任務(wù)二人工授精講課件

任務(wù)二、人工授精第一節(jié)概述概念人工授精是利用器械采集雄性動(dòng)物的精液。經(jīng)檢查和處理后，再用器械將精液輸入到發(fā)情雌性動(dòng)物的生殖道內(nèi)，以代替自然交配而繁殖后代的一種技術(shù)。

一、人工授精的發(fā)展概況人工授精的發(fā)展經(jīng)歷下列三個(gè)階段：1.試驗(yàn)階段：1780年，意大利生理學(xué)家Spallanzani，第一次成功地用狗進(jìn)行了人工授精試驗(yàn)。

2.實(shí)用階段：上世紀(jì)40-60年代，人工授精的應(yīng)用蓬勃發(fā)展成為繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，發(fā)展最快，技術(shù)水平較高。

3．冷凍精液階段：50年代英國(guó)的Smith和Polge研究牛精液的冷凍保存方法，人工授精技術(shù)進(jìn)入了一個(gè)新的發(fā)展階段。

二、人工授精的優(yōu)越性1.最大限度地提高優(yōu)秀種公畜的利用率2.大幅度減少種公畜的頭數(shù)，降低了飼養(yǎng)管理費(fèi)用

3.控制疾病傳播

4.有利于提高母畜的受胎率

5.能夠使配種不受地域和時(shí)間的限制。

6.克服公、母畜體型懸殊而出現(xiàn)的交配困難7.加速家畜品種改良，促進(jìn)育種工作

三、人工授精的限制1、通過(guò)人工授精可能使不良的公畜影響范圍更大2、必須投入一定資金，進(jìn)行房舍建設(shè)和設(shè)備購(gòu)置3、必須進(jìn)行人員的技術(shù)培訓(xùn)，不良的操作會(huì)造成更嚴(yán)重的問(wèn)題第二節(jié)采精采精的基本要求安全：對(duì)種公畜、對(duì)人員必須確保安全潔凈：采集的精液不能受到任何生物和化學(xué)污染全部：能夠采集到種公畜全部的精液簡(jiǎn)單:設(shè)備\用品要簡(jiǎn)單,拆卸方便,操作方便目錄一、采精前的準(zhǔn)備目錄（一）采精場(chǎng)地

采精要有一定的采精環(huán)境，以便雄性動(dòng)物建立起鞏固的條件反射，同時(shí)防止精液污染。采精場(chǎng)地應(yīng)該寬敞、平坦、安靜、清潔，場(chǎng)內(nèi)設(shè)有采精架以保定臺(tái)畜，或設(shè)立假臺(tái)畜，供公畜爬跨進(jìn)行采精，采精場(chǎng)應(yīng)與人工授精操作室和公畜舍相連。室內(nèi)采精場(chǎng)的面積一般為10×10平方米，并附設(shè)噴灑消毒和紫外線照射殺菌設(shè)備。

目錄（二）臺(tái)畜的準(zhǔn)備

臺(tái)畜有真假臺(tái)畜之分真臺(tái)畜是指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺(tái)畜。真臺(tái)畜應(yīng)健康、體壯、大小適中、性情溫順。選發(fā)情的母畜比較理想，經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的公、母畜也可作臺(tái)畜。假臺(tái)畜即采精臺(tái)，是模仿母畜體型高低大小，選用金屬材料或木料做成的一個(gè)具有一定支撐力的支架。目錄（三）調(diào)教種公畜爬跨假臺(tái)畜利用假臺(tái)畜采精，要事先對(duì)種公畜進(jìn)行調(diào)教，使其建立條件反射。調(diào)教的方法有如下幾種：

1.在假臺(tái)畜的后軀涂抹發(fā)情母畜的陰道粘液或尿液，公畜則會(huì)受到剌激而引起性興奮并爬跨假臺(tái)畜，經(jīng)過(guò)幾次采精后即可調(diào)教成功；

2.在假臺(tái)畜旁邊牽一發(fā)情母畜，誘使公畜進(jìn)行爬跨，但不讓交配而把其拉下，反復(fù)多次，待公畜性沖動(dòng)達(dá)到高峰時(shí)，迅速牽走母畜，令其爬跨假臺(tái)畜采精；

