遺傳實(shí)驗(yàn)人類染色體組型分析

關(guān)于遺傳實(shí)驗(yàn)人類染色體組型分析第1頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三一、實(shí)驗(yàn)原理組型(核型,karyotype)是將一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的染色體按照一定的順序排列起來(lái)所構(gòu)成的圖像.

通常以模式圖的方式表示,它是通過(guò)對(duì)許多細(xì)胞染色體的測(cè)量取其平均值繪制而成的,代表了一物種染色體組型的特征.由于染色體是遺傳物質(zhì)單位——基因的載體,組型代表了種屬的特征.所以組型分析對(duì)于探討人類遺傳病的機(jī)制等方面具有重要意義.第2頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆杖旧w組型分析的各種數(shù)據(jù)指標(biāo)學(xué)習(xí)染色體組型分析方法制作人類染色體組的核型圖片第3頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三三、染色體的特征數(shù)目（2n=？）長(zhǎng)度（絕對(duì)長(zhǎng)度、相對(duì)長(zhǎng)度）著絲粒位置（M\SM\ST\T）隨體與次溢痕的數(shù)目、大小和位置帶型分析第4頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三四、應(yīng)用意義染色體組型分析——染色體水平上的表型可確定物種的特征，確定種屬親緣關(guān)系分析生物物種的變異和進(jìn)化過(guò)程識(shí)別單條染色體、基因定位臨床應(yīng)用（染色體疾病、產(chǎn)前診斷）第5頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三五、人類染色體及其制備方法1、人類染色體的特征和類型染色體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征在細(xì)胞周期中，以細(xì)胞分裂中期最為典型，稱為中期染色體。第6頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三

每一個(gè)中期染色體均由兩條染色單體構(gòu)成，每一條染色單體由一個(gè)DNA分子螺旋而成。兩條染色單體互稱為姐妹染色單體。兩條染色單體通過(guò)一個(gè)著絲粒彼此連接。著絲粒將染色體分為兩臂，長(zhǎng)臂（q）和短臂（p）。如何獲得中期染色體?第7頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三染色體形態(tài)測(cè)量數(shù)據(jù)第8頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三名稱臂比(長(zhǎng)/短)符號(hào)分裂后期形態(tài)中間著絲粒染色體1－1.7mV近中間著絲粒染色體1.7－3smL近端著絲粒染色體3－7stl頂端著絲粒染色體7－∞tI染色體的類型第9頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三2、人類染色體形態(tài)中央著絲粒染色體亞中著絲粒染色體近端著絲粒染色體中央著絲粒染色體,著絲粒位于染色體的1/2處。亞中著絲粒染色體,著絲粒位于染色體的5/8處近端著絲粒染色體,著絲粒位于染色體的7/8處第10頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三3、人類的正常核型根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（ISCN），依據(jù)染色體的形態(tài)、大小和著絲粒的位置，將染色體分為七組：第11頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三組別染色體編號(hào)大小著絲粒位置

A1～3最大中、亞中

B4、5大亞中

C6～12+X中亞中

D13～15中近端

E16～18較小中、亞中

F19、20小中

G21、22+Y，最小近端第12頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三核型的描述

染色體總數(shù)，性染色體正常男性46

，XY正常女性46，XX第13頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三染色體顯帶染色體顯帶：經(jīng)不同的方法處理染色體，經(jīng)染色后使染色體在縱軸上顯示明、暗或著色深、淺相間的橫紋即顯帶（Banding）。這種帶對(duì)每一條染色體來(lái)說(shuō)都是獨(dú)特的，可以區(qū)分和確認(rèn)每一條染色體。第14頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三4、人類染色體的帶型G-Banding第15頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三人類G顯帶染色體模式圖

