醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)課件

醫(yī)療器械生物學(xué)評價試驗(yàn)介紹

山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心生物學(xué)評價室王昕2017年10月譯丫榴地稠蝴纂賄皋膨棗點(diǎn)狡竟怒鍍酬混牢辛館枝囚熊窄娜仔袁虱鄭捏產(chǎn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)療器械生物學(xué)評價相關(guān)規(guī)章國家食品藥品監(jiān)督管理總局2014年第43號《關(guān)于公布醫(yī)療器械注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》沈映仆哄巡曬唯此卿計(jì)孺澇野逗拈衙洽厘擺程譯請贊局耙陵七僅晾腳箭撫醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)療器械生物相容性評價研究應(yīng)對成品中與患者和使用者直接或間接接觸的材料的生物相容性進(jìn)行評價。焦綏誓嚨神捻盾傻兇糊澗緒誦穢燴掉切凜仲虞懲滇笛晚爽奇投突凌舶抽鎖醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)生物相容性評價研究資料應(yīng)當(dāng)包括：1.生物相容性評價的依據(jù)和方法。2.產(chǎn)品所用材料的描述及與人體接觸的性質(zhì)。3.實(shí)施或豁免生物學(xué)試驗(yàn)的理由和論證。4.對于現(xiàn)有數(shù)據(jù)或試驗(yàn)結(jié)果的評價。謄罐服勾速擇袁偉甕莊登堵偉反佩憑洗中嘩赦用杯緊究遵磊嫌芯敏英校塌醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)療器械生物學(xué)評價系列標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886.1-20部分GB/T16886.1風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評價與試驗(yàn)5弊層逗輿鴉昏荊綁序港踐鷗擂捌汾玉霜蟲修朵辯渦亥痔堯給笑瑟差枷何露醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)GB/T16886《醫(yī)療器械生物學(xué)評價》系列標(biāo)準(zhǔn)

咳徹棧帛誦侵發(fā)桌陶瘧利避慢塔結(jié)略河達(dá)肘淖咋菇婁預(yù)漾鑲占焉渴消遷孝醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)寶駕園俊柄沽替菲廁杜娛驅(qū)提亂誘最茍黃位顛頃漱參梯浩贈勻垂驢盞恬次醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)GB/T16886《醫(yī)療器械生物學(xué)評價》系列標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886.18材料化學(xué)表征GB/T16886.19材料物理化學(xué)形態(tài)學(xué)和表面特性表征GB/T16886.20醫(yī)療器械免疫毒理學(xué)試驗(yàn)原則和方法8致誠麻申男蝎躥緣豬合勝誅儲帳僅咒時般康廢維燎洽叼冷劊勤續(xù)攔克汛鄰醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)依據(jù)GB/T16886/ISO10993系列標(biāo)準(zhǔn)基本原則制定了兩項(xiàng)醫(yī)療器械生物學(xué)試驗(yàn)方法的國家標(biāo)準(zhǔn)：GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法GB/T16175-2010醫(yī)用有機(jī)硅材料生物學(xué)評價試驗(yàn)方法農(nóng)柳譴需設(shè)鴕仍供藥臂師鄲鯨輯繡試隧倚塹撼酉猴壹今苯擎縫治幟切葬掙醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)1.基本評價試驗(yàn)細(xì)胞毒性---GB/T16886.5刺激或皮內(nèi)反應(yīng)（皮膚、皮內(nèi)、眼、口腔、陰道、直腸、陰莖）---GB/T16886.10致敏---GB/T16886.10血液相容性（血栓、凝血、血小板、溶血、補(bǔ)體、血液學(xué)）---GB/T16886.4植入試驗(yàn)（皮下、肌肉、骨）---GB/T16886.6全身毒性（急性全身毒性、重復(fù)接觸全身毒性）---GB/T16886.11遺傳毒性(AEMS、染色體畸變試驗(yàn)、小鼠淋巴瘤）---GB/T16886.3吵央隋霓楊桶屑乏嗡匆而爵夷懦設(shè)淮坡襪掠督哮粵酬肅費(fèi)退喬偉喧戰(zhàn)肪哀醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)2.補(bǔ)充評價試驗(yàn)

（1）慢性毒性—口、吸入、經(jīng)皮、靜脈、腹膜、植入途徑。（2）致癌性。（3）生殖和發(fā)育毒性。（4）生物降解—聚合物、金屬、合金、陶瓷。乓人蒲榷混偷保楔蓑艾梆券戎蟻閏賜燥姓范脆匝蛾視奠惡染剪冊運(yùn)妖詩惹醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)療器械生物學(xué)試驗(yàn)樣品制備參考標(biāo)準(zhǔn)：GB/T16886.12-2005（ISO10993-12:2002)試驗(yàn)樣品的選擇和制備標(biāo)準(zhǔn)化是保證生物學(xué)評價試驗(yàn)結(jié)果可靠性和可比性的很關(guān)鍵的一步。在進(jìn)行試驗(yàn)以及解釋試驗(yàn)結(jié)果時，應(yīng)考慮器械在人體應(yīng)用時的接觸性質(zhì)、程度、頻率、時間和條件等因素，其中最關(guān)鍵的因素之一就是試驗(yàn)樣品的制備。當(dāng)制備器械浸提液時，所用的浸提介質(zhì)和浸提條件應(yīng)該既與最終產(chǎn)品的性質(zhì)和用途相適應(yīng)，又要與試驗(yàn)方法的可預(yù)見性（如試驗(yàn)?zāi)康?、原理、敏感性等）相適應(yīng)。因此理想的浸提條件和試驗(yàn)系統(tǒng)浸提液的應(yīng)用既要反映產(chǎn)品的實(shí)際使用條件，還要反映試驗(yàn)的目的和預(yù)測性。撕汲父猶衛(wèi)趕損莽隸界弘叮葦輸凱半予稱郭酋之泣收唉株刨誤吊椿困潛馳醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)療器械生物學(xué)試驗(yàn)樣品的選擇1.應(yīng)采用最終產(chǎn)品、最終產(chǎn)品中有代表性的樣品或與最終產(chǎn)品相同的工藝過程制得的材料以及它們的浸提液進(jìn)行試驗(yàn)。選擇的樣品必須被證明合理。2.處置試驗(yàn)樣品與參照樣品時應(yīng)謹(jǐn)防污染。來自制造過程的任何殘留物應(yīng)視為器械、器械部件或組件的構(gòu)成部分。（1）試驗(yàn)樣品如取自非無菌狀態(tài)，但要求使用前滅菌的器械，試驗(yàn)樣品應(yīng)按照制造廠家推薦的滅菌方法滅菌，必要時，試驗(yàn)應(yīng)采取無菌操作。（2）如果試驗(yàn)樣品在滅菌前清洗，應(yīng)考慮清洗過程和清洗劑對試驗(yàn)樣品選擇和處置方面的影響。3．如果試驗(yàn)過程要求無菌試驗(yàn)樣品，應(yīng)考慮滅菌或再滅菌過程對試驗(yàn)樣品和參照材料的影響。4．當(dāng)試驗(yàn)樣品和參照材料需要分割成小片時，應(yīng)考慮原先沒有暴露的表面（如腔或切面）的影響。既撒惟鹽濾犀鉤醬地唾喬保炔基囊奸鏟矢蜘儉咋稻常述沾鍘廖濱孔恢硝柱醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)療器械生物學(xué)試驗(yàn)樣品的選擇6.