3.將待調(diào)教的公畜拴系在假臺(tái)畜附近，讓其目睹另一頭已調(diào)教好的公畜爬跨假臺(tái)畜，然后再誘其爬跨；

目錄公畜調(diào)教時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)

1.調(diào)教過(guò)程中，要反復(fù)進(jìn)行訓(xùn)練，耐心誘導(dǎo)，切勿施用強(qiáng)迫、恐嚇、抽打

等不良剌激，以防止性抑制而給調(diào)教造成困難；

2.調(diào)教時(shí)應(yīng)注意公畜外生殖器的清潔衛(wèi)生；

3.最好選擇在早上調(diào)教，早上精力充沛，性欲盛；

4.調(diào)教時(shí)間、地點(diǎn)要固定，每次調(diào)教時(shí)間不宜長(zhǎng)；

目錄(三)器械準(zhǔn)備

采精所需要的器械要事先準(zhǔn)備好，力求清潔無(wú)菌，在使用之前要嚴(yán)格消毒，每次使用后必須洗刷干凈。

目錄(四)種公畜的準(zhǔn)備

種公畜采精前的準(zhǔn)備，包括體表的清潔消毒和誘情（性準(zhǔn)備）兩個(gè)方面。這和精液的質(zhì)量和數(shù)量都有密切的關(guān)系。采精前應(yīng)擦拭公畜下腹部，用0.1%高錳酸鉀溶液等洗凈其包皮外并抹干，擠出包皮腔內(nèi)積尿和其他殘留物并抹干。在采精前，需以不同誘情方法使公畜有充分的性興奮和性欲，一般采取讓公畜在臺(tái)畜附近停留片刻，進(jìn)行幾次假爬跨。

目錄二、采精技術(shù)

目錄采精方法目錄雄性動(dòng)物的采精方法很多，主要有假陰道法、手握法、按摩法、電剌激法等。

假陰道法適用于各種家畜和部分小動(dòng)物手握法是當(dāng)前公豬采精普遍應(yīng)用的方法按摩法主要用于禽類和犬類電剌激法主要用于野生動(dòng)物的采精。

（一）假陰道法原理：它是模擬發(fā)情母畜陰道環(huán)境條件的人工陰道，誘導(dǎo)公畜射精而采集精液的方法。1.假陰道的結(jié)構(gòu)

假陰道是一筒狀結(jié)構(gòu)，主要由外殼、內(nèi)胎、集精杯及附件組成。外殼為一圓筒，由輕質(zhì)鐵皮或硬塑料制成，內(nèi)胎為彈性強(qiáng)、薄而柔軟無(wú)毒的橡膠筒，裝在外殼內(nèi)，構(gòu)成假陰道內(nèi)壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，裝在假陰道的一端。此外，還有固定內(nèi)胎的膠圈，保定集精杯用的三角保定帶，充氣用的活塞和雙聯(lián)球等一些附件。各種家畜的假陰道結(jié)構(gòu)基本相同，但形狀和大小不一。目錄2.假陰道的準(zhǔn)備

假陰道應(yīng)具備五個(gè)條件：

1)適宜溫度：采精時(shí)假陰道內(nèi)腔溫度應(yīng)保持在38-40℃，集精杯也應(yīng)保持34-35℃。

2)適當(dāng)壓力：借助注入水和空氣來(lái)調(diào)節(jié)假陰道的壓力。

3)適當(dāng)潤(rùn)滑度：涂抹潤(rùn)滑劑的部位是假陰道前段1/3-1/2處到外口周圍，但涂布不可過(guò)長(zhǎng)過(guò)多。。

4)無(wú)菌：凡接觸精液的部分均須經(jīng)消毒。

5)無(wú)破損漏洞：假陰道不得漏水或漏氣。目錄牛羊假陰道安裝充氣后理想的狀態(tài)不太理想的狀態(tài)（但可以用）牛的假陰道法采精(二)手握法適用于豬的采精。是目前廣泛使用的采集的一種方法。操作時(shí)，采精員要戴上滅菌膠手套，蹲在假臺(tái)畜左側(cè)，待公豬爬跨臺(tái)畜后，當(dāng)陰莖從包皮內(nèi)開(kāi)始伸出時(shí)，立即緊握龜頭，待其抽送片刻后，鎖定公豬的龜頭。待陰莖充分勃起時(shí)，順勢(shì)牽引向前，就能導(dǎo)致公豬射精。另一只手持帶有一次過(guò)濾網(wǎng)的的集精杯收集精子濃厚部分的精液，其它稀薄精液及顆粒狀膠凍分泌物排出時(shí)可隨時(shí)棄掉。分段采精：棄掉含副性腺分泌物多、精子較少、精液清亮白色的第一段和精液較稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液濃、精子多、呈乳白色的第二段。

