非培養(yǎng)手段在感染性疾病診治中的應(yīng)用課件

關(guān)于非培養(yǎng)手段在感染性疾病診治中的應(yīng)用第1頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三現(xiàn)狀各種感染發(fā)生率不斷升高早期診斷不能滿足臨床需要第2頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三C反應(yīng)蛋白（CRP）降鈣素原（PCT）T-SPOT.TBG-試驗GM試驗乳膠凝集試驗第3頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三CRP（C-reactiveprotein）

是一種急性時相蛋白，在機體受到微生物入侵或組織損傷等炎癥性刺激時由肝臟合成，因能在鈣離子存在時與肺炎球菌C多糖起沉淀反應(yīng)而得名。1930年由Tillett和Francis發(fā)現(xiàn)。第4頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三CRP主要由肝細胞在白細胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1及TNF-α刺激下合成。受年齡、免疫狀況和藥物等因素影響較小。正常合成率1-10mg/d，急性炎癥反應(yīng)時每天合成大于1g。CRP在體內(nèi)分布廣，除血液外，胸腔積液、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液等中均可檢出。不能通過胎盤。第5頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三CRP超敏CRP（hs-CRP）與CRP為同一種蛋白質(zhì)，該檢測方法具有能檢測到小于或等于0.3mg/L的CRP的能力。第6頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三在感染發(fā)生后6-8小時開始升高，24-48小時達高峰。升高的幅度與感染的程度正相關(guān)，可升高幾百倍甚至上千倍；成人或兒童10-99mg/L提示局灶性或淺表性感染；大于或等于100mg/L提示敗血癥或侵襲性感染等。疾病治愈后，含量急速下降，1周內(nèi)可恢復(fù)正常。第7頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三CRP病毒性感染時CRP一般不升高。外科損傷患者血CRP水平在8-10小時內(nèi)可增加10倍。第8頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體，為相對分子量13000的糖蛋白，無激素活性。由甲狀腺的髓質(zhì)細胞分泌。先由甲狀腺濾泡旁細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)翻譯為PCT前體，PCT前體在進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，經(jīng)糖基化、剪切后成為PCT。第9頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT正常情況下，血漿中PCT含量極少（低于0.1μg/L）。細菌、真菌、寄生蟲感染、SIRS、膿毒癥、敗血癥、創(chuàng)傷等時，PCT顯著增高，可達正常的幾倍甚至上萬倍。病毒性感染、腫瘤、自身免疫性疾病等時正?；蜉p度升高。第10頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT全身細菌感染患者血清PCT水平比CPR出現(xiàn)早。感染后2h開始升高，6h急劇上升，8-24h維持高水平。血清PCT非常穩(wěn)定，收集標(biāo)本24h后PCT濃度在室溫下大約下降12%，4度時下降6%，容易檢測。第11頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT抗生素治療有效時，PCT的降低早于臨床癥狀的改善。PCT水平持續(xù)升高提示炎癥處于上升期或提示病情趨于惡化，反之亦然。第12頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT與膿毒癥PCT在診斷血培養(yǎng)陽性膿毒癥患者的意義優(yōu)于CRP。PCT與膿毒癥相關(guān)器官衰竭評分（SOFA評分）有顯著相關(guān)性。HurM,etal.ComparisonofdiagnosticutilitybetweenprocalcitoninandC-reactiveproteinforthepatientswithbloodculture-positivesepsis.2009.SudhirU,etal.Significanceofserumprocalcitonininsepsis.2011.第13頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT與胰腺炎急性水腫型胰腺炎和無菌壞死胰腺炎PCT無顯著變化。重癥胰腺炎血清PCT明顯高于輕型患者。PCT>0.5μg/L，提示重癥胰腺炎；>1.8μg/L可預(yù)測胰腺感染壞死。BülbüllerN,etal.Procalcitoninisapredictivemarkerforsevereacutepancreatitis.2006.PavlidisTE,etal.Advancesinprognosticfactorsinacutepancreatitis,amini-review.2010.第14頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT與胰腺炎PCT可作為急性胰腺炎發(fā)生感染并發(fā)癥的指標(biāo)，并可區(qū)分重癥胰腺炎和輕癥胰腺炎及作為觀察療效的指標(biāo)，其升高程度還可反映全身炎癥感染激發(fā)器官衰竭的嚴(yán)重性。第15頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT與細菌性腦膜炎細菌性腦膜炎患者PCT明顯高于病毒性腦膜炎組。以PCT>2μg/L診斷細菌性腦膜炎的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為100%、66%、68%、100%；以PCT>0.5μg/L診斷細菌性腦膜炎的靈敏度、特異度分別為99%、83%。第16頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT與自身免疫性疾病PCT不受自身免疫性疾病活動的影響，僅在全身感染時顯著升高。不受激素使用劑量或其他免疫抑制因素的影響?？捎脕龛b別自身免疫病是否同時合并感染。第17頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三PCT與真菌感染真菌感染時，PCT輕度升高。其水平高低有助于鑒別細菌或真菌感染。PCT<2μg/L預(yù)測真菌血癥的陽性預(yù)測值>90%，可排除細菌血癥的陰性預(yù)測值為94%。