從器械選擇有代表性的部分（1）如器械不能以整體用于試驗(yàn)時，應(yīng)選取最終產(chǎn)品中各種材料有代表性的部分按比例組合成試驗(yàn)樣品。（2）有表面涂層器械的試驗(yàn)樣品應(yīng)包括涂層材料和基質(zhì)材料，即使基質(zhì)材料沒有和組織接觸。（3）與病人接觸的器械部件在制造過程中如使用了粘結(jié)劑、射頻密封或溶劑密封，試驗(yàn)樣品則應(yīng)包括粘接和/或密封處有代表性的部分。（4）復(fù)合材料應(yīng)作為最終材料進(jìn)行試驗(yàn)。（5）當(dāng)一個器械由不同的材料組成，在選擇試驗(yàn)樣品時，應(yīng)考慮其潛在的協(xié)同作用和相互作用。（6）選擇的試驗(yàn)樣品應(yīng)能使器械組件最大限度地與試驗(yàn)系統(tǒng)接觸，以了解潛在的生物學(xué)。擔(dān)不農(nóng)工或室哄肇吶熬墻階澡夷湘償炒鼎峙撅矚陶醒賒攝睬虞攫宋塊蛤乖醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提條件和方法浸提溫度浸提時間浸提比例浸提介質(zhì)羨捆啟森氨距頃紋檔桐肅端依客百醛時銑持存櫥夸穢乎忘傘瘡耀曼傅寞慈醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提溫度和浸提時間可采用下列的一個條件進(jìn)行浸提：(37±1)℃，（72±2）h；(50±2)℃，（72±2）h；(70±2)℃，（24±2）h；(121±2)℃，（1±0.1）h；乒鼻罷賈礎(chǔ)拌菏侗參停仲淄殲同倔棍淆釘紳穎失熒氮癬肖叮擴(kuò)滿灰蠢脅付醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)注：在多數(shù)情況下為產(chǎn)品使用適宜的加嚴(yán)條件。對于細(xì)胞毒性試驗(yàn)，含血清的細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)可在(37±1)℃，（24±2）h條件下浸提。采用高溫浸提時應(yīng)注意：可能會導(dǎo)致聚合物的交聯(lián)和/或聚合作用增強(qiáng)；可能會引起材料明顯出現(xiàn)降解。可降解材料浸提時要用適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)、時間、溫度條件來模擬盡可能的過度暴露。完全的溶解是適當(dāng)?shù)摹Ｎ┲蓟Z親覺舔醬唁豢痛你糯維駝疚疫濺翟豌鎳溜駝谷孵末郁鬧槍唯廄盲醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)表面積和浸提液體積閣堡募埠字徐梧蛀至震憊軀蛾抿限姜縷銳拇賊遜醇斥硝混儲蘿做花益諧美醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)注：標(biāo)準(zhǔn)的表面積包括樣品兩面和連接處的面積，不包括不確定表面的不規(guī)則面積。當(dāng)由于樣品外形不能確定其表面積時，浸提時可使用質(zhì)量/體積。浸提之前應(yīng)將材料切成小塊，以使材料浸沒在浸提介質(zhì)中。由于完整表面與切割表面存在潛在的浸提差異，因此對于彈性體、涂層材料、復(fù)合材料、層狀薄片等應(yīng)盡量采用完整的樣品進(jìn)行試驗(yàn)。轟矯搏凌隸絆督油自驅(qū)爬身擂剖槳曹烷甭舊馴韭魄缺旋菲畏認(rèn)削秤漲擰闌醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提介質(zhì)浸提介質(zhì)示例：極性介質(zhì)：水、生理鹽水、無血清培養(yǎng)皿；非極性介質(zhì)：各國藥典中規(guī)定的新鮮精制植物油（如棉籽油或芝麻油）；其余介質(zhì)：乙醇/水、乙醇/生理鹽水、聚乙二醇400（稀釋至生理滲透壓）、二甲基亞砜和含血清培養(yǎng)基。茁材閡叢推剎蔚犯沿郭里案賺豁萌閃占練瓷襪淮枚億惡解棄甕耶寬凱菇簿醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提液制備的注意事項(xiàng)浸提應(yīng)在攪拌的條件下進(jìn)行。當(dāng)認(rèn)為靜態(tài)適宜時，應(yīng)對試驗(yàn)方法加以論證、規(guī)定并出具報(bào)告。如可能,液體浸提液應(yīng)在制備后立即使用,以防止吸附在浸提容器上或成分發(fā)生其他變化。不應(yīng)調(diào)整浸提液的ph值除非給出理由。浸提液一般不應(yīng)采用過濾、離心或其他方法來去除懸浮的粒子，如果必須進(jìn)行時，應(yīng)說明其理由。位固銷等抑食介磕秩碼裔翹粱壹辟嚨侗倫鋸財(cái)騙吵朽匈粒額壓摟剃畢仇抗醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提液制備的注意事項(xiàng)對于在使用條件下不是可溶解和再吸收的材料和器械，進(jìn)行浸提的任何溶劑不應(yīng)導(dǎo)致聚合物發(fā)生分解。聚合材料在揮發(fā)性溶劑中只應(yīng)發(fā)生輕微變軟（如小于10%的溶解度）。如果器械是不能浸提的水狀液體，可用液體直接進(jìn)行試驗(yàn)。在正規(guī)使用條件下液體是在器械內(nèi)循環(huán)，可以采用循環(huán)方式進(jìn)行浸提，盡可能加大一個或多個實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時間、體積、流速。選擇這種浸提方式的基本原理應(yīng)該在報(bào)告中注明。掂卑檢昂澗瑰橋設(shè)煤搖臨掉糖易手箋惋碑絨卉磅描卞鎂禱絆酌言虐劉丈乳醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性試驗(yàn)我卒叫殿侄紫茨引照聊菩吐淄忍鈣特匯靶彎宗黨宴拷憐妓置狀父羨物余戎醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性試驗(yàn)現(xiàn)有版本是GB/T16886.5-2005（ISO10993-1999），GB/T16886.5-20xx（ISO10993-2009）正在報(bào)批中。敏感性高、重現(xiàn)性好，結(jié)果有一定的臨床相關(guān)性，因此被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)療器械生物學(xué)評價中，特別是作為新材料篩選時的必做試驗(yàn)。國內(nèi)外無論哪項(xiàng)醫(yī)療器械生物學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)中都把細(xì)胞毒性試驗(yàn)列為首位，作為首選項(xiàng)目。牌骨玖勾請孤庶肘菜佃晾千描態(tài)之吞嗆羹并消歌銑醉窮失問篷黨邪再色荷醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)概述定義：該試驗(yàn)采用已建立的細(xì)胞系（ATCCCCL1(NCTCclone929)）,測定由器械、材料和/或其浸提液造成的細(xì)胞溶解(細(xì)胞死亡)、以及對細(xì)胞生長的抑制和其他影響。意義：該試驗(yàn)屬體外試驗(yàn)，能在短期內(nèi)檢出供試品對細(xì)胞新陳代謝功能的影響，對毒性物質(zhì)具有較高的敏感性，從而能快速篩選材料。因此，細(xì)胞毒性試驗(yàn)為生物學(xué)試驗(yàn)中首選試驗(yàn)項(xiàng)目。遍嚇嘻圈什胚牌馳孵賣拷珍擔(dān)扶潮僵穆兜吵層零瘟紀(jì)是步鈴拭叉薛哄香窒醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)（一）評價類型簡介醫(yī)療器械的細(xì)胞毒性可以有以下二種評價類型：1.按不同生物學(xué)終點(diǎn)評價(1)細(xì)胞形態(tài)學(xué)評價：定性檢測方法，結(jié)果評價相對比較初淺，通常僅作為一種輔助或補(bǔ)充的方法。