目錄例：犬的采精：第1階段：左膝單跪于公犬左側(cè)，右手隔公犬包皮套弄其陰莖，使球狀海綿體暴露于包皮外。一般公犬在球狀海綿體完全勃起的情況下即射出第1階段的精液。（尿道球腺分泌的水樣粘液，無(wú)精子）第2階段：繼續(xù)刺激暴露于包皮外的球狀海綿體。反復(fù)的握緊公犬球狀海綿體。持續(xù)2～5min，公犬會(huì)射出第2階段的精液。（來(lái)自睪丸，富含有精子，呈白色粘滑液體）在第二段射精后，公犬表現(xiàn)為抬起一只后腿企圖越過(guò)采精者的手臂。第3階段：采取與第2階段相同的刺激手法。大約持續(xù)3~5min，公犬會(huì)射出第3階段的精液。（前列腺分泌物，容量較多，含有少量精子）豬的拳握法采精(三)電剌激法本法是通過(guò)電流剌激公畜引起射精而采集精液的一種方法。適用于各種動(dòng)物。電剌激采精器由電子控制器和電極探棒兩部分組成。電剌激采精應(yīng)將公畜以站立或側(cè)臥姿勢(shì)保定。保定后，剪去包皮及其周圍的被毛，并用生理鹽水沖洗拭干，然后將電極探棒經(jīng)肛門緩慢插入直腸，達(dá)到靠近輸精管壺腹部的直腸底壁，大家畜插入深度約20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后調(diào)節(jié)控制器，選擇好頻率，開(kāi)通電源。調(diào)節(jié)電壓時(shí)，由低開(kāi)始，按一定時(shí)間通電及間歇，逐步增高剌激強(qiáng)度和電壓，直至公畜伸出陰莖，勃起射精，將精液收集于附有保溫裝置的集精瓶?jī)?nèi)。

目錄三、采精頻率采精頻率是指每周對(duì)雄性動(dòng)物的采精次數(shù)。為了既能最大限度地采集精液，又能維持其健康體況和正常生殖機(jī)能，必須合理安排采精頻率。為保證精液品質(zhì)，每周不超過(guò)兩次為宜目錄第三節(jié)精液品質(zhì)檢查目錄一、目的二、項(xiàng)目三、方法一、檢查的目的

1.檢查種公畜的配種能力

2.公畜的繁殖問(wèn)題

3.確定精液可稀釋的倍數(shù)

4.檢查精液的處理方法是否正確

5.檢查精液產(chǎn)品的質(zhì)量返回目錄二、檢查的項(xiàng)目（一）直觀項(xiàng)目

（二）微觀項(xiàng)目返回目錄(一)直觀檢查項(xiàng)目射精量色澤氣味云霧狀pH值液態(tài)雜質(zhì)美蘭退色試驗(yàn)(二)微觀檢查項(xiàng)目精子活力估測(cè)精子活力計(jì)數(shù)密度測(cè)定:計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)、比色計(jì)測(cè)定畸形率：形態(tài)畸形率、頂體畸形率返回目錄三、主要項(xiàng)目檢查方法（一）直觀項(xiàng)目檢查（二）微觀項(xiàng)目檢查（一）直觀項(xiàng)目檢查1.射精量2.色澤3.氣味4.云霧狀5.雜質(zhì)6.液化7.pH(1)射精量的測(cè)定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因1.射精量返回（一）(1)射精量的測(cè)定方法概念:射精量是指每次射精的體積測(cè)定:以連續(xù)3次以上正常采集到的精液的平均值代表測(cè)定方法:可用體積測(cè)量容器如刻度試管或量筒,也可用電子秤稱重近似代表體積返回1.(2)公畜的正常射精量影響射精量的因素:種類、睪丸大小質(zhì)地、季節(jié)、健康狀況不同畜種的正常射精量：畜種奶牛水牛馬豬綿羊山羊射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5柱形圖犬2-15不同畜種的射精量比較原因（3）射精量不正常的原因現(xiàn)象原因過(guò)少采精過(guò)頻、性機(jī)能衰退、睪丸炎、發(fā)育不良過(guò)多副性腺發(fā)炎、假陰道漏水、尿潴留、采精操作不熟練返回1.2.色澤色澤：是指精液的顏色及其濃厚程度，它某種程度反應(yīng)精液是否正常，精子的濃度高低。正常的精液：豬：淺灰白至白色牛羊：乳白色或乳黃色

