免疫熒光試劑盒臨床應用

免疫熒光試劑盒在生殖道感染病原體檢測中的臨床應用免疫熒光技術免疫熒光標記技術（immunofluorescencetechnique）是標記免疫技術的一種，是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術基礎上建立起來的一項技術。

經(jīng)過不斷改進發(fā)展，免疫熒光技術已成為微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中準確又快速的一種免疫學實驗方法。1免疫熒光原理

將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與樣本中的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。

基本反應原理為抗原—抗體間的反應2免疫熒光特點

特異性強、敏感性高、檢測速度快（單個樣本處理時間約40分鐘，批量樣本報告時間以半天或隔天最佳）

直接免疫熒光法（DFA）

將標記的特異熒光抗體直接加在抗原標本上，經(jīng)一定溫度和時間的染色，在熒光顯微鏡下便可觀察到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結合物所發(fā)出的熒光。直接免疫熒光示意圖免疫熒光技術的應用

免疫熒光技術應用范圍極其廣泛，可以應用于生物學的各個領域。尤其適用病原微生物的快速鑒定檢測，具有形態(tài)學和免疫學的雙重優(yōu)點。

臨床實驗室改進組織(CLIA)指出直接免疫熒光法最適合用于日常臨床和參考實驗室檢測。邁科龍免疫熒光法生殖道病原體檢測試劑盒免疫熒光試劑盒注冊證號適用范圍沙眼衣原體C.T.國食藥監(jiān)械（準）字2010第號宮頸感染、尿路感染、產(chǎn)前篩查、不孕不育奈瑟氏淋球菌N.G.國食藥監(jiān)械（準）字2010第號宮頸感染、尿路感染、產(chǎn)前篩查、不孕不育陰道加德納菌G.V.國食藥監(jiān)械（準）字2010第號BV、復發(fā)性BV、產(chǎn)前篩查、不孕不育白色念珠菌C.A.國食藥監(jiān)械（準）字2010第號霉菌性陰道病單純皰疹病毒II型HSV-II國食藥監(jiān)械（準）字2010第號生殖器皰疹陰道毛滴蟲T.V.國食藥監(jiān)械（準）字2010第號滴蟲性陰道病造成非淋菌性尿道炎的重要病原體，其感染已超過淋球菌感染而位居性傳播疾病之首可致尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎對懷孕可致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎膜早破、胚胎停育等嚴重妊娠并發(fā)癥產(chǎn)道感染可致嬰兒急性結膜炎母嬰傳播可致新生兒眼炎或肺炎引起不孕不育沙眼衣原體1.臨床意義潛伏期，平均為1～3周

男性患者臨床表現(xiàn)：尿痛，或尿頻、尿道刺癢和不適，陰體局部疼痛尿道分泌物常為漿液性或粘液膿性，較稀薄，量少女性患者臨床表現(xiàn)：尿道有分泌物，呈漿液性或漿液膿性，尿痛，尿頻白帶增多，色黃或帶血性，或有異味非經(jīng)期或性交后出血宮頸品可見粘液膿性分泌物，宮頸充血、消腫，觸之易出血2.臨床表現(xiàn)近年來國際上已將免疫熒光法作為一項“擴大的金標準”來鑒定沙眼衣原體培養(yǎng)和非培養(yǎng)結果相異的標本，其敏感性為80%-90%，特異性則在95%以上。衛(wèi)生部頒布的《非淋菌性尿道炎診斷標準及處理原則》（WS238－2003）中，直接免疫熒光法為沙眼衣原體推薦檢測方法。沙眼衣原體臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點膠體金法52.78差98.86方法簡便、快捷，適于短時內(nèi)大批量標本的測定，特異性低，靈敏度不高，易造成假陰性，陽性檢出率＜5%，臨床實際檢出率多僅1-2%漏檢率太高，不適用于婦產(chǎn)等低感染人群篩查免疫熒光法92.7297.89操作簡便，檢測時間短，可檢出標本中存在的原體和包涵體。具有專一性好、特異性強、靈敏度高等特點，在衣原體感染早期就可被發(fā)現(xiàn)，對衣原體感染的早期診斷具有特殊意義。沙眼衣原體檢測“金標準”沙眼衣原體陽性圖片治療方案初發(fā)病例多西環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服7～10天阿奇霉素1g，一次頓服，飯前1小時或飯后2小時服用紅霉素500mg，口服，4次/日，連服7天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，連服7天氧氟沙星300mg，口服，2次/日，連服7天米諾環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服10天

