檢驗(yàn)科a-巖藻糖苷酶連速監(jiān)測法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（AFU-SOP）

PAGE1-XXXXXX醫(yī)院檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作程序StandardOperatingProcedures版本：V1：A0共6頁標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng)目：α-L-巖藻糖苷酶方法：連速監(jiān)測法文件編號JY-SHH-SOP-07-030編寫者日期審核者日期批準(zhǔn)者日期文件有效期復(fù)審日期頒發(fā)部門或個人接收部門或個人院長辦公司保管者院檔案室保管者醫(yī)務(wù)科保管者檢驗(yàn)科主任臨床化學(xué)檢驗(yàn)室發(fā)布日期：2007年4月2日實(shí)施日期：2007年5月2日前言為使臨床檢驗(yàn)操作規(guī)范化，指導(dǎo)檢驗(yàn)人員嚴(yán)格按規(guī)程進(jìn)行正確的常規(guī)操作，保證檢驗(yàn)質(zhì)量，特制定本操作規(guī)程。本規(guī)程的編寫遵循了ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——關(guān)于質(zhì)量和能力的特殊要求》及WS/T227-2002《

臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求》的有關(guān)規(guī)定并結(jié)合產(chǎn)品實(shí)際情況制訂，作為本產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。本規(guī)程從2007年5月2日起實(shí)施，每2年復(fù)審1次。本規(guī)程由生物技術(shù)有限公司編制。本規(guī)程起草單位：生物技術(shù)有限公司技術(shù)部。本規(guī)程主要起草人：XXX、XXX、XXX。本規(guī)程首次起草。XXXXXX人民醫(yī)院檢驗(yàn)科2007年4月3日目