第16頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三G帶先經(jīng)鹽,堿,熱,胰酶或蛋白酶,尿素及去垢劑等處理后,再用Giemsa染液染色優(yōu)點(diǎn)：G帶在各條染色體上顯出的帶型和Q帶型基本相同，普通顯微鏡下可以觀察第17頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三中期染色體的形態(tài)、帶型（G顯帶）第18頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三Q-Banding(Quinacrine)第19頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三Q帶缺點(diǎn)：熒光持續(xù)存在的時(shí)間很短，必須有熒光顯微鏡才能進(jìn)行觀察熒光染料氮芥喹葉優(yōu)點(diǎn)：受制片過(guò)程和熱處理的影響較小,制片效果較好,帶型鮮明第20頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三R-Banding第21頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三R帶中期染色體不經(jīng)鹽酸水解或不經(jīng)胰酶處理的情況下，經(jīng)吉姆薩染色后所呈現(xiàn)的區(qū)帶所呈現(xiàn)的是G帶染色后的帶間不著色區(qū)，故又稱反帶第22頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三第23頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三C帶將中期染色體先經(jīng)鹽酸，后經(jīng)堿（如氫氧化鋇）處理，再用吉姆薩染色顯示的是緊鄰著絲粒的異染色質(zhì)區(qū)又稱著絲粒異染色質(zhì)帶第24頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三C帶的形成是高度重復(fù)序列的DNA（異染色質(zhì)）經(jīng)酸堿變性和復(fù)性處理后，易于復(fù)性，而低重復(fù)序列和單一序列DNA（常染色質(zhì)）不復(fù)性，經(jīng)Giemsa染色后呈現(xiàn)深淺不同的染色反應(yīng)。這種差異反映染色體結(jié)構(gòu)的差異

第25頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三T帶又稱端粒帶，是染色體的端粒部位經(jīng)吉姆薩和吖啶橙染色后所呈現(xiàn)的區(qū)帶，典型的T帶呈綠色。第26頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三人類23對(duì)染色體第27頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三單色FISH第28頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三染色體著絲粒熒光第29頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三染色體端粒熒光第30頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三多色FISH的組型分析（24種染色）第31頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)胞培養(yǎng)與染色體制備

正常人外周血或細(xì)胞

RPMI1640培養(yǎng)基+15%小牛血清=5ml

370C，培養(yǎng)68hr

加秋水仙素，培養(yǎng)2～4hr（抑制細(xì)胞分裂）

收集細(xì)胞離心，去上清液（1000rpm/10min）低滲處理，0.075MKCI，370C，25min

預(yù)固定，甲醇：冰醋酸=3：1

離心，去上清液（1000rpm/10min）重復(fù)固定三次制片，染色，觀察，照相，組型。第32頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三人體染色體顯微照片第33頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三四、實(shí)驗(yàn)器材人染色體顯微照片,剪刀,鑷子,膠水.第34頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三五、本實(shí)驗(yàn)的步驟1.同源染色體配對(duì)編號(hào):按圖片上的染色體大小,形態(tài),著絲粒位置,隨體有無(wú),進(jìn)行同源染色體配對(duì),將染色體分為22對(duì)常染色體和一對(duì)性染色體.編號(hào)為1-22號(hào),性染色體編號(hào)為23號(hào).2.分組:將大小,形態(tài),著絲粒位置相近的染色體歸為一組,一般分為A-G的7個(gè)組，每組3對(duì)染色體。3.粘貼:在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上劃8條橫線,用剪刀按編號(hào)將圖片上的染色體分別剪下,分組排列粘貼在橫線上.如A組排列1-3對(duì)染色體,C組排列6-12對(duì)染色體等.性染色體單獨(dú)排列在一條線上.第35頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三第36頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三各組染色體主要特征:組別編號(hào)特征隨體A1-3大型染色體，具中部著絲點(diǎn)無(wú)B4-5大型染色體，近中部著絲點(diǎn)，4號(hào)稍長(zhǎng)無(wú)C6-12中等大小的近中部著絲點(diǎn)。其中6，7，8，11比9，10，12更近于中部著絲點(diǎn)無(wú)D13-15中等大小，具末端著絲點(diǎn)有E16-18較短的近中著絲點(diǎn)，16號(hào)更近于中部著絲點(diǎn)無(wú)F19-20短的近中著絲點(diǎn)無(wú)G21-22很短的末端著絲點(diǎn)有性染色體23X染色體很象6號(hào)染色體，中著絲點(diǎn)。Y染色體很象21，22號(hào)染色體，但Y染色體無(wú)隨體無(wú)第37頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三正常男性—46,XY第38頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三正常女性—46,XX第39頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三Trisomy21(47,XY,+21)–Down

Syndrome第40頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三先天愚綜合癥(21三體)第41頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三Trisomy18(47,XY,+18)–Edward

Syndrome第42頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三第43頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三Trisomy13(47,XY,+13)–Patau

Syndrome第44頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三第45頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三KlinefelterSyndrome第46頁(yè)，講稿共50頁(yè)，2023年5月2日，星期三

睪丸退化癥