第18頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三結(jié)核病診斷皮膚結(jié)核菌素試驗特異性較低對免疫抑制者診斷靈敏度低操作簡便，成本低廉第19頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三T-SPOT.TB（T細胞斑點試驗）檢測原理結(jié)核桿菌：胞內(nèi)感染病原體，感染后難以徹底清除；結(jié)核桿菌激發(fā)機體產(chǎn)生較強的Th1細胞介導(dǎo)的細胞免疫；效應(yīng)T細胞被近期暴露的抗原再次刺激后釋放γ-干擾素；第20頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三T-SPOT.TB（T細胞斑點試驗）檢測原理使用結(jié)核分枝桿菌特有的片段即缺失區(qū)域（deletionregion,RD）RD1基因編碼的早期分泌靶抗原6（earlysecretedantigenictarget6,ESAT-6）和培養(yǎng)過濾蛋白10（culturefiltrateprotein10,CFP-10）作為近期抗原刺激；應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)（enzyme-linkedimmunosotassay,ELISPOT）檢測經(jīng)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激后釋放γ-干擾素的細胞數(shù)量。第21頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三特點敏感性高：能從60000個分泌γ-干擾素的細胞中檢測出1個細胞；特異性高：只有結(jié)核分枝桿菌和極少數(shù)非結(jié)核分枝桿菌才會出現(xiàn)陽性反應(yīng)，BCG及其他多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌無陽性反應(yīng)；受機體免疫狀態(tài)的影響較??；第22頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三特點對活動性肺結(jié)核、肺外結(jié)核、潛伏性結(jié)核感染及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測；對胸腔積液中的單核細胞進行T-SPOT.TB檢測有助于結(jié)核性胸膜炎的診斷；可進行療效評估。第23頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三缺點檢測步驟較繁瑣；對實驗室條件和技術(shù)要求較高；所需儀器和試劑昂貴；不能完全鑒別潛伏性結(jié)核感染與活動性結(jié)核感染。第24頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三真菌抗原、細胞壁成分檢測G試驗：診斷是否真菌感染，但不能區(qū)別是曲菌或酵母樣真菌；對隱球菌、接合菌無意義。GM試驗：血漿、血清、BAL、胸水、CSF，診斷是否曲霉菌感染；乳膠凝集試驗：檢測循環(huán)莢膜抗原，診斷是否新生隱球菌。第25頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三G試驗檢測1-3-β-D-葡聚糖是多種不同類真菌的細胞壁的共有成分，其相對分子量6800部分可激活馬蹄蟹的協(xié)同凝集酶-G因子（發(fā)生凝集），用于系統(tǒng)性真菌病的篩選。正常人含量為4pg/ul，深部念珠菌病人可增加數(shù)倍。特點：與癥狀的消長成正比，可用于療效觀察。第26頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三G試驗的臨床意義早期、快速診斷侵襲性真菌感染可用于真菌感染早期篩查，適用于念珠菌、曲霉、肺孢子菌、鐮刀菌、地霉、組織細胞漿菌和毛孢子菌等，不能用于檢測隱球菌和接合菌感染；對真菌感染病癥進行診斷，陽性結(jié)果代表存在侵襲性真菌感染。第27頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三半乳甘露聚糖（GM試驗）半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）是曲霉菌細胞壁的組成成分，當(dāng)曲霉在組織生長時可釋放進入血循環(huán)。監(jiān)測的是半乳甘露聚糖，主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷。但菌絲生長時，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原。GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度。連續(xù)檢測GM可作為治療療效的監(jiān)測。第28頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三GM試驗臨床意義診斷侵襲性真菌感染血清GM檢測能區(qū)分侵襲性肺曲霉感染與白色假絲酵母菌、毛霉、肺炎鏈球菌感染和煙曲霉口咽定植。但不能區(qū)分曲霉菌種。評價療效的可靠指標(biāo)。第29頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三GM試驗與G試驗小結(jié)可作為推定診斷的標(biāo)準(zhǔn)。GM：檢測半乳甘露聚糖，對曲霉菌感染診斷特異性強，假陽性反應(yīng)可以在青霉菌屬中出現(xiàn)；部分含青霉烷砜衍生物的抗菌藥物可以誘發(fā)陽性反應(yīng)。G試驗：檢測1-3-β-D-葡聚糖，在很多真菌中都可以出現(xiàn)陽性反應(yīng)，但在隱球菌、接合菌、毛霉、根霉呈陰性反應(yīng)。第30頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三隱球菌病新生隱球菌好發(fā)于細胞免疫功能低下者，在免疫功能正常的人群中，感染率約為十萬分之一。在免疫抑制患者中，發(fā)病率約為5-10%。在AIDS患者中，感染率高達30%，在國外隱球菌病已成為艾滋病患者常見的并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致患者死亡的重要原因。新生隱球菌循環(huán)莢膜抗原是新生隱球菌病，尤其是新生隱球菌腦膜炎的診斷手段。第31頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三隱球菌莢膜多糖抗原檢測敏感性和特異性高最有價值和應(yīng)用最廣的免疫學(xué)方法抗原滴度與疾病轉(zhuǎn)歸呈正相關(guān)可指導(dǎo)與治療判斷預(yù)后新生隱球菌乳膠凝集試驗5min可出結(jié)果，特異性達90-100%，可檢測35ng/ul的抗原第32頁，講稿共35頁，2023年5月2日，星期三乳膠凝集試驗對隱球菌腦膜炎的診斷價值168例患者中，隱球菌抗原乳膠凝集試驗法檢測陽性19例，18例為隱球菌腦膜炎，1例為病毒性腦膜炎。墨汁染色涂片：敏感性61.1%，特異性100%。腦脊液真菌培養(yǎng)