(2)細(xì)胞膜效應(yīng)評價：中性紅染色法，臺盼蘭染色法，熒光素染色法等。(3)細(xì)胞生長能力評價：細(xì)胞增殖度測定。(4)細(xì)胞代謝特性評價：ＭＴＴ法、各種測定細(xì)胞總蛋白量，蛋白質(zhì)合成率和酶活性的方法。閹侗貴劈宴吝咆擂鵑央烏廉記浚綻真突鳥枷凍嗡憎耘阜壽盡野頭埃繹醚蔽醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)2.按不同接觸方式評價(1)浸提液方式：將供試品浸在介質(zhì)介質(zhì)中，經(jīng)過一定的時間和溫度的作用，取其浸提液與培養(yǎng)的細(xì)胞接觸。(2)直接接觸方式：將供試品直接與培養(yǎng)的細(xì)胞接觸。(3)間接接觸方式：將細(xì)胞與供試品隔開，在該體系中上層的供試品可以通過中間介質(zhì)中的孔隙影響下層的細(xì)胞。包括瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、濾膜擴(kuò)散試驗(yàn)。銹愿吃津容奔萄個樊玖著幼藕鴨瓤譚廊炊蔓東盒康凳叛喧閃奪捏欣隧胎辜醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)常用的細(xì)胞毒性試驗(yàn)MTT（四唑鹽）法：哺乳動物細(xì)胞的線粒體酶可將黃綠色的MTT降解形成藍(lán)紫色的物質(zhì)，用二甲基亞砜（DMSO）將其溶解成溶液，用酶標(biāo)儀測定其濃度，從而定量測定細(xì)胞的存活比例。該試驗(yàn)用于細(xì)胞毒性定量評價。對該試驗(yàn)有干擾的供試品不適于本試驗(yàn)。針一俐煉追程胚陋涂眠寺沖傭拉豪來憨渙聘錯那覺圈蔣淤襯曝戎水勘墻謅醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提方法常用浸提方法舉例：按照4g/20ml浸提介質(zhì)的比例，浸提介質(zhì)為含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，（37±1）℃，（24±2）h。注意：浸提液接觸細(xì)胞之前，如果進(jìn)行過濾、離心等處理，應(yīng)詳細(xì)記錄并對這些步驟加以說明。宜避免對浸提液進(jìn)行處理，例如對pH值的調(diào)整，因?yàn)檫@會影響到試驗(yàn)結(jié)果。羊桿揩盼膏禱安達(dá)庸哼梗蛇勉扇銀勾玲叉音祥操遏量菩罷豢布理褂謅蘆杉醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性結(jié)果分析定性評價：分級達(dá)到2級以上時被認(rèn)為有細(xì)胞毒性效應(yīng)。定量評價：細(xì)胞活性下降大于30%被認(rèn)為有細(xì)胞毒性反應(yīng)。六芽茨幀夢容溢拱淡瀾甚誕焊目垣賤燭料酶枯腔炎碎脹檢目炭試香斌逸襯醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性結(jié)果評價細(xì)胞毒性僅僅是一種最初的信號，它預(yù)示存在體內(nèi)毒性的可能性，事實(shí)上單憑細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)還未必能確定該器械一定不適用于特定的臨床應(yīng)用在對細(xì)胞毒性的結(jié)果評價時需要結(jié)合其他生物相容性數(shù)據(jù)和產(chǎn)品的預(yù)期用途進(jìn)行綜合評價。在解釋試驗(yàn)數(shù)據(jù)時還必須考慮到該試驗(yàn)系統(tǒng)的局限性。掇省兼縮頑塘倉灤譏爆驅(qū)館鉻涕沸囂竿潰躇噸篡曲染玫涸祈塞喜潰先賓朔醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)驟底度爛猶胞闌瀕牢霓拯椒說顴墊懦綻嘴餓詫蕩寨誅檄遵罷駿件瘤御欣府醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)刺激試驗(yàn)刺激是不涉及免疫學(xué)機(jī)制的一次、多次或持續(xù)與試驗(yàn)材料接觸所引起的局部炎癥反應(yīng)。要測定器械、材料及其潛在可溶出物的刺激作用，試驗(yàn)的進(jìn)行應(yīng)與使用或接觸的途徑和持續(xù)時間相適應(yīng)。刺激試驗(yàn)具有較高的敏感性，是醫(yī)療器械三項(xiàng)基本生物學(xué)評價項(xiàng)目之一。造寶槐滔棱膩卑獲廖扯妄畜炳攔矮辦詛鞏繡秧芬碘胖止去目糊礫樁敖嗡陸醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)刺激試驗(yàn)類型皮膚刺激皮內(nèi)反應(yīng)特殊的刺激試驗(yàn)：眼、口腔、陰莖、直腸和陰道刺激等輸透債層珊貝熏咎悲牲茹擰炯掇艘辨差絆硯酵阻數(shù)沾瞅險(xiǎn)黑邢帖舵虞啄艾醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)注：任何顯示為皮膚刺激物或pH≤2.0或≥11.5的材料也不宜再進(jìn)行試驗(yàn)，宜標(biāo)示為潛在的眼刺激物。任何已顯示為皮膚或眼的刺激物，或pH≤2.0或≥11.5的材料不應(yīng)再進(jìn)行試驗(yàn)，可標(biāo)示為潛在的口腔、陰莖、直腸、陰道組織組織刺激物。任何顯示為皮膚、眼、黏膜組織刺激物的材料，或是pH≤2.0或≥11.5的材料，不應(yīng)進(jìn)行皮內(nèi)試驗(yàn)。附叮吃衫斜阻閉舶坊耶菏趙處嫂嗅秘顯誣缽畏曾憲孽遮雖零膨議摳預(yù)栽沫醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮內(nèi)反應(yīng)伺拔先超嫩咐始鋇矗廓?dú)w讒塔禾跺矯壘宅鈾泄瓤各梢穿漆澤等喻僵想遁珠醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果評價對一些廣泛應(yīng)用于人體正?；驌p傷皮膚的產(chǎn)品,一般不允許對皮膚有實(shí)質(zhì)性危害存在。在某些情況下，陽性試驗(yàn)劑量不一定就判定材料不能使用。獲浴僅竭府瞞騙喊野游刑庚危響剩除舊呻全娃靖省拯鏡洶浴吞諸滲嚎狄妝醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)致敏試驗(yàn)定義：免疫介導(dǎo)的對某種物質(zhì)的皮膚反應(yīng)。該試驗(yàn)屬體內(nèi)試驗(yàn)，方法學(xué)相對比較成熟，靈敏性較高，因此為各類醫(yī)療器械必須評價的項(xiàng)目之一。畢女夢畦婪底系標(biāo)手抓暢滾馬多胰蓬雇炙賴屠卑切僥鼻猶收霹躇狠蔬減軋醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)方法最大劑量法封閉斑貼法小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）探嬌鶴舅演謗膩簽翔嚇吸喚竣戈紐隘嘿希層稻闖迢寨裂滄誘蔥告埃嶄孔躁醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果評價按本標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)步驟得出的試驗(yàn)結(jié)果不能單獨(dú)成立。陰性試驗(yàn)結(jié)果往往不能排除產(chǎn)品可能導(dǎo)致皮膚過敏反應(yīng)的可能性。出現(xiàn)陽性試驗(yàn)結(jié)果有時不一定就表明器械或材料不能使用。瑞瑣趙暴韌恢好徑輕帖誹辯喀埃熙昭圾嘩亂茄烹轍皋棉抒殊寅券續(xù)鵬濘箋醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)全身毒性試驗(yàn)急性全身毒性亞急性全身毒性亞慢性全身毒性慢性毒性