不正常精液原因分析正常精液特征依從濃到?。喝辄S-乳白-白色-灰白淡紅（鮮紅）生殖道下段出血或龜頭出血淡紅（暗紅）副性腺或生殖道出血綠副性腺或尿生殖道化膿褐、黃混有尿液3.氣味正常的精液：應(yīng)沒(méi)有很濃的氣味，或略帶動(dòng)物特有的腥膻味腥味：有膿液臊味：有尿液或包皮液4.云霧狀是指新鮮精液在33-35℃溫度下，精子成群運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的上下翻卷的現(xiàn)象。云霧狀的明顯程度代表高濃度的精液中精子活力的高低。云霧狀分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)+++翻卷明顯而且較快++翻卷明顯但較慢+仔細(xì)看才能看到精液的移動(dòng)-無(wú)精液移動(dòng)（二）微觀項(xiàng)目檢查1.活力估測(cè)2.密度測(cè)定3.畸形率測(cè)定1.活力的估測(cè)(1)概念:37℃下,精液中前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占總精子數(shù)的百分率(2)主要測(cè)定方法:估測(cè)法活力測(cè)定時(shí)精液的稀釋用品例：牛精子活力檢查的程序載玻片預(yù)溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測(cè)活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺(tái)上，打開(kāi)電源并調(diào)整控制溫度至37℃，然后放在載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預(yù)溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片用100倍和400倍觀察判斷視野中前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占的百分率按10級(jí)制評(píng)分和記錄評(píng)定精子活力多采用“十級(jí)一分制”，如果精液中有80％的精子作直線運(yùn)動(dòng)，精子活力計(jì)為0.8；如有50％的精子作直線運(yùn)動(dòng)，活力計(jì)為0.5，以此類推。評(píng)定精子活力的準(zhǔn)確度與經(jīng)驗(yàn)有關(guān)，具有主觀性，檢查時(shí)要多看幾個(gè)視野，取平均值。2）其他檢測(cè)精子活力方法存活時(shí)間及存活指數(shù)檢查

存活時(shí)間：指精子在體外的總生存時(shí)間。將稀釋液置于一定的溫度下（0℃或37℃），間隔一定時(shí)間檢查活率，直至無(wú)活動(dòng)精子為止，所需的總小時(shí)數(shù)為存活時(shí)間。存活指數(shù)：指平均存活時(shí)間，表示精子的活率下降速度。

生存指數(shù)：指相鄰兩次檢查的平均活率與間隔時(shí)間乘積的總和。精子存活時(shí)間越長(zhǎng)，生存指數(shù)越大，說(shuō)明精子生活力越強(qiáng)，品質(zhì)越好。

2.精子的密度檢查(1)密度的概念及表示方法單位體積精液中所含的精子數(shù)表示方法:個(gè)/ml或億/ml(2)各種家畜精液的精子密度畜種牛羊豬馬雞密度億/ml8-1220-302-31.5-330-50(3)各種家畜精子密度比較（3）密度測(cè)定方法：①估測(cè)法②使用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定法精子密度檢查（①估測(cè)法）取一小滴精液滴在清潔載玻片上，用另一載玻片輕推，使精液成一薄層，400×鏡下觀察密：視野中精子密度很大，彼此間隙很小，看不清楚各精子運(yùn)動(dòng)狀況（約≥10億/ml)中：精子間空隙明顯，彼此間約有一個(gè)精子長(zhǎng)度的空隙（約2億～10億/ml)?。壕娱g空隙超過(guò)1個(gè)精子長(zhǎng)度（約≤2億/ml）②使用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定法精子密度計(jì)數(shù)板(器)簡(jiǎn)介精液的稀釋精液注入計(jì)數(shù)室精子計(jì)數(shù)精子密度計(jì)算精子密度計(jì)數(shù)板(器)簡(jiǎn)介精子計(jì)數(shù)室長(zhǎng)寬各1mm,面積1mm2高度0.1mm,體積0.1mm3由雙線或三線組成25個(gè)(5X5)中方格每個(gè)中方格內(nèi)有16個(gè)小方格(4X4)共計(jì)400個(gè)小方格精子計(jì)數(shù)室及一個(gè)中方格返回密度測(cè)定之精液稀釋將精液注入計(jì)數(shù)室前必須對(duì)精液進(jìn)行稀釋,以便于計(jì)數(shù)稀釋的比例根據(jù)動(dòng)物精液的密度范圍確定稀釋方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小試管中進(jìn)行組合不同的稀釋.如牛精液稀釋100倍,為5ul原精+495ul稀釋液稀釋液:3%氯化鈉溶液,用以殺死精子,便于計(jì)數(shù)注入計(jì)數(shù)室前

