。濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含酸不溶性灰分的百分數(shù)。

四、熾灼殘渣檢查法

取供試品1.0～2.0g或各藥品項下規(guī)定的重量，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，除另有規(guī)定外，加硫酸0.5～1mL使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在700～800℃使完全灰化，移置干燥器內，放冷，精密稱定后，再在700～800℃熾灼至恒重，即可。如需將殘渣留作重金屬檢查，則熾灼溫度必須控制在500～600℃。

五、乙醇量測定法本法系用氣相色譜法測定各種制劑中在20℃時含有乙醇的容量百分數(shù)。除另有規(guī)定外，按下列方法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用直徑為0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為載體，柱溫為120～150℃；另精密量取無水乙醇4、5、6ml，分別精密加入正丙醇(內標物)5ml，加水稀釋成100ml，混勻(必要時可進一步稀釋)，照氣相色譜法測定，應符合下列要求：(1)用正丙醇計算的理論板數(shù)應大于700；(2)乙醇和正丙醇兩峰的分離度應大于2；(3)上述3份溶液各注樣5次，所得15個校正因子的變異系數(shù)不得大于2.0％。

標準溶液的制備精密量取恒溫至20℃的無水乙醇和正丙醇各5ml，加水稀釋成lOOml，混勻，即得。

供試溶液的制備精密量取恒溫至20℃的供試品適量(相當于乙醇約5m1)和正丙醇5ml，加水稀釋成lOOml，混勻，即得。上述兩溶液必要時可進一步稀釋。

測定法取標準溶液和供試溶液適量，分別連續(xù)注樣3次，并計算出校正因子和供試品的乙醇含量，取3次計算的平均值作為結果。

附注

(1)在不含內標物質的供試溶液的色譜圖中，與內標物質峰相應的位置處應不出現(xiàn)雜質峰，(2)標準溶液和供試溶液各連續(xù)3次注樣所得各次校正因子和乙醇含量與其相應的平均值的相對偏差，均不得大于1.5％，否則應重新測定。(3)選用其他載體時，系統(tǒng)適用性試驗必須符合本法規(guī)定。六、相對密度測定法

相對密度系指在共同特定的條件下，某物質的密度與水的密度之比。除另有規(guī)定外，溫度為20℃。

液體藥品的相對密度，一般用比重瓶進行測定，測定易揮發(fā)的液體的相對密度時，可用韋氏比重秤進行測定。

比重瓶法(1)取潔凈、干燥并精密稱定重量的比重瓶，裝滿供試品(溫度應低于20℃或各藥品項下規(guī)定的溫度)后，裝上溫度計(瓶中應無氣泡)，置20℃(或各藥品項下規(guī)定的溫度)的水浴中放置10-20分鐘，使內容物的溫度達到20℃(或各藥品項下規(guī)定的溫度)，用濾紙除去溢出側管的液體，立即蓋上罩。然后將比重瓶自水浴中取出，再用濾紙將比重瓶的外面擦干，精密稱定，減去比重瓶的重量，求得供試品的重量后，將供試品傾去，洗凈比重瓶，裝滿新沸過的冷水，再照上法測得同一溫度時水的重量，按下式計算，即得。供試品的相對密度＝供試品重量/水重量

(2)取潔凈、干燥并精密稱定重量的比重瓶，裝滿供試品(溫度應低于20℃或各藥品項下規(guī)定的溫度)后，置20℃(或各藥品項下規(guī)定的溫度)的水浴中，放置10～20分鐘，插入中心有毛細孔的瓶塞，使過多的液體從塞孔溢出，并用濾紙將瓶塞頂端擦干，照上述(1)法，自“然后將比重瓶自水浴中取出”起測定，即得。

韋氏比重秤法取20℃時相對密度為1的韋氏比重秤，用新沸過的冷水將所附玻璃圓筒裝至八分滿，置20℃(或各藥品項下規(guī)定的溫度)的水浴中，攪動玻璃圓筒內的水，調節(jié)溫度至20℃(或各藥品項下規(guī)定的溫度)，將懸于秤端的玻璃錘浸入圓筒內的水中，秤臂右端懸掛游碼于1.0000處，調節(jié)秤臂左端平衡用的螺旋使平衡，然后將玻璃圓筒內的水傾去，拭干，裝入供試液至相同的高度，并用同法調節(jié)溫度后，再把拭干的玻璃錘浸入供試液中，調節(jié)秤臂上游碼的數(shù)量與位置使平衡，讀取數(shù)值，即得供試品的相對密度。

