醫(yī)學(xué)教研寄生蟲課件實驗課件1718免疫學(xué)實驗

實驗十七免疫學(xué)實驗

一、IHA（診斷弓形蟲）二、ELISA（診斷囊蟲?。?/p>

IHA

原理：可溶性抗原吸附于紅細胞表面，與相應(yīng)抗體結(jié)合發(fā)生凝集的現(xiàn)象。優(yōu)點：操作簡便，有較高敏感性和一定特異性。缺點：欠標準化和商品化，易發(fā)生非特異性凝集。已用于多種寄生蟲病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查。（購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所）

4℃保存期18個月2009.01材料：1凝集板2加樣器3陰性血清4陽性血清5PBS緩沖稀釋液操作步驟：1）選定3行，每行選4孔，每孔加75μm稀釋液；2）

第1行第1孔加25μm陰性血清；3）

第2行第1孔加25μm

陽性血清；4）

第3行第1孔加25μmPBS；5）混勻稀釋：從第1孔取25μm

加到第2孔，依次進行，最后25μm仍掉。6）

每孔加25μm

診斷液（吸附抗原的RBC），7）震蕩1~2min，22~37℃2~3h觀察結(jié)果。結(jié)果判定：陰性對照孔為（-）陽性對照血清效價不低于1：1024++++紅細胞形成明顯凝集塊，布滿全孔底

+++紅細胞出現(xiàn)薄層凝塊，面積較上者小

++紅細胞部分沉積孔底，邊緣松散，面積較小

+紅細胞沉于孔底，周圍有輕微凝集小點

—

紅細胞沉于孔底，呈圓扣狀，周邊光滑整齊IHA結(jié)果判定：原理：是一種固相酶免疫測定技術(shù)。將抗原或抗體結(jié)合到固相載體（聚苯乙烯板或PVC薄膜）表面，再將樣品和酶標記物與固相載體上的抗原或抗體形成免疫復(fù)合物，待反應(yīng)平衡后，洗去液相中未結(jié)合部分，加入底物顯色。酶：辣根過氧化物酶HRP)、堿性磷酸酶。底物：四甲基聯(lián)苯胺(TBM)常用方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法等。靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，操作方便快速。二、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）ELISA基本原理材料：1、預(yù)包被板（含抗原）2、酶結(jié)合物（1號液）3、洗滌液（2號液）4、底物（3號液）5、顯色劑（4號液）6、待測血清稀釋液（5號液）7、終止液（6號液）8、陽性、陰性對照液、空白對照液9、濕盒

空白、陰性、陽性對照孔各1，分別加PBS、陰性液和陽性液各100μm1。1、待測樣品2孔，加待測血清稀釋液（5號液）各100μm，置濕盒中，37℃避光反應(yīng)20min；2、洗滌：甩去孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液洗(2號液)3次，每次需停1分鐘后再甩干。3、酶反應(yīng)：除空白對照孔外，每孔加酶標抗體(1號液)100μm

。置濕盒中，37℃避光反應(yīng)20min，洗滌，甩干。4、顯色反應(yīng)：加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各100μm

，混勻，置濕盒中，37℃避光顯色7min。加終止液(6號液)1滴，終止反應(yīng)（藍色變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

以空白對照調(diào)零，用酶標儀于450nm（63讀取吸光度（A值）。當待