生物工程系生化分離技術(shù)

生物工程系生化分離技術(shù)第1頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月《生化分離技術(shù)》第10/17次課

匯報人：蘇敬紅單元設(shè)計3-3：薄層色譜法分離菠菜色素第2頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月班級：生物技術(shù)及應(yīng)用1231地點：生化分離技術(shù)一體化教室6101課次：10/17項目3：菠菜中色素的提取技術(shù)任務(wù)1：浸提法提取菠菜色素（4學時）任務(wù)2：溶劑萃取法提取菠菜色素（4學時）

任務(wù)3：薄層色譜法分離菠菜色素

（4學時）任務(wù)4：柱色譜法分離菠菜色素（4學時）任務(wù)5：色素濃縮與干燥技術(shù)

（4學時）

背景信息背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第3頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月第10/17次課（4學時）背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第4頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月素質(zhì)目標知識目標能力目標①能夠依據(jù)薄層色譜操作規(guī)程完成鋪板、點樣、展開、顯色等操作；②能夠采用薄層色譜法分離菠菜色素；①掌握薄層色譜法的相關(guān)概念：薄層吸附色譜法、固定相、流動相、吸附色譜法；②掌握薄層色譜法操作工藝和控制要點；③了解吸附劑與展開劑的選擇原則；④理解Rf值的含義和計算方法；①同組同學之間共同完成工作任務(wù)，培養(yǎng)大家團結(jié)協(xié)作的能力；②操作中注意安全，防止玻璃器皿的破碎和個人財產(chǎn)的損失；③實驗操作中，注意保持環(huán)境衛(wèi)生和維護公共財產(chǎn)的安全。單元目標背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第5頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)果：樣品中有效組分能顯示出來；標準：樣品中有效組分都能顯示出來；各組分點無干擾組分；結(jié)果：溶劑展開效果好。標準：溶劑前沿呈一條直線；樣品中各組分都能分開；結(jié)果：點樣點大小合適，點與點之間距離合適；標準：點樣點直徑約為2mm，不超過3mm；點與點距離約1cm。結(jié)果：制備出符合質(zhì)量要求的薄層板；標準：制成的板厚薄均勻，無氣泡；能力訓練任務(wù)設(shè)計子任務(wù)一鋪板子任務(wù)二點樣子任務(wù)三展開子任務(wù)四顯色工作任務(wù)：薄層色譜法分離菠菜色素背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第6頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作任務(wù)實施5min5min10min80min歸納總結(jié)課外任務(wù)考核打分40min5min25min計劃決策15min子任務(wù)1（25min）子任務(wù)2（20nin）子任務(wù)3（25min）子任務(wù)4（10min）背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第7頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月任務(wù)3：薄層色譜法分離菠菜色素（4學時）現(xiàn)在開始上課！第8頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月生活情境：不小心將菜漬灑在了衣服了，可是洗了很多遍，還是留有有淡淡的黃色。疑問？1、為什么綠色的菜漬，最后會洗成了黃色？2、用什么東西能把他徹底的洗下來呢。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第9頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月資料表明：如何驗證：綠色植物色素包含哪幾種色素成分？什么物質(zhì)對色素的洗脫能力強？背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第10頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分工作任務(wù)：薄層色譜法分離菠菜色素任務(wù)1：浸提法任務(wù)2：溶劑萃取法

任務(wù)3：菠菜色譜法分離菠菜色素第11頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月工作任務(wù)3-3：薄層色譜法分離菠菜色素任務(wù)論述：通過薄層色譜法分離菠菜中色素成分。預期效果：（1）薄層色譜法將菠菜色素提取液分為四種成分：葉綠素a，葉綠素b，β-胡蘿卜素、葉黃素。（2）計算不同組分的Rf值，判斷什么物質(zhì)對色素的洗脫能力強？背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第12頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月實訓指導書任務(wù)設(shè)計書操作要點評分教學視頻講義及課件操作規(guī)程提供資料包背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分薄層色譜操作視頻第13頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）準備材料1、玻璃板：2、移液管3、研缽一、教師示范操作過程和操作要點背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第14頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4、烘箱5、鉛筆、直尺（學生自備）6、毛細滴管：7、噴瓶：背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第15頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（8）菠菜色素提取液（9）硅膠：薄層色譜硅膠（10）展開劑：石油醚：乙酸乙酯=3:1（體積比）石油醚：乙酸乙酯=3:2（體積比）（11）粘合劑：CMC-Na溶液

背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第16頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）薄層色譜法（thin-layerchromatography）操作1、鋪板（plating）：稱硅膠→調(diào)糊狀→鋪板

→活化操作要點：1、調(diào)漿時要將硅膠加到CMC-Na溶液中，漿液要有一定的流動性，稠度以能沿玻棒成細線性下滴為宜。2、鋪板時一定要鋪勻，特別是邊、角部分，晾干時要放在平整的地方。3、鋪板厚度0.25-1mm且均勻；晾干；一塊一塊鋪；活化時烘箱要從低溫開始。4、薄層板表面應(yīng)均勻、平整、光滑，無麻點，無氣泡，無破損及污染。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第17頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月2.點樣（spottingthesample

）：畫線→毛細管點樣（點3次）操作要點：①畫線時不能將板劃破；②點樣斑點直徑小于2mm，斑間距1-1.5cm；點樣結(jié)束干燥后再進行下一步。

③點樣時點要細，直徑不要大于2mm,間隔0.5cm以上，濃度不可過大，以免出現(xiàn)拖尾、混雜現(xiàn)象。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第18頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月3.展開（spreading）：展開劑選擇→展開劑預飽和→展開