復發(fā)性或持續(xù)性病例，尚無有效的治療方案，推薦方案為：甲硝唑2g單次口服，加紅霉素堿500mg，口服，4次/日，共7天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，連服7天

孕婦禁用多西環(huán)素和氧氟沙星，推薦方案為：紅霉素500mg，口服，4次/日，共7天紅霉素250mg，口服，4次/日，共14天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，共7天阿奇霉素1g，一次頓服造成細菌性陰道炎的主要病原體，在陰道分泌物中檢出陰道加德納菌可用于診斷細菌性陰道炎引起尿道炎和陰道炎導致早產(chǎn)、低體重兒、絨毛膜炎、羊膜炎、羊水感染、子宮內(nèi)膜炎、急性輸卵管炎、手術后感染和子宮頸癌等經(jīng)性接觸傳播，與男性非淋菌性尿道炎有一定關系影響精子質(zhì)量，是男性不育的重要原因之一妊娠期感染，可能導致自然流產(chǎn)、早產(chǎn)產(chǎn)前、孕早期上行感染可致胚胎停止發(fā)育陰道加德納菌1.臨床意義2.臨床表現(xiàn)：陰道分泌物呈灰白色，很粘稠，甚至象面糊狀，均勻一致，但不是膿性分泌物，量多少不定。分泌物中胺含量特別高，故呈魚腥味，性交時或活動后往往因促進胺釋放而使氣味加重，分泌物中加入10%氫氧化鉀后也可釋出胺味。3.臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點快速BV試驗75～88～95敏感性高、但其他細菌、滴蟲等都能對檢測產(chǎn)生干擾，導致假陽性。代謝產(chǎn)物，間接指標，重復性差革蘭染色47.37～94.775～98簡便、快速；背景復雜、易漏檢，需要實驗者具備豐富的實踐經(jīng)驗尋找足夠數(shù)量的線索細胞不具備特異性陰道加德納菌免疫熒光法94.5397.51操作簡便，檢測時間短，可直接檢測出主要致病菌，標本需要量少、特異性強、結果判斷直觀、靈敏度高等優(yōu)點直接檢測病原微生物，檢測意義清晰陰道加德納菌陽性圖片治療方案非孕期★推薦方案甲硝唑500mg，口服，2次/d，共7d0.75%甲硝唑膏(5g)，陰道上藥，2次/d，共5d2%克林霉素膏(5g)，陰道上藥，1次/晚，共7d★替代方案克林霉素300mg，口服，2次/d,共7d克林霉素栓300g,陰道上藥，1次/晚，共3d妊娠期甲硝唑500mg，口服，2次/d，共7d甲硝唑250mg，口服，3次/d，共7d氯潔霉素300mg，口服，2次/d，共7d哺乳期選擇局部用藥，盡量避免全身用藥奈瑟氏淋球菌造成淋病的病原微生物，引發(fā)以泌尿生殖道化膿性炎癥為主要臨床癥狀的性傳播疾病淋病是常見的性傳播疾病之一，且發(fā)病率呈上升趨勢，已構成威脅公眾健康的重大疾病妊娠期感染淋病對母嬰危害極大，宮內(nèi)感染易致自然流產(chǎn)、早產(chǎn)及胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩分娩時母嬰垂直傳播，可致新生兒淋病性結膜炎，治療若不及時徹底，新生兒有致盲的危險淋病孕婦產(chǎn)后易發(fā)生散播性淋病1.