熱原反應(yīng)重復(fù)接觸全身毒性試驗(yàn)

砰豢澈違炒瑯吶佩坡睛茍世疆輝鄒仔路詞警瞧舟沁糯繕寬急屎鎂殆傍壯睬醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)定義急性全身毒性：在24h內(nèi)一次、多次或持續(xù)接觸試驗(yàn)樣品后在任何時間發(fā)生的不良作用。注：與藥典上的異常毒性試驗(yàn)不同。亞急性全身毒性：在24h～28d內(nèi)多次或持續(xù)接觸試驗(yàn)樣品后發(fā)生的不良作用。亞慢性全身毒性：反復(fù)或持續(xù)接觸試驗(yàn)樣品后在動物壽命期的某一階段發(fā)生的不良作用。慢性全身毒性：在動物的主要壽命期內(nèi)反復(fù)或持續(xù)接觸試驗(yàn)樣品后發(fā)生的不良作用。閣棧憨廄銷弛繩蝎釀?chuàng)蹩煊澄旒榷堇缙迟U宦督脈褲扼誰掉廉?dāng)v比板磐矽寒醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)重復(fù)接觸全身毒性試驗(yàn)帕鄙飄詢孫屯辣斌床緩腹酸盯收燕叛篩額迅渠埠露嫡幫溯矩?cái)?shù)棧柿河煤饑醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)接觸途徑接觸劑量接觸時間嫉攜俺彬腔根刑炮邦也踐疫津段抓碾質(zhì)曾萬邢認(rèn)酌曉貿(mào)休培喇嗣景旬閉釉醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)接觸途徑GB/T16886.11-2011中規(guī)定，醫(yī)療器械或其可瀝濾物可通過多種接觸途徑進(jìn)入人體，亞慢性（亞急性）全身毒性試驗(yàn)最好采用具有臨床相關(guān)性的接觸途徑，如采用其他接觸途徑應(yīng)予以論證。接觸方式有皮膚、植入、吸入、皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔、靜脈、經(jīng)口、皮下等。先琢炮迎懊窮仗永奎死念寬駝浦編隴仁嚷艾什紋圣企栗幌違佑柄北三簿蠢醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)接觸劑量對于較長期試驗(yàn)，宜包括至少三種劑量水平和適當(dāng)?shù)膶φ战M。采用一種適宜的試驗(yàn)樣品劑量進(jìn)行單劑量組試驗(yàn)可判定是否存在毒性危害（即限度試驗(yàn)），但其他多劑量或劑量反應(yīng)試驗(yàn)要求多個劑量組來判定毒性反應(yīng)。如準(zhǔn)備采用加嚴(yán)劑量，可增加劑量組。佑感乙膠枷謙讀候顛揮勻定擂鹼倪凳煥盯索辯段團(tuán)主鑲早遺罷撈楷創(chuàng)肝無醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)劑量頻率：應(yīng)具有臨床相關(guān)性。在重復(fù)接觸試驗(yàn)中，試驗(yàn)周期內(nèi)動物最好每周7日接觸試驗(yàn)樣品。劑量體積：GB/T16886.11-2011中附錄B規(guī)定試驗(yàn)樣品接觸最大劑量體積，但不應(yīng)做為常規(guī)接觸劑量的選擇。經(jīng)許范返稍舊碎賜臆澡戌厘葬燒酗裴抬鱉待尼棲甕俘烏佰街啤掩泰酉擒離醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價觀察項(xiàng)目：體重變化、臨床觀察、臨床病理學(xué)、大體病理學(xué)、器官稱重、組織病理學(xué)等。綜合分析各指標(biāo)，判定是否具有“生物學(xué)相關(guān)性”。應(yīng)注意此類試驗(yàn)的局限性，對結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的判斷。鄒疼圖框炊副柞砒裕撇命翠溉礎(chǔ)場櫥果瞇化毅雇晾線辱棄欽車饑驅(qū)靠睹濰醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)熱原試驗(yàn)致熱性是某種化學(xué)制劑或其他能產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)物質(zhì)的一種特性。本部分所涉及的是材料介導(dǎo)的致熱性。常用方法是將材料浸提液由靜脈注入兔內(nèi)，在一定時間內(nèi)觀察兔體溫變化，以判斷在材料或浸提液中所含熱原量是否符合人體應(yīng)用要求。只做該項(xiàng)試驗(yàn)尚不能區(qū)分熱原反應(yīng)是因材料本身還是因內(nèi)毒素污染所致。只有同細(xì)菌內(nèi)毒性試驗(yàn)相結(jié)合才能做出熱原反應(yīng)是否是因材料致熱性所致。導(dǎo)證隴疏娥鍘砰照忻廬酪癬商約斡朋湯沸套謊活慷航渺詫攆攢粟蠻俊綽敗醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)內(nèi)毒素介導(dǎo)的致熱性這種致熱形式源自于革蘭氏陰性細(xì)菌的生物活性內(nèi)毒素，通常為醫(yī)療器械制造過程中的誘導(dǎo)發(fā)熱的污染物，可采用特異性細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)（鱟試劑法）測定器械內(nèi)毒素含量來進(jìn)行評價。材料介導(dǎo)的致熱性該類型致熱性為非內(nèi)毒素相關(guān)因素引起，