各種家畜精液建議稀釋比例畜種牛羊豬馬雞稀釋倍數(shù)10020040404003%氯化鈉ul原精液ul49559955975-25195-519955返回精液注入計(jì)數(shù)室將潔凈的計(jì)數(shù)板放在載物臺(tái)上固定好,蓋上干凈的蓋玻片取25ul稀釋后的精液,將吸咀放于蓋玻片與計(jì)數(shù)板的接縫處緩慢注入精液,使精液依靠毛細(xì)作用吸入計(jì)數(shù)室注意：讓稀釋后的精液通過(guò)毛細(xì)作用自行吸入！用吸管稀釋后精液注入計(jì)數(shù)室共有兩個(gè)對(duì)稱的計(jì)數(shù)室用移液器注入精液返回精子計(jì)數(shù)將計(jì)數(shù)板固定在顯微鏡的推進(jìn)器內(nèi)，用100倍放大找到計(jì)數(shù)室，再用400倍找到計(jì)數(shù)室的第一個(gè)中方格。計(jì)數(shù)左上角至右下角五個(gè)中方格的總精子數(shù)，以精子的頭部為準(zhǔn)，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)格線上的精子。進(jìn)行精子計(jì)數(shù)的中方格數(shù)可以是四角一中心共5個(gè)中方格也可以是從左角到右下角五個(gè)中方格以圖示次序計(jì)數(shù)，精子的頭部為準(zhǔn)，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)格線上的精子。白色精子不計(jì)數(shù)返回計(jì)算精子密度精子密度=5個(gè)中方格總精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)1ml原精液中的精子總數(shù)＝5個(gè)中方格內(nèi)精子數(shù)×5（25個(gè)中方格）×10（1mm3內(nèi)精子數(shù)）×1000（1ml=1000mm3）×稀釋倍數(shù)稀釋的比例羊1:200，5個(gè)中方格的總精子數(shù)是95，則精子密度=95×5×10×1000×200=9.5億/ml例：牛精子密度測(cè)定程序放計(jì)數(shù)板于載物臺(tái)上取樣稀釋精液精液注入計(jì)數(shù)室鏡檢精子計(jì)數(shù)密度計(jì)算計(jì)數(shù)板和蓋玻片一定要清潔取500ul3%氯化鈉于小試管中,加入5ul原精液,混合均勻取25ul小心地從計(jì)數(shù)板與蓋玻片的接縫中加入,使其自行吸入計(jì)數(shù)室中用100倍和400倍觀察計(jì)數(shù)五個(gè)中方格的總精子數(shù),計(jì)數(shù)以頭部為準(zhǔn),在格線上的數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右精子密度=5個(gè)中方格總精子數(shù)5×10×1000×100結(jié)束3、畸形率檢查1）染色劑0.5克龍膽紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，過(guò)濾至試劑瓶中備用。美蘭、純蘭或紅墨水2）稀釋稀釋液0.9%NaCl牛：1:10羊:1:20豬:1:23）抹片左手食指和拇指向上捏住載玻片兩端，使載玻片處于水平狀態(tài)，取10ul稀釋后的精液滴至載玻片右側(cè)。右手拿一載玻片或蓋玻片，使其與左手拿的載玻片呈向右的45度角，并使其接觸面在精液滴的左側(cè)。將載玻片向右拉至精液剛好進(jìn)入兩載（蓋）玻片形成的角縫中，然后平穩(wěn)地向左推至左邊。抹片后，使其自然風(fēng)干。4）固定在抹片上滴95%的酒精數(shù)滴，固定4分鐘，甩去多余的酒精5）染色將載玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龍膽紫或其它染色劑5-10滴，5分鐘后，用洗瓶或自來(lái)水輕輕沖去染色劑，甩去水分涼干。6）檢查畸形率將載玻片放在400或640倍的顯微鏡下進(jìn)行觀察，共記錄若干個(gè)視野100-200個(gè)左右的精子。7）畸形率種類精子畸形率：是指畸形精子占視野中總精子數(shù)的百分率。精子畸形分為四類：頭部畸形：頭部巨大、瘦小、細(xì)長(zhǎng)、缺損、雙頭、皺縮等。頸部畸形：頸部膨脹大、纖細(xì)、曲折、雙頸等。中段畸形：膨大、纖細(xì)、帶有原生質(zhì)滴等。主段畸形：彎曲、曲折、回旋、雙尾等。精子畸形率豬不超過(guò)18%，羊不超過(guò)14%，馬不超過(guò)12%。如果畸形率超過(guò)20%，則視為精液品質(zhì)不良，不能用做輸精?；尉右曇爸械幕尉与p頭和雙尾精子精子代謝能力測(cè)定（一）精液果糖分解測(cè)定（二）美藍(lán)褪色試驗(yàn)（三）精子耗氧量測(cè)定（四）微生物檢查（一）精液果糖分解測(cè)定果糖分解測(cè)定通常用1億精子在37℃厭氧條件下每小時(shí)消耗果糖的毫克數(shù)表示。由于精子還可以利用果糖以外的其他簡(jiǎn)單糖類，因此用含葡萄糖等稀釋液稀釋過(guò)的精液不能進(jìn)行測(cè)定。

