口腔上皮細(xì)胞巴氏小體的觀察課件

人類口腔上皮細(xì)胞巴氏小體的觀察鄒方東教授助教：陽敏glorym@四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆杖梭w性染色質(zhì)的檢測方法；觀察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位；為進(jìn)一步研究人體染色體的畸變與疾病提供參考條件；了解雌性哺乳動物X染色體失活假說和劑量補(bǔ)償效應(yīng)的機(jī)制二、實(shí)驗(yàn)原理1949年M.L.Barr等研究發(fā)現(xiàn)了雌貓神經(jīng)細(xì)胞核膜內(nèi)具有凝縮的深染小體（巴氏小體），而雄性個(gè)體細(xì)胞中則沒有.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)：所有哺乳類雌體細(xì)胞中都可以見到這一結(jié)構(gòu)。巴氏小體是雌性哺乳動物體細(xì)胞中失活的X染色體，在間期細(xì)胞核中呈異固縮狀態(tài)（染色質(zhì)高度螺旋化），直徑約1μm，貼近于核膜邊緣的染色小體。細(xì)胞分裂間期細(xì)胞核中出現(xiàn)異固縮現(xiàn)象：濃縮、染色深、無活性；細(xì)胞分裂期可形成正常的染色體形態(tài)；復(fù)制時(shí)間比有活性的X染色體稍遲一些。Barr小體的數(shù)目=n-1（n為X染色體數(shù)目）正常女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為1；正常男人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為0；XXX女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為2；XXXX女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為3。定義：具有兩份或兩份以上的基因量的個(gè)體與只有一份基

因量的個(gè)體的基因表達(dá)趨于一致的遺傳效應(yīng).舉例：雌性哺乳動物一條X染色體異染色質(zhì)化（失活），

只有一條X染色體具有活性，使雌雄動物雖然X染色

體數(shù)目不同但基因產(chǎn)物的劑量是平衡的。劑量補(bǔ)償效應(yīng)（dosagecompensationeffect）三、實(shí)驗(yàn)材料1、器材：

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽等2、試劑：

改良苯酚品紅、60%醋酸（鹽酸）3、實(shí)驗(yàn)材料：

女生口腔黏膜細(xì)胞（男生為對照)四、實(shí)驗(yàn)步驟（1）取干凈載玻片，用記號筆在將涂細(xì)胞的一面右上角做好標(biāo)記；（2）嗽口（三次），盡可能除去口中雜物；（3）用牙簽刮取頰部粘膜上皮細(xì)胞，棄第一次刮取物，在同一部位繼續(xù)刮??；（4）將刮得的細(xì)胞涂在干凈載玻片上，反復(fù)幾次，使玻片上的材料盡可能多些;（5）空氣中干燥；（6）涂片區(qū)滴上100μl的60%冰醋酸(鹽酸)固定5分鐘；（7）吸去冰醋酸，滴20μl改良苯酚品紅染色2分鐘；（8）壓片；（9）將玻片置于顯微鏡下觀察。五觀察在女性間期細(xì)胞核內(nèi)側(cè)靠近核膜處有約1微米大小的反光極強(qiáng)的顆粒狀亮點(diǎn)，即為巴氏小體。材料不同，觀察結(jié)果可能有不同，且必須和核仁區(qū)別開來（核仁往往離核膜較遠(yuǎn)或接近核中央部位）。

箭頭所示為巴氏小體（女性細(xì)胞[左]中存在，男性細(xì)胞[右]中沒有）注意事項(xiàng)

1．刮口腔上皮前要漱口；2．刮時(shí)用滅菌牙簽的寬邊，勿用一角，以免劃破口腔；3．第一次刮下的脫落細(xì)胞用酒精棉球擦去，在原位重復(fù)刮一下制片；4．盛放酒精棉球的小廣口瓶，瓶蓋用完即時(shí)蓋好；5．涂片略干再加改良苯酚品紅；6．染色時(shí)間不要太長，否則核質(zhì)著色深，X染色質(zhì)體不易區(qū)分；7．可數(shù)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)：核質(zhì)染色呈網(wǎng)狀或顆粒狀；核膜清晰，無缺損；染色適度，周圍無雜質(zhì)。五、作業(yè)1．分別觀察男女各50個(gè)可數(shù)細(xì)胞，計(jì)算顯示X染色質(zhì)所占百分比。2．觀察中選繪4-5個(gè)典型細(xì)胞，示