如該比重秤系在4℃時相對密度為1，則用水校準時游碼應懸掛于0.9982處，并應將在20℃測得的供試品相對密度除以0.9982。第三節(jié)黃曲霉毒素B1檢查法黃曲霉毒素的測定方法，目前采用薄層色譜法、微柱色譜法和薄層色譜結合熒光分光光度法，還采用高壓液相色譜法測定。

一般采用薄層色譜法和微柱色譜法。

微柱法主要用作大批樣品的篩選用。若微柱法測定結果發(fā)現(xiàn)毒素可能超過允許含量，緊接著應該做薄層色譜怯的確證實驗。一、微柱法本法簡便，快速，靈敏度為10μg/kg。主要做中藥制劑中黃曲霉毒素篩選用，測得結果為黃曲霉毒素的總量。

1．原理將樣品提取液通過氧化鋁-硅鎂型吸附劑填充的微柱，樣品中的雜質被氧化鋁吸附，黃曲霉毒素則被硅鎂型吸附劑吸附。在紫外分析燈下觀察熒光環(huán)與標準比較定量。

2.玻璃微柱管制法玻璃微柱管長12cm，內徑0.4cm玻璃管。在微柱管下端塞入棉花一小團，使松緊適宜，作為支持物。依次從管的上口加入無水硫酸鈉0.5cm，硅鎂型吸附劑0.5cm，無水硫酸鈉0.5cm，中性氧化鋁2.5cm，無水硫酸鈉1cm厚，再鋪一層棉花。裝管時，管要垂直放置在層析架上，每裝一種試劑要輕輕敲擊使之緊密。微柱管應在臨用前裝填或保存于干燥器中供用，以免減低活性，活化后可干燥保存3天。

3．黃曲霉毒素標準液①準確吸取標準貯備液適量于棕色具塞量筒中，用氯仿稀釋至1.0ml含毒素B10.2μg。②準確吸取上述溶液適量，用氯仿分別稀釋至1.0ml含黃曲霉毒素B10.005、0.01、0.025、0.05μg等四種濃度的標準液。

4.操作步驟

(1)樣品處理：稱取磨細并過20目篩的樣品20g，置于250mL具塞錐形瓶中，加水4mL潤濕樣品后，加入氯仿40mL(為加水量的10倍)，振搖30分鐘，加入10g無水硫酸鈉脫水，過濾入50mL具塞錐形瓶中，濾液如混濁(含水)，可加入少許無水硫酸鈉振搖勻，放置10分鐘，此為樣品提取液。

(2)微柱色譜：取上述制備的微柱6支，垂直插入微柱架上。一支加入樣品提取液1.0mL(相當于樣品0.5g)，4支分別加入含黃曲霉毒素B10.005、0.01、0.025、0.05μg的標準溶液各1.0mL(相當于樣品管的濃度依次為10、20、50和100μg／kg)，一支微柱加入氯仿1.0mL作為空白管。當各管液面流至近上層棉花層時，立即加入1.0mL展開劑，加試劑及展開劑時，微柱管均要豎直，待展開劑流完后即可觀察結果。

(3)觀察結果與結論：將層析后的微柱置于365nm波長的紫外燈下，觀察樣品柱的硅鎂型吸附劑層是否有熒光，并與空白柱比較定性，與標準各柱比較藍色熒光強度即測得黃曲霉毒素含量。

二、雙向展開法

1.原理樣品中的黃曲霉毒素B1被提取，濃縮后在薄層板上點樣。先用無水乙醚做橫向展開，將干擾的雜質推到樣品點的一側而黃曲霉毒素B1留在點樣處。然后再用丙酮氯仿混合液做縱向展開，黃曲霉毒素B1所在位置的雜質底色大大減少，因而有利于觀察。