操作要點：①層析缸要洗凈烘干；放入板之前，要先加展開劑，蓋上表面皿，讓燒杯內(nèi)形成一定的蒸氣壓。②點樣點在展開劑液面以上背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第19頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月4、顯色（coloration）：觀察斑點在板上的位置，照原樣畫出斑點形狀。計算出胡蘿卜素、葉綠素a、葉綠素b和葉黃素的Rf值大小。

操作要點：畫斑點形狀時，不要劃破薄層板。鏈接：薄層吸附色譜操作視頻背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第20頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月小組討論二計劃決策、修訂方案（15min）1、制定工作流程，分析操作要點。2、小組內(nèi)部分工：組長：××

×工藝員：×××；操作員：×××；×××背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第21頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第22頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月①鋪板（25min）②點樣（20min）③展開（25min）④顯色（10min）三學生操作、教師指導（80min）背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分platingspottingthesamplespreadingcoloration第23頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）薄層色譜法相關(guān)概念1、薄層色譜法（thin-layerchromatography）：

薄層色譜法是將吸附劑或支持劑均勻地鋪在玻璃板上，鋪成一薄層，然后把要分離的樣品點在薄層的起始線上，用適當?shù)娜軇┱归_，最后顯色，從而使樣品中各組分得到分離的方法。四知識點總結(jié)背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第24頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月固定相（stationaryphase）：在色譜分離中固定不動、對樣品產(chǎn)生保留的一相。如：硅膠、氧化鋁、聚酰胺、硅藻土等。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第25頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月流動相（mobilephase）：色譜過程中攜帶待測組分向前移動的物質(zhì)。主要指展開劑：石油醚：乙酸乙酯=3:1（體積比）。石油醚：乙酸乙酯=3:2（體積比）。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第26頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分分離效果好，組分無重疊分離效果不好，組分有重疊從兩種展開劑的效果圖來看：展開劑1：洗脫能力強，分開效果好。展開劑2：洗脫能力弱，分開效果差。原因是：石油醚為非極性溶劑，對色素的溶解能力強。結(jié)果：展開劑極性越弱，對色素的溶解能力強，洗脫效果好。1、石油醚：乙酸乙酯=3:1（體積比）2、石油醚：乙酸乙酯=3:2（體積比）第27頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月2、吸附色譜法：利用吸附劑對試樣中各組分吸附能力的差異，而實現(xiàn)試樣中個組分分離的色譜法。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第28頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）薄層色譜法分離的機理。（1）溶質(zhì)在吸附劑上不斷的完成吸附、解吸、又吸附的分離過程。

鏈接：薄層色譜機理

（2）樣品移動的速度與什么有關(guān)？

①溶液中物質(zhì)的極性有關(guān)。極性越大，移動速度越小。②與展開劑的極性有關(guān)。極性越大，溶質(zhì)移動速度越大。己烷<環(huán)己烷<四氯化碳<甲苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丙醇<乙醇<甲醇<水<冰醋酸第29頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）、吸附劑和展開劑的選擇1、吸附劑的選擇（1）吸附劑種類：硅膠、氧化鋁、硅藻土、聚酰胺（2）吸附劑選擇原則：①要求具有一定的形狀與粒度②要求有一定的吸附活性背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第30頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月2、展開劑的選擇（1）展開劑的類型多元展開劑：含有多種組分的混合展開劑。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第31頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月展開劑的選擇①展開劑對被分離的組分具有一定的解吸能力，但又不能太大。②展開劑對被分離組分具有一定的溶解度。背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第32頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）薄層色譜操作工藝和控制要點參見：薄層色譜操作規(guī)程背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第33頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）阻滯因數(shù)（比移值Rf）原點到層析點中心的距離Rf=

原點到溶劑前沿的距離背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第34頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月薄層色譜法分離菠菜色素薄層板制備點樣展開顯色各步驟檢測方法及操作要點（六）操作過程總結(jié)背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分第35頁，課件共39頁，創(chuàng)作于2023年2月操作過程常見問題原因分析解決方法薄層板制備①薄層板表面有麻點②薄層板厚薄不均，中間有凹陷③薄層板起皮①研磨程度不夠；②制板時總振動；③薄層板沒晾干就放進烘箱活化；①順時針方向研磨至漿液沿玻棒成細線性下滴為宜②鋪勻后，振動至均勻即可，放平晾干；③晾干后再進烘箱活化；點樣①點樣點大②點樣量過?、埸c樣量過大①樣點沒干就點第二次②毛細滴管底端不平③長時間點樣不動①樣點吹干后再點第二次②將毛細滴管底端弄平再點③點樣時間控制好，要多練幾次展開①溶劑前沿線不平②溶劑過薄層板頂部③溶劑點展開效果差①放置不平，薄層板挨著或厚薄不一致；②沒注意觀察③點樣大；展開槽沒預飽和；密封不好；①放置平穩(wěn)；薄層板之間距離遠；選擇好的薄層板；②展開時注意觀察；③點樣量要合適；要預飽和；密封效果要好背景信息任務(wù)引入明確任務(wù)示范操作計劃決策任務(wù)實施課外任務(wù)歸納總結(jié)考核打分