（二）美藍(lán)褪色試驗(yàn)美藍(lán)是一種氧化還原劑，氧化時(shí)呈藍(lán)色，還原時(shí)無(wú)色。精子在美藍(lán)溶液中呼吸時(shí)氧化脫氫，美藍(lán)被還原而褪色。因此，根據(jù)美藍(lán)褪色時(shí)間的快慢即可估測(cè)出精子的密度和活力。

（三）精子耗氧量測(cè)定通常以1億個(gè)精子在37℃條件下每小時(shí)內(nèi)所消耗氧氣的微升（ul）數(shù)表示。一般家畜精液的耗氧量為5～22ul。（四）微生物檢查我國(guó)牛冷凍精液國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，解凍后的精液應(yīng)無(wú)病原微生物，每毫升中細(xì)菌菌落數(shù)不超過(guò)1000個(gè)。我國(guó)評(píng)定牛精液中細(xì)菌數(shù)通常采用平板培養(yǎng)法進(jìn)行，求出每毫升原精液內(nèi)的細(xì)菌數(shù)。第四節(jié)精液的稀釋（一）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)卵黃、蔗糖、葡萄糖等（二）保護(hù)性物質(zhì)緩沖物質(zhì)（檸檬酸鈉、磷酸鹽、Tris、EDTA）

抗凍物質(zhì)（甘油、乙二醇、二甲基亞砜（DMSO））

抗菌物質(zhì)（青霉素、鏈霉素）

（三）其他添加劑

酶類

激素類維生素類

二、稀釋液的種類和配制（一）稀釋液的種類1.現(xiàn)配現(xiàn)用稀釋液2.常溫保存稀釋液3.低溫保存稀釋液

4.冷凍保存稀釋液（二）稀釋液的配制

1.使用的一切用具，必須嚴(yán)格洗凈消毒

2.稀釋液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配

3.用蒸餾水或去離子水，要求新鮮

4.使用奶類要求新鮮，或脫脂奶粉為宜

5.抗生素、酶類、激素類、維生素等添加劑在使用前添加。

三、精液稀釋方法和稀釋倍數(shù)稀釋方法：原則：同溫，稀釋液加入精液，緩慢溫和稀釋倍數(shù)公牛：保證500萬(wàn)有效精子數(shù)/ml公豬：0.5億/ml為原則，稀釋2～4倍馬、驢：稀釋倍數(shù)一般為2～3倍