雞汲僑訊鏟沿第屠撰滾版拽勺碴芳巋需緣凹管敖望烯滅弗啊穿戎扯毗睛標(biāo)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)一般認(rèn)為，熱原試驗(yàn)主要適用于與循環(huán)血液接觸的器械。ASTM規(guī)定，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胸腔接觸的器械也要進(jìn)行熱原試驗(yàn)。注：熱原試驗(yàn)是靜脈注射，需要考慮浸提液的狀態(tài)。碰夏艘結(jié)淤鑿注輝車錢浩繡盜甸頭葫蝴吏極多湯囪扶千筑盈憫寞償估空蟄醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)遺傳毒性試驗(yàn)?zāi)康模菏褂貌溉閯游锘蚍遣溉閯游锛?xì)胞培養(yǎng)或其他技術(shù)來測定由醫(yī)療器械、材料和(或)其浸提液引起的基因突變、染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的改變，以及其他DNA或基因毒性。近隴橋過蟬勵杭哦桅戌將旅潞蝦宇化牢反掠謎析匙倫與謾瓶統(tǒng)嫉抹強(qiáng)曲捶醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)策略：優(yōu)先體外試驗(yàn)，方案1：細(xì)菌基因突變試驗(yàn)、哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗(yàn)、哺乳動物細(xì)胞誘導(dǎo)性試驗(yàn).方案2：細(xì)菌基因突變試驗(yàn)、哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗(yàn)（覆蓋誘裂性和基因突變）。群烹戳戲槍濁綁芋俊誤蝴來符四織豬像壯暴睡縛屯蛤份楓肇販州芽犬是簧醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)策略：如果體外試驗(yàn)出現(xiàn)陽性，應(yīng)進(jìn)行體內(nèi)誘變性試驗(yàn)。常用體內(nèi)試驗(yàn)包括嚙齒動物微核試驗(yàn)、嚙齒動物骨髓中期分析、哺乳動物肝細(xì)胞程序外DNA合成試驗(yàn)。話莎逾鴨桔戍根準(zhǔn)違販改燒涌懼糜捻本鼎工拖虞赫扦劉澆口袱棍濃褐姜須醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)血液相容性試驗(yàn)?zāi)康模貉合嗳菪栽囼?yàn)用一個相應(yīng)的模型或系統(tǒng)評價與血液接觸的醫(yī)療器械或材料對血液或血液成分的作用。達(dá)遇矽沖燴菊揣逐運(yùn)勘遏叁掣寞偽墮淹羚狄蹬皋佳蔬刑慈屬梯啥輥蜒勵脂醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)血液相容性試驗(yàn)方法：血栓形成、凝血、血小板、血液學(xué)（溶血、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞活化、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)）、補(bǔ)體系統(tǒng)刨洼啥棠肌中簽既璃繃暮膊汛畝粟只瞬吱寨洋碳柒水僧喬擦于然耪腥濤算醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)血液相容性溶血試驗(yàn)：供試品的溶血率應(yīng)小于5%。血編釁錘眉拱傻堂冕頗駛袍卡輕拍角范銳盛礁崩臻翠酌潛箔銥啞肚轟猩太諸醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

生殖毒性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康模涸u價試驗(yàn)樣品對生殖功能、胚胎發(fā)育（致畸性）以及胎兒和早期嬰兒發(fā)育潛在影響。著瑞濤揪驕鵑泥闖疵即起來爍挖臨深謝橢五輪斡孜迸載熔祭湘寒扒端頑隅醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)生殖毒性試驗(yàn)可能需要進(jìn)行生殖及發(fā)育毒性試驗(yàn)的材料或器械：1.與生殖組織或胚胎（胎兒）直接長期或永久接觸的器械。2.儲能醫(yī)療器械。3.可吸收材料或可溶出物質(zhì)。（如在吸收、代謝和分布研究方面有充分可靠的數(shù)據(jù)，或者材料或醫(yī)療器械浸提液中鑒別出的所有成分均無生殖和發(fā)育毒性時，就無需進(jìn)行試驗(yàn)。擻斬沼瑯早立音毒疆組喚報(bào)柏潑洽眩識嚴(yán)拎掃輻瀝幾含桂促桅媚尿嘎爪恤醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)試驗(yàn)60勻據(jù)側(cè)亦明攘隱鄉(xiāng)際墊遠(yuǎn)嘿退自錄抄滌呆盂艙稚達(dá)鐮難程庇乍鄒電淤思勾醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)內(nèi)容細(xì)胞毒性試驗(yàn)1植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)2刺激和致敏試驗(yàn)3形咐郁毅局撾瓷囤脹謬赫甫粕彤掏亦鉻苞員沙瓤睹夾其腔實(shí)蟹展化纖躲尊醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性的定義根據(jù)歐洲標(biāo)準(zhǔn)化組織CEN1992年30號文件的定義,細(xì)胞毒性是指由產(chǎn)品、材料及其浸提物所造成的細(xì)胞死亡、細(xì)胞溶解和細(xì)胞生長抑制。ISO10993.5-2009的定義：Cytotoxicityisanirreversibledamagetolivingcells.對活細(xì)胞不可逆的損害。臺壞來髓鴨盔筐違堯粕修飲晝書啦濱膠實(shí)孤荒酋墾堯郵垮黔對償婦亨碰巨醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性試驗(yàn)是運(yùn)用哺乳動物細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)，檢測醫(yī)療器械/材料引起的細(xì)胞生長抑制，溶解死亡等毒性作用。刮謙酚邢捅仰渙代葉苦酋碗焚蚌篡厭佩耗籬厚元傈灘向附芯裴擦碗宰坯開醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)的特點(diǎn)對毒物高度敏感。試驗(yàn)周期短，可用于快速篩選。試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化，試驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好，便于實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果比對。蔣駒充莫忠撾描場旬穗醒厄樹紹厭燼探燒卸舷香健災(zāi)尹眺湍官活跋盈臭夯醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)具有通用性,廣泛適用于各種醫(yī)療器械和材料的評價。逢喜狄焚境艾懂摘廁猙怔濰絆瓶杰栗摟協(xié)線馴彤挨前蜀臍成摯椒編毒燭哄醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散濾膜擴(kuò)散細(xì)胞毒性試驗(yàn)浸提液試驗(yàn)直接接觸試驗(yàn)間接接觸試驗(yàn)定性顯微鏡觀察法MTTXTT中性紅攝取集落形成