錄1檢驗(yàn)申請…………………32標(biāo)本采集與處理…………………………33試劑及成份…………………………44方法原理……….…………45儀器……….……………….…………46校準(zhǔn)液及校準(zhǔn)模式………………………47質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則…………………48標(biāo)本檢測步驟………….…………………59結(jié)果計算…………………510操作性能………………511試劑使用的注意事項(xiàng)……………...……512參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平………………………..……513檢驗(yàn)結(jié)果的報告及范圍………………………..………514臨床意義……….….……615結(jié)果審核分析以及相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系..……………………..……..……616威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定.…………………..…617有關(guān)引用程序與文件………………..….618參考文獻(xiàn)附錄AXXX型全自動生化分析儀參數(shù)α-L-巖藻糖苷酶測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.檢驗(yàn)申請單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請：血清α-L-巖藻糖苷酶（縮寫AFU）測定；組合項(xiàng)目申請：肝功能測定項(xiàng)目組合或腫瘤項(xiàng)目結(jié)合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請。2.標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后。體檢對象抽血前應(yīng)有兩周的正常狀況記錄。注意有無應(yīng)用影響測試項(xiàng)目的藥物。此外，對于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因?yàn)闃颖局懈黜?xiàng)目的含量有季節(jié)性變動，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗(yàn)。應(yīng)囑體檢對象在抽血前24小時內(nèi)不做劇烈運(yùn)動。2.2標(biāo)本采集2.2.1除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會影響測試項(xiàng)目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的黃色蓋子SST真空采血管，如為急診標(biāo)本，使用淺綠色蓋子PST試管。2.2.2檢驗(yàn)申請單和血標(biāo)本試管上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.2.3標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請單上填寫標(biāo)本采集時間，如為急診標(biāo)本，加上急查標(biāo)識。2.2.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請單一起及時運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.2.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.2.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.2.5.2對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、黃疸和渾濁的標(biāo)本。2.2.5.3對無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.2.5.4其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.3標(biāo)本處理2.3.1接收標(biāo)本在30min內(nèi)離心分離血清或血漿。吸出血清或血漿,標(biāo)本應(yīng)立即測量。處理樣品時要將其當(dāng)成生物污染品。2.3.2標(biāo)本保存時間：20-25℃穩(wěn)定1天；4-8℃穩(wěn)定5天；-20℃穩(wěn)定1個月。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過24h的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.3.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置2～8℃冰箱內(nèi)保存7d。2.4標(biāo)本的注意事項(xiàng)2.4.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。2.4.2不建議采集抗凝血標(biāo)本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是EDTAK22.4.3血清標(biāo)本出現(xiàn)溶血、脂血、黃疸或抗壞血酸的干擾情況參見抗干擾能力。3.試劑及成份3.1試劑本科使用的α-L-巖藻糖苷酶檢測試劑盒，由生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),產(chǎn)品貨號為XXXX,試劑為液體試劑，其組份如下：組成濃度R1:檸檬酸緩沖液:60mmol/L2-氯對硝基α-L-巖藻吡喃糖苷80mmol/LR2:氫氧化鈉1.4mmol/L防腐劑適量3.2試劑盒保存及效期未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定30d。開蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。新打開試劑不宜與已用過的試劑混合在一起,否則易造成試劑穩(wěn)定性下降。3.3試劑盒準(zhǔn)備液態(tài)試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。4.方法原理4.1測定方法：連續(xù)監(jiān)測法。4.2原理：樣品中α-L-巖藻糖苷酶（AFU）水解試劑中2-氯對硝基α-L-巖藻吡喃糖苷底物生成氯硝基苯酚和L-巖藻苷，而引起在波長405nm吸光度的上升，其上升的速率與樣品中AFU含量成正比。通過監(jiān)測405nm處吸光度上升的速率，可計算出樣品中AFU的活性。5.儀器XXX型全自動生化分析儀器。6.校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式6.1校準(zhǔn)品：采用因數(shù)法或使用XXX公司提供的復(fù)合校準(zhǔn)液（Cat.No.XXXXXX）或。采用因數(shù)法時按照生物技術(shù)有限公司提供的參數(shù)中樣本和試劑比例，理論因數(shù)=2290。實(shí)際因數(shù)可自行進(jìn)行校準(zhǔn)。6.2標(biāo)準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式，X個校準(zhǔn)點(diǎn)。6.3校準(zhǔn)周期：空白定標(biāo)：每日需做試劑空白定標(biāo)。全點(diǎn)定標(biāo)：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后；均須需要全點(diǎn)定標(biāo)。7.質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則7.1質(zhì)控品采用公司提供的質(zhì)控血清進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。7.2質(zhì)控液重建方法：用1.0ml蒸餾水溶解，輕輕混勻，20min后即可使用。7.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定至少測定質(zhì)控血清一次。7.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。7.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。8.標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報告。9.結(jié)果計算ΔA/min×Vt×1000 樣品中AFU活性(U/L)==ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分鐘吸光度變化率；e——摩爾吸光系數(shù)4790；Vt——反應(yīng)液總體積（ml）；d——比色杯光徑1cm；1000——變化因數(shù)；Vs——標(biāo)本體積（ml）；儀器根據(jù)此公式自動給出每個標(biāo)本測定結(jié)果。10.操作性能10.1精密度：批內(nèi)CV4％，批間CV8％。10.2準(zhǔn)確度：測量結(jié)果在質(zhì)控血清靶值±2SD范圍內(nèi)。不同方法學(xué)試劑的質(zhì)控結(jié)果之間會存在差異，使用時請確保質(zhì)控選擇與試劑的方法學(xué)保持一致。10.3線性范圍：0~250U/L（血清與試劑用量之比為1:100時）10.4方法的有限性及干擾因素：膽紅素＜850μmol/L、血紅蛋白＜5g/L，抗壞血酸＜2.84mmol/L，對測定有干擾11.試劑使用的注意事項(xiàng)11.1本試劑僅應(yīng)用于體外診斷。11.2扔棄廢物應(yīng)符合當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)。12.參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：0~10μmol/L13.檢驗(yàn)結(jié)果的報告及范圍13.1結(jié)果的報告13.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報告。13.1.2報告單上標(biāo)明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。13.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。13.2報告范圍：血清與試劑用量之比為1:100時，測定上限為250U/L。超過此范圍的結(jié)果報告時必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，并經(jīng)上級主管技師審核后報告。14.臨床意義14.1．肝癌：原發(fā)性肝癌患者血清中AFU活性不僅顯著升高，而且也顯著高于轉(zhuǎn)移性肝癌、膽管細(xì)胞、惡性間皮瘤、惡性血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤、肝硬化、先天性肝囊腫和其它良性肝占位性病變。對原發(fā)性肝癌診斷的陽性率為64%-84%，特異性達(dá)90%左右。通過對原發(fā)性肝癌、肝硬化患者進(jìn)行AFU、AFP檢測，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌和肝硬化后肝癌患者AFU、AFP均增高，以AFP500ng/mL為診斷肝癌的臨界值，其假陽性率為43%，AFU740nmol/(ml．h)為臨界值，其敏感度為84%，特異性為94%。因此，血清AFU對原發(fā)性肝癌診斷有較高的敏感性和特異性。國內(nèi)對24例肝細(xì)胞癌患者進(jìn)行血清AFU和AFP相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)AFU診斷敏感率為87%，特異性為78%，而AFP則分別為65%和89%（診斷界限為，20ug/L）。提示AFU診斷的敏感性好，而特異性較AFP低。血清中AFU活性和陽性率與肝癌直徑大小無明顯相關(guān)性。小肝癌血清AFU陽性率70.8%顯著高于AFP（37.5%）。AFP陰性和AFP升高而不足以診斷原發(fā)性肝癌者，其血清AFU的陽性率達(dá)80.8%。肝組織活檢證實(shí)為原發(fā)性肝癌者，血清AFU的陽性率為AFP陽性率的3倍以上。。在肝硬化患者中檢測AFU，如其活性增加，對發(fā)現(xiàn)一些較小的腫瘤更具有價值，此時AFP不能對較小的腫瘤做出診斷。因此，應(yīng)用和推廣AFU作為原發(fā)性肝癌新的診斷指標(biāo)，具有重要的意義，尤其是AFP陰性和小細(xì)胞肝癌的診斷價值更大。因與AFP無明顯相關(guān)可互初診斷，聯(lián)合檢測可提高肝癌的檢出率。

14.2．妊娠與卵巢腫瘤：研究表明，隨妊娠周數(shù)增加血漿AFU遞增，在自然分娩或人工終止妊娠后，迅速下降，5天降到正常。卵巢癌患者血清AFU活性降低，且與疾病分期、腫瘤負(fù)荷、組織學(xué)分型和腫瘤分化程度無關(guān)。良惡性卵巢癌患者血清AFU活性降低可能與遺傳因素有關(guān)。

14.3．其它：巖藻糖苷酶貯積患者由于先天性組織器官和體液中AFU缺乏或活力降低，導(dǎo)致糖蛋白或糖脂代謝紊亂。胃癌患者血清AFU升高，急性胰腺炎不升高，囊性纖維變性伴發(fā)胰腺炎時則下降，進(jìn)行性錐體營養(yǎng)不良

血清AFU活性下降。15.結(jié)果審核分析以及相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2審核者認(rèn)真審核每一個測定結(jié)果，對發(fā)出報告結(jié)果的可靠性負(fù)責(zé)，并在報告單