第五節(jié)精液的保存精液的保存液態(tài)精液保存精液冷凍保存常溫保存15～25℃低溫保存0～5℃干冰（-79℃）和液氮（-196℃

）一、常溫保存1.保存溫度15～

25

℃2.原理主要利用一定范圍的酸性環(huán)境來(lái)阻止精子運(yùn)動(dòng)，或用凍膠環(huán)境來(lái)阻止精子運(yùn)動(dòng)以減少能量消耗，來(lái)保持其受精能力。3.方法：向稀釋液中充二氧化碳?xì)怏w精子在代謝過(guò)程中自己產(chǎn)生的CO2

稀釋液中加有機(jī)酸類物質(zhì)和充氮?dú)舛⒌蜏乇４?.保存溫度

0～

5℃比長(zhǎng)溫保存時(shí)間長(zhǎng)，但豬的不如常溫保存效果好。2.保存原理主要利用低溫抑制精子活動(dòng)3.保存方法采用緩慢降溫，低溫保存三、冷凍保存1.冷源—干冰（-79℃）和液氮（-196℃

）2.原理：在0～

-60℃細(xì)胞內(nèi)水分子會(huì)形成冰晶。對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)產(chǎn)生損傷作用。在加入抗凍劑的情況下，快速降溫，越過(guò)上述有害溫區(qū)，在-60℃～-250℃溫區(qū)內(nèi)形成玻璃化。液氮的特性1）液氮是空氣中的氮?dú)饨?jīng)壓縮、分離形成的一種無(wú)色、無(wú)味、無(wú)毒的液體，沸點(diǎn)溫度為-195.8℃。2）在常溫下，液氮沸騰，吸收空氣中的水氣形成白色煙霧。3）液氮具有很強(qiáng)的揮發(fā)性，當(dāng)溫度升至18℃時(shí)，其體積可膨脹680倍。4）此外，液氮是一種不活潑的液體，滲透性差，無(wú)殺菌能力，但是-196℃的超低溫可使多數(shù)細(xì)菌、病毒停止繁殖。液氮罐精液冷凍操作規(guī)范（一）采精及精液品質(zhì)檢查精液冷凍效果與精液品質(zhì)密切相關(guān)。因此，用作冷凍的公畜精液，品質(zhì)應(yīng)比較優(yōu)良，活率高，密度大。一般原精活力在0.8級(jí)以上，密度中等以上效果最好。

（二）精液的稀釋

1.一次稀釋法：將含有甘油、卵黃等的稀釋液按一定比例加入精液中，適合于低倍稀釋。2.二次稀釋法：為避免甘油與精子接觸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而造成的危害，采用兩次稀釋法較為合理。首先用不含甘油的稀釋液（第一液）對(duì)精子進(jìn)行最后稀釋倍數(shù)的半倍稀釋，然后把該精液連同第二液一起降溫至0-5℃(全程1h左右)，并在此溫下作第二次稀釋。

（三）平衡采用一次稀釋法時(shí)，由于稀釋溫度為30℃，需經(jīng)1-2h緩慢降溫至0-5℃，以防冷休克的發(fā)生。平衡是降溫后，把稀釋后的精液放置在0-5℃的環(huán)境中停留2-4h，使甘油充分滲入精于內(nèi)部，起到膜內(nèi)保護(hù)劑作用的過(guò)程。4、精液的分裝

現(xiàn)行凍精常采用塑料細(xì)管、顆粒、玻璃安瓿、塑料薄膜(袋)、載片及膠囊等分裝方法。（1）塑料細(xì)管凍精

把平衡后的精液分裝到塑料細(xì)管中，細(xì)管的一端塞有細(xì)線或棉花，其間放置少量聚乙烯醇粉(吸水后形成活塞)，另一端封口，冷凍后保存。細(xì)管的長(zhǎng)度約13cm，容量有0.25、0.5或1.0ml。現(xiàn)生產(chǎn)中牛的凍精多用0.25ml劑型。細(xì)管凍精具有不受污染、容易標(biāo)記、易貯存、適于機(jī)械化生產(chǎn)等特點(diǎn)，是最理想的劑型。4、精液的分裝

（2）顆粒凍精將精液滴凍在經(jīng)液氮致冷的金屬網(wǎng)或塑料