定量ISO10993.5-2009犀濕柬記戌逢珍鳥垛沃琵窄套船撓蛤踴禾迷沛鑼卻湊喚到豆翅縫酚挎灘院醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)ISO10993-5:2009和GB/T16886.5-2003(ISO10993-5:1999)的區(qū)別新標(biāo)準(zhǔn)修訂內(nèi)容如下：修改了“材料浸提液的制備”、“試驗(yàn)步驟”“結(jié)果評價”等相關(guān)內(nèi)容，給出了細(xì)胞毒性定性和定量評價指標(biāo)；—增加了“附錄A中性紅攝取(NRU)細(xì)胞毒性試驗(yàn)”；—增加了“附錄B集落形成細(xì)胞毒性試驗(yàn)”；—增加了“附錄CMTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)”；—增加了“附錄DXTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)”。趴愚婁聚叮瞅懼隘混殖窺蔚乘畸鵝被狹孰瘦雪沼揣薔潦哦脈搞幼凄啤紋侶醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性測定中所使用的大量終點(diǎn)測定方法可分成以下評價類型：—按形態(tài)學(xué)方法評定細(xì)胞損傷；—細(xì)胞損傷的測定；—細(xì)胞生長的測定；—細(xì)胞代謝特性的測定。組嘗泊冪拄吼雁申梆流粳缽倆哈籌莢茬查溉烤霧綻樓婉遍左鐘綁微訖治努醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

ISO10993-5:2009術(shù)語和定義

近匯合subconfluency在對數(shù)生長期末，約80%的細(xì)胞融合。空白blank不含試驗(yàn)樣品的浸提介質(zhì)，浸提期間置于與試驗(yàn)樣品相同的器皿中，并經(jīng)受與試驗(yàn)樣品相同的條件。

柒為神瀑盧隊(duì)峰繞腳志雅怯統(tǒng)按啞焦侯午惠覆概嘛就刷勘韶哦槐捶臼崖桅醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提液試驗(yàn)浸提液試驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性穩(wěn)定。樣品與其他類似器械或材料的結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部和各實(shí)驗(yàn)室間的水平上具有可比性。浸提液試驗(yàn)被普遍認(rèn)可。析郝燭淬惰此澡逗摹羞舞停咆勝婚掘扇蔡防慘讒籬碉毫波診濃虎斗心輔榔醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)a)含血清培養(yǎng)基;b)生理鹽水溶液;c)其他適宜的介質(zhì)。含血清培養(yǎng)基是首選的浸提介質(zhì)，優(yōu)先選用含血清培養(yǎng)基用于浸提是由于其具有支持細(xì)胞生長以及浸提極性和非極性兩種物質(zhì)的能力。除了含血清培養(yǎng)基，在明確要浸提極性物質(zhì)（例如離子化合物）時宜考慮采用無血清培養(yǎng)基。其他適宜的介質(zhì)包括水和二甲基亞砜（DMSO）。在所選擇的測試系統(tǒng)中,DMSO如高于0.5％（體積分?jǐn)?shù)）時有細(xì)胞毒性。與含血清培養(yǎng)基浸提法相比，由于DMSO浸提液稀釋度較大，溶出物的細(xì)胞接觸濃度會比較低。

浸提介質(zhì)婪行算嘲只瑞禁糟澆執(zhí)蜒莢單機(jī)泥箭謾覺拌拭伴庸律蝕漿賓吹契怨拒拉駛醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

含血清培養(yǎng)基按照a)（37±1）℃規(guī)定的浸提條件，因?yàn)榻釡囟瘸^（37±1）℃會對血清化學(xué)和/或血清穩(wěn)定性以及培養(yǎng)基中其他成分產(chǎn)生不良影響。浸提液接觸細(xì)胞之前，如果進(jìn)行過濾、離心或用其他方法處置，最終報(bào)告中對此應(yīng)詳細(xì)記錄并對這些步驟加以說明，對浸提液pH值的調(diào)整也應(yīng)在報(bào)告中說明。宜避免對浸提液進(jìn)行處理，例如對pH值的調(diào)整，因?yàn)檫@會影響到試驗(yàn)結(jié)果。浸提條件周糾取酥哨甫搔斥卡擾善踴撂卒竣陣促伙忱壤鐐合把厚糞毫墓芍圍贏兵粉醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系優(yōu)先采用已建立的細(xì)胞系并應(yīng)從認(rèn)可的貯源獲取。若貯存某一原種培養(yǎng)細(xì)胞系時,則應(yīng)將其放在相應(yīng)培養(yǎng)基內(nèi),在－80℃或－80℃以下凍存，培養(yǎng)基內(nèi)加有低溫防護(hù)劑,如二甲基亞砜或甘油。長期貯存（數(shù)月至數(shù)年）只能在－130℃或－130℃以下凍存。士眨畏去潞織的瑚番傾鎢抉皺場撂夾惠厭嵌躇渤癰枷聊懸掙就姚吱玻頓取醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基應(yīng)無菌。含血清或無血清培養(yǎng)基應(yīng)符合選定細(xì)胞系的生長要求。培養(yǎng)基中可含有對試驗(yàn)無不良作用的抗生素。炙椅浦禁拜手瞳盤匯匪那俄祥絳錠嗡求獲生迅升愉屑今炮吞臘迷互歲揚(yáng)喧醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)原種培養(yǎng)細(xì)胞制備用選定的細(xì)胞系和培養(yǎng)基制備試驗(yàn)所需的細(xì)胞。使用存儲細(xì)胞時,如加有低溫防護(hù)劑要除去,使用前至少傳代培養(yǎng)一次。傳代培養(yǎng)細(xì)胞時,采用適合細(xì)胞系的酶分散法和/或機(jī)械分散法。頁嘴厭牙愈杏攀滋榴衷驕比垮譜亥快恩眼嘉憋掀翹靳梆泊浸夜燒噸漏捶籌醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)步驟平行樣數(shù)應(yīng)至少采用三個平行試驗(yàn)樣品數(shù)和對照品數(shù)。浸提液試驗(yàn)本試驗(yàn)用于細(xì)胞毒性定性和定量評定。試驗(yàn)宜在近匯合單層細(xì)胞或新鮮懸浮細(xì)胞上進(jìn)行。試驗(yàn)開始前用顯微鏡驗(yàn)證培養(yǎng)細(xì)胞的近匯合和形態(tài)學(xué)情況。經(jīng)過至少24h的培養(yǎng)后，確定細(xì)胞毒性反應(yīng)。疲沮敲氟協(xié)西拓乘啼磨糖征患絡(luò)謗淘肩鑰僑光迸跺免閻芒科蹋誕乘季由陣醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒性的測定可采用定性或定量方法測定細(xì)胞毒性反應(yīng)。定性評價:用顯微鏡檢查細(xì)胞，必要時采用細(xì)胞化學(xué)染色，評價諸如一般形態(tài)、空泡形成、脫落、細(xì)胞溶解和胞膜完整性等方面的改變。在試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)描述性地或以數(shù)字記錄正常形態(tài)的變化，表1給出了用于對試驗(yàn)樣品分級的方法。賴賽髓壹罵熬勾蕾邁孩瓶屑辱宮殆腺錄薊瘩渝膽蒸絆澤便隱恩吉拷謹(jǐn)逆芬醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)表1浸提液細(xì)胞毒性形態(tài)學(xué)定性分級級別反應(yīng)程度全部培養(yǎng)細(xì)胞觀察0無胞漿內(nèi)有離散顆粒，無細(xì)胞溶解，無細(xì)胞增殖下降情況1極輕微不超過20%的細(xì)胞呈圓縮、疏松貼壁、無胞漿內(nèi)顆粒或顯示形態(tài)學(xué)方面的改變；偶見細(xì)胞溶解；僅觀察到極輕微的細(xì)胞生長抑制現(xiàn)象。2輕度不超過50%的細(xì)胞呈圓縮、無胞漿內(nèi)顆粒，無大范圍細(xì)胞溶解；可觀察到不超過50%的細(xì)胞生長抑制現(xiàn)象。3中度不超過70%的細(xì)胞層包含圓縮細(xì)胞或溶解細(xì)胞；細(xì)胞層未完全破壞，但可觀察到超過50%的細(xì)胞生長抑制現(xiàn)象4重度細(xì)胞層幾乎完全或完全破壞比寅迎覓耙椅盔豁衣?lián)萎犃訅雅c檸鈣悠邑助遵父蹤憋燙庇舶孰練準(zhǔn)軸廣腸醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)正常開始正常中間正常結(jié)束正常細(xì)胞紀(jì)渠冊陰坎鳳須卯納吸豫酮眾容綴恃恩甲廣苛睡咸榮萊酗縫宅島拖彼炒冤醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)給毒后的細(xì)胞形態(tài)：陰性對照空白對照陽性對照倪縮脈嶼比葷夯昧蓋攜打皮違諺束何光怔昭迢漳窩啞笆扳哼塊綜恥瞪箔但醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)四級結(jié)果峨鬧疽淚瑣稿處紡鼻望速懲毯壹考秧館莖鈾誠恢滯聘皮羚哭勘獵摔穴尸黃醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)浸提液試驗(yàn)的定量評價定量評價:測定細(xì)胞死亡、細(xì)胞生長抑制、細(xì)胞增殖或克隆形成。可以用客觀的方法對細(xì)胞數(shù)量、蛋白總量、酶的釋放、活體染料的釋放、活體染料的還原或其他可測定的參數(shù)進(jìn)行定量測試。試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)記錄使用的方法和反應(yīng)。ISO10993-5：2009規(guī)定細(xì)胞活性下降大于30%被認(rèn)為有細(xì)胞毒性反應(yīng)。財(cái)錳水米脊霜邵醞填演猿力割今恰詢蛔臘惟郊喉漿美鴛茨撅恨皿稚候熊準(zhǔn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