臨床意義2.臨床表現(xiàn):2.1無合并癥淋病2.1.1男性淋菌性尿道炎尿道口紅腫、發(fā)癢、有稀薄或黏液膿性分泌物，尿痛、燒灼感，排出黏稠的深黃色膿液。2.1.2女性泌尿生殖系統(tǒng)的淋病淋菌性尿道炎：尿頻、尿急、尿痛、尿血及燒灼感。尿道口充血發(fā)紅，有膿性分泌物；淋菌性宮頸炎：為女性淋病的主要表現(xiàn)，白帶增多、陰道口有黏液膿性分泌物排出，外陰瘙癢，陰道內(nèi)輕微疼痛和燒灼感，陰道口充血，水腫，子宮頸口充血，糜爛，有黏液膿性分泌物。女童淋?。嚎梢婈幍揽凇⒛虻揽?、會陰部紅腫，病變部位可出現(xiàn)糜爛、潰瘍和疼痛。陰道有膿性分泌物，排尿困難。2.2有合并癥淋病2.2.1男性淋病合并癥淋菌性附睪炎、睪丸炎：陰囊或睪丸有牽引痛，進行性加重，且向腹股溝處擴散，體溫可升高至4O℃。檢查可見附睪、睪丸腫大、壓痛，病情嚴重時可觸及腫大的精索及腹股溝淋巴結淋菌性前列腺炎：發(fā)熱、尿痛、尿頻、尿急，有排尿不盡感和會陰脹痛，前列腺肛檢有明顯壓痛和腫大其它合并癥：可并發(fā)尿道旁腺炎、尿道周圍膿腫、海綿體炎、淋菌性龜頭炎或龜頭包皮炎、尿道狹窄等2.2.2女性淋病合并癥淋菌性盆腔炎:包括淋球菌性子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、腹膜炎等，好發(fā)于育齡婦女。多數(shù)病人有白帶增多，且為膿性或血性。雙下腹痛，伴有畏寒、發(fā)熱、頭痛、厭食、惡心、嘔吐等淋菌性前庭大腺炎：出現(xiàn)前庭大腺紅腫、疼痛，腺體開口處有膿性分泌物，大陰唇下1/2腫脹明顯，還可伴有全身癥狀和腹股溝淋巴結腫大。3.臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點革蘭染色法男性：95%；女性：<75%/操作簡便，對男性急性樣本準確率較高。對于慢性樣本及女性樣本，由于雜菌較多，背景復雜，易漏檢。不適用女性患者，尤其是慢性女性患者培養(yǎng)法85～95100受標本的采集、運輸、保存以及病人的病情等因素影響較大，測定所需時間較長，不利于快速診斷與及時治療，并且易受抗生素影響，出現(xiàn)假陰性。陽性檢出率偏低，報告時間長免疫熒光法93.2898.17操作簡便，檢測時間短，不受標本的運輸、保存及菌體活力影響，靈敏度高、特異性強，適用于臨床各期患者?？焖?、準確、操作簡單衛(wèi)生部《淋病診斷標準》（WS268-2007）指出，免疫熒光法可用于奈瑟氏淋球菌培養(yǎng)樣本鑒定。奈瑟氏淋球菌陽性圖片治療方案★推薦方案頭孢曲松125mg，單次肌注頭孢克肟400mg，單次頓服環(huán)丙沙星500mg，單次頓服氧氟沙星400mg，