2.樣品處理：稱取經(jīng)粉碎并過20目篩的樣品20g于250mL具塞錐形瓶中，加正己烷或石油醚30mL和甲醇水溶液(55︰45)100mL，在瓶塞上涂一層水，蓋嚴防漏。振蕩30分鐘，靜止片刻，以脫脂棉過濾于分液漏斗中，待下層甲醇水溶液澄清后放出甲醇水溶液于另一具塞錐形瓶內。吸取此甲醇水溶液20mL(相當于樣品4g)于另一125mL分液漏斗中，加氯仿20mL，振搖2分鐘，靜止分層后，使氯仿層通過頸部鋪有少量脫脂棉及上面盛無水硫酸鈉10g的小漏斗，過濾于50mL蒸發(fā)皿中，無水硫酸鈉先用氯仿潤濕。分液漏斗中再加氯仿5mL重復振搖提取，氯仿層一并濾于蒸發(fā)皿中。將蒸發(fā)皿放在通風處，于65℃水浴上通風揮干，置冰盒上充分冷卻后，準確加入苯乙腈混合溶劑1.0mL。用帶橡皮頭滴管的管尖將殘渣和溶劑充分混合，再用此滴管吸取上清液轉于2mL具塞小瓶中。若溶液不夠澄清，則離心或放置使澄清，上清液供薄層點樣用。

3.定性試驗：①點樣，取薄層板3塊，在距底邊3cm的起始線上，滴加黃曲霉毒素B1標準液和樣品處理液。在三塊板的距左邊緣0.8～1cm處，各滴加黃曲霉毒素B1標準溶液Ⅲ(0.04μg/mL)10μL，在距右邊緣2.8-3cm處，各滴加樣品液20μL；然后在第二塊板的樣品液點上，滴加黃曲霉毒素B1標準液Ⅱ(0.2μg/mL)10μL。在第三塊板的樣品液點上，滴加黃曲霉毒素B1標準液(0.04μg/mL)10μL。

②展開，將點好樣的三塊板的左邊浸入展開槽內的無水乙醚中橫向展開，至乙醚達到頂端后繼續(xù)展開1分鐘，取出揮干；再用丙酮氯仿混合液縱向展開至10cm以上。

③觀察結果與評定，在紫外線分析燈下觀察第一、二板，若第二板的第二點在黃曲霉毒素B1標準點的相應處出現(xiàn)最低檢出量，而第一板的樣品點在與第二板的相同位置上未出現(xiàn)熒光點，則樣品中黃曲霉毒素B1含量在5μg／kg以下。

如果觀察到第一板在與第二板的相同位置上出現(xiàn)熒光點，則應將第一板與第三板比較?？吹谌迳系诙c與第一板上第二點的相同位置上的熒光點是否與黃曲霉毒素B1標準點重疊，再進行確證試驗。

4.確證試驗：另取兩塊薄層板，于第四、第五兩板距左邊緣0.8～1cm處各加黃曲霉毒素B1標準溶液(0.04μg／mL)10μL，三氟乙酸1滴。距左邊緣2.8-3cm處，第四板滴加樣品液20μL，三氟乙酸1滴，第五板滴加樣品液20μL、黃曲霉毒素B1標準溶液(0.04μg/mL)10μL，三氟乙酸1滴。再用雙向展開法展開后，觀察樣品液點是否產(chǎn)生與黃曲霉毒素B1標準點重疊的衍生物。觀察時，可將第一板作為樣品液的衍生物空白板。

5.稀釋定量：

如果樣品溶液黃曲霉毒素含量高，按單向展開法稀釋定量操作。如果黃曲霉毒素B1含量低，稀釋倍數(shù)小，在定量的縱向板上仍有雜質干擾，影響結果的判斷時，可將板上需要判斷的樣品液點再分別做雙向展開觀察，以確定含量。第四節(jié)中藥制劑的特殊雜質檢查

特殊雜質的檢查原則一般是利用藥品和雜質的理化性質及生理作用的差異，采用物理的、化學的、藥理的、微生物的方法來檢查雜質。

一、土大黃甙的檢查通常認為含有土大黃甙的大黃質量較次，1990年版中國藥典大黃項下也規(guī)定檢查土大黃甙。土大黃甙在紫外燈下觀察呈亮藍紫色熒光，此法簡單但應注意假陽性的發(fā)生。

檢查取本品粉末0.2g，加甲醇2mL，浸泡10分鐘，放冷，取上清液10μL，點于濾紙上，以45％乙醇展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外燈(365nm)下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。

二、阿膠膏劑揮發(fā)性堿性物質的檢查藥典規(guī)定1