單次頓服左氧氟沙星250mg，單次頓服白色念珠菌陰道正常菌群之一，在各種致病因素影響之下，念珠菌優(yōu)勢繁殖引起外陰陰道念珠菌病(VVC)VVC是僅次于細菌性陰道病的陰道感染性疾病，75%的育齡婦女一生至少有一次發(fā)病白色念珠菌是陰道感染念珠菌的主要病原體，占80%-90%孕期感染未治療或治療不徹底可能因產(chǎn)時陰道操作引起產(chǎn)道感染，導致子宮復舊不良或傷口感染等妊娠合并念珠菌性陰道病患者的胎兒多數(shù)在通過產(chǎn)道后感染，新生兒心、肺、腦組織等均存在念珠菌病灶1.臨床意義

包括女性陰道炎及龜頭包皮炎。陰道炎：陰道分泌物粘稠、色黃或奶酪樣斑片，在陰道壁上可見灰白色假膜樣斑片，有瘙癢或灼熱感。龜頭包皮炎：較少見，可見包皮及龜頭潮紅、干燥光滑，包皮內(nèi)側(cè)及冠狀溝可見覆有假膜的斑片。

2.臨床表現(xiàn)：白色念珠菌臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點濕片法<75～檢出率偏低，其檢出率為30%-50%，背景復雜、易漏檢革蘭染色88～95～背景復雜、易漏檢免疫熒光法94.197.23操作簡便，檢測時間短，靈敏度高、特異性強，不易受樣本中雜菌的影響。白色念珠菌陽性圖片治療方案可選擇下列藥物放于陰道內(nèi)：咪康唑栓劑，每晚1粒(200mg)，連用7天；或每晚1粒(400mg)，連用3天克霉唑栓劑，每晚1粒(150mg)，塞入陰道深部，連用7天，或每天早、晚各1粒(150mg)，連用3天；或1粒(500mg)，單次用藥嬌妍凝膠消毒劑，每晚一次，連用10～14天也可選擇口服藥物：氟康唑150mg，頓服伊曲康唑每次200mg，1次/d，連用3～5天；或口服400mg，1天服用2次單純皰疹病毒II型生殖器潰瘍最常見的原因之一，引起生殖器皰疹侵犯生殖器皮膚、粘膜引起紅斑、水痘、糜爛及潰瘍性損害生殖器感染與宮頸癌有關增高對人類免疫缺陷病毒（HIV）的易感性生殖器潰瘍促進HIV異性間傳播生殖器感染具有反復發(fā)作性早期診斷和治療對促進患者皮損愈合，降低其傳染性及危害性有重要意義1.臨床意義原發(fā)性生殖器皰疹外生殖器或肛門周圍有群簇或散在的小水皰，2~4天后破潰形成糜爛或潰瘍，自覺疼痛腹股溝淋巴結常腫大，有壓痛常伴有發(fā)熱、頭痛、乏力等全身癥狀

復發(fā)性生殖器皰疹起疹前局部有燒灼感，針刺感或感覺異常外生殖器或肛門周圍群簇小水皰，很快破潰形成糜爛或淺潰瘍，自覺癥狀較輕。

2.臨床表現(xiàn)3.臨床檢驗方法臨床檢驗方法靈敏性（%）特異性（%）優(yōu)缺點PCR法94～10095.7檢測HSVDNA，實驗條件要求高，多在專科醫(yī)院應用，難以普及推廣免疫熒光法95.297.59操作簡便，檢測時間短，不受皮疹部位及其病毒量影響，靈敏度高、特異性強開展方便單純皰疹病毒II型陽性圖片治療方案生殖器皰疹首次發(fā)作★推薦方案無環(huán)鳥苷400mg，3次/d，口服，7~10d無環(huán)鳥苷200mg，5次/d，口服，7~10d泛昔洛韋250mg，3次/d，口服，7~10d伐昔洛韋1g，2次/d，口服，7~10d如果未完全治愈,治療療程可超過10d

間歇治療：即發(fā)作時給予抗病毒藥物，推薦在出現(xiàn)前驅(qū)癥狀或皮損出現(xiàn)24h內(nèi)開始用藥，可選擇的方案包括：口服阿昔洛韋200mg每日5次，共5天阿昔洛韋400mg每日3次，共5天伐昔洛韋500mg每日2次，共5天伐昔洛韋300mg每日2次，共7天泛昔洛韋250mg每日3次共5天

對于初發(fā)性生殖器皰疹，劑量不變，療程延長至10天

長期抑制治療：對于發(fā)作頻繁的患者，可推薦長期抑制療法，可選擇的方案包括：阿昔洛韋400mg，口服2次/d泛昔洛韋250mg，口服2次/d伐昔洛韋500mg，

口服1次/d伐昔洛韋1.0g，口服1次/d特殊人群的治療：新生兒皰疹：早期靜脈給子抗病毒治療，如阿昔洛韋（每次5mg/kg）每8小時l次，癥狀控制后，可考慮口服治療維持。妊娠皰疹：初發(fā)者，口服阿昔洛韋400mg每天3次，有嚴重并發(fā)癥者應靜脈滴注阿昔洛韋。頻繁復發(fā)或新近感染的孕婦，可在妊娠最后4周給予連續(xù)口服阿昔洛韋。合并HIV感染者：與普通人群感染治療策略相同，對發(fā)作次數(shù)頻繁者更主張長期抑制療法，但應關注耐藥性。試劑盒選擇國家規(guī)定臨床檢驗室必須