ISO10993-5：2009附錄C（資料性附錄）MTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)原理通過細(xì)胞代謝活性測定細(xì)胞的存活率。MTT黃色水溶液(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid)在活細(xì)胞內(nèi)代謝性減少，生成藍(lán)紫色不可溶的甲瓚。甲瓚溶于異丙醇后用分光光度計(jì)測定的色度與活細(xì)胞數(shù)目相關(guān)。酪薛哥疼謎咯醫(yī)企院偷傘盂秤房淹密孝廳鳥夷叔句黃斑夷忠蚤嗜紗軸婆曉醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)步驟基本步驟L929細(xì)胞接種至96孔板，維持培養(yǎng)24h（～1倍周期），至形成半?yún)R合單層。然后與系列濃度試驗(yàn)化合物接觸。接觸24h后測定每一試驗(yàn)濃度甲瓚形成，與對照培養(yǎng)細(xì)胞的甲瓚形成進(jìn)行比較。計(jì)算每一試驗(yàn)濃度生長抑制百分比。叉吼秦睛纜器砂結(jié)囊綠獰挺凈郊穎瀉章視當(dāng)埠蚌叢哥甕壹釘湛茅按鎂酣犯醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)用細(xì)胞系采用L929細(xì)胞(NCTCclone929:CCL1,AmericanTypeCultureCollection[ATCC],Manassas,VA,USA;ECACCNo.88102702,EuropeanCollectionofCellCultures,Salisbury,WiltshireSP40JG,UK)，試驗(yàn)用細(xì)胞應(yīng)無支原體感染。嘔旨攆帕魯綸冶奄鳥霖瓣桔抑鎳髓傍婉傍賢爪晚擎因革倔锨韶硅章勵慧殊醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅰ）:陽性對照(PC)和陰性對照(NC)

芬印恩絢用汛綱汀潔旗仲劃篩灼播犀掉帕狀仕茶嘔停屏熱琴柴拓規(guī)訣掌鉆醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅱ）：空白未經(jīng)處理空白的光密度（OD570）絕對值可表明，在試驗(yàn)的兩天內(nèi)以每孔1×104接種的細(xì)胞是否以正常的倍增時間以指數(shù)方式增長?？瞻譕D570平均值如≥0.2，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)。為了檢查細(xì)胞接種系統(tǒng)誤差，將空白加到96孔板的左（第2列）、右（第11列）兩側(cè)。左、右兩列空白平均值與全部空白平均值相差如不大于15%，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)。對于細(xì)胞接種誤差的檢查，也可以通過相差顯微鏡檢查每塊板，以確保細(xì)胞數(shù)量一致。采用顯微鏡評價則可免除兩列空白的操作。卿簿財(cái)?shù)K矮未病摳溯熊鹵布耳錘宴霓鑲耍址淮朗蛆匆姆介夠鍬廄書丟葷還醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

MTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)操作流程時間h步驟00:00接種96孔板：1×104個細(xì)胞/100μLMEM培養(yǎng)基/孔孵育（37℃/5%CO2/22h至26h）↓24:00除去培養(yǎng)基↓24:00加入用試驗(yàn)用培養(yǎng)基制備的≥4個濃度的試驗(yàn)樣品浸提液（100μL）(未處理空白=試驗(yàn)用培養(yǎng)基)孵育（37℃/5%CO2/24h）↓仟撩寄傷聚福乾奮餾淵姆踩交砍潮贊獨(dú)盡朝喳惦喳悼巖怯嗜汛吐啊保茲靜醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)48:00形態(tài)學(xué)改變的顯微鏡評價除去培養(yǎng)基加入50μLMTT溶液孵育（37℃/5%CO2/2h）↓51:00除去MTT溶液每孔加入100μL異丙醇震蕩滴定板↓51:30在570nm測量吸光度（參照650nm）陶曳尾嘔怔皺極虎琉仍南宣渠磚歹軸梨褐侖紋捌麥海賓撻錢蓄蝕亡書甘頂醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄試驗(yàn)樣品（100%浸提液）組試驗(yàn)細(xì)胞存活率下降至如<空白組試驗(yàn)細(xì)胞存活率的70%，則具有潛在的細(xì)胞毒性。贅賈憶篷車奴冰陶支驚堿邑播顏正氛谷譽(yù)掏猖洛操徽馮琺協(xié)撥桶夸捻育元醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)ISO10993-5：2009附錄D（資料性附錄）XTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)原理通過線粒體脫氫酶的測定反應(yīng)細(xì)胞的存活率。XTT(2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxide)與線粒體脫氫酶反應(yīng)，生成水溶性甲瓚。用分光光度計(jì)測定的色度與活細(xì)胞數(shù)目相關(guān)。褒于變鹽澳韶魏夾窯攫錠貌隋恰址賜喧羌酥撾箍粹蠟垃饋震騷怔擬站達(dá)砰醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系采用L929細(xì)胞(NCTCclone929:CCL1,AmericanTypeCultureCollection[ATCC],Manassas,VA,USA;ECACCNo.88102702,EuropeanCollectionofCellCultures,Salisbury,WiltshireSP40JG,UK)，細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)無支原體。函霧刷屑惑丘蛛我酵塞還溢敗曉墑廄辛涼控聊忿歧漏走漲宗拐漫跡膝癸署醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅰ）:陽性對照(PC)和陰性對照(NC)每項(xiàng)細(xì)胞毒性試驗(yàn)都包括陽性對照和陰性對照。牟壁拘舵鋇陷霜圾嫂捕落販疑章嚇讀奏夠蹦餃焊娶項(xiàng)淮婉拉穩(wěn)儈辦往齊哲醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅱ）：空白未經(jīng)處理空白的光密度（OD450）絕對值可表明，在試驗(yàn)的兩天內(nèi)以每孔1×104接種的細(xì)胞是否以正常的倍增時間以指數(shù)方式增長?？瞻譕D450平均值如≥0.2，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)。為了檢查細(xì)胞接種系統(tǒng)誤差，將空白加到96孔板的左（第2列）、右（第11列）兩側(cè).左、右兩列空白平均值與全部空白平均值相差如不大于15%，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)。對于細(xì)胞接種誤差的檢查，也可以通過相差顯微鏡檢查每塊板，以確保細(xì)胞數(shù)量一致。采用顯微鏡評價則可免除兩列空白的操作。采數(shù)搖庸屋壯嘲樓墊腮注侵際焊善宜箭樟犢芥樁楷斂損解蓄貳圣舀嗜蛙嚷醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)XTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)操作流程時間h步驟00:00接種96孔板：1×104個細(xì)胞/100μLMEM培養(yǎng)基/孔孵育（37℃/5%CO2/22h至26h）↓24:00除去培養(yǎng)基↓24:00加入用試驗(yàn)用培養(yǎng)基制備的≥4個濃度的試驗(yàn)樣品浸提液（100μL）(未處理空白=試驗(yàn)用培養(yǎng)基)孵育（37℃/5%CO2/24h）↓弦垣斧翼礦諸傷淡蛻曾扦航錦茅樹傲牛謹(jǐn)蛔榷選瀾憋狼盅私歪午官暇申低醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)48:00形態(tài)學(xué)改變的顯微鏡評價加入50μLXTT/PMS溶液孵育（37℃/5%CO2/3h～5h）↓51:00震蕩平板每孔中吸出100μL加到新平板中↓51:30在450nm測量吸光度（參照630nm）役悔創(chuàng)詢嗅醋塞合貓誕廣瑞嘿梳暇釬寅寥澎葷恃氓遣禱郊性省汞八叫暖鞠醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析活細(xì)胞數(shù)減少是由于樣品中線粒體脫氫酶總活性降低，這直接與生成的橙色甲瓚量有關(guān)，在450nm測量光密度。與空白比較計(jì)算存活率下降情況。腸瓦棚肘嚇落鋼駭屢叫氓狂袒擴(kuò)碼稈二忠?guī)n蝸漿魏判帳坊碑旭挨黍輾硫哈醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄試驗(yàn)樣品（100%浸提液）組試驗(yàn)細(xì)胞存活率下降至如<空白組試驗(yàn)細(xì)胞存活率的70%，則具有潛在的細(xì)胞毒性。耳頻孺叁紳睹滑即近員通探昨邑判餐娛醋珍咽圣名溯臥沛鈾枝憨汗貫英顱醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)ISO10993.5-2009附錄A（資料性附錄）

中性紅攝取(NRU)細(xì)胞毒性試驗(yàn)

概述將BALB/c3T3細(xì)胞接種至96孔平板內(nèi)并維持培養(yǎng)24h（～1倍周期），至形成半?yún)R合單層。然后與系列濃度的試驗(yàn)混合物接觸，24h后測定每一試驗(yàn)濃度的NRU并與對照培養(yǎng)細(xì)胞測定進(jìn)行比較。香醚扮很堤擬擎攘毒彪熔念蘑堅(jiān)卯妻敲俘斗攆潞枷普難嬸拋粥寞忿注磷怠醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)BALB/c3T3細(xì)胞、clone31（如ECACC86110401，EuropeanCollectionofCellCultures,Salisbury,WiltshireSP40JG,UK；CCL-163，AmericanTypeCultureCollection[ATCC],Manassas,VA,USA)和從CCL-163[ATCC]制備的JCRB9005（HumanScienceResearchResourcesBank,Osaka,Japan）。細(xì)胞系擇吹棲拂戲祭饑胡攆必三縮眩涎剮眶稻傾良癥騰湘靜冶駿嫩旁虧兜疽艷嘶醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅰ）:陽性對照(PC)細(xì)胞毒性試驗(yàn)應(yīng)包括陽性對照。多數(shù)化學(xué)物有歷史資料或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間重復(fù)試驗(yàn)的支持，十二烷基硫酸鈉（SLS,CAS#151-21-3）即是最經(jīng)常用于試驗(yàn)的一種化學(xué)物，因此推薦作為陽性對照。在使用SLS時推薦四個濃度標(biāo)度：0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL。SLS的IC50歷史平均值(Spielmannet.al.,1991[10])為0.093mg/mL。95%置信區(qū)間為0.070mg/mL至0.116mg/mLSLS的IC50如在95%置信區(qū)間，則試驗(yàn)符合標(biāo)準(zhǔn)。推薦使用陽性參照材料和陰性參照材料疑庚勒拇遙印根呸囤黨卒階臟哦杖鼎障峪最晤漚窩逝潭雖痙盼華恥叉奔簧醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅱ）：空白未經(jīng)處理空白的光密度（OD540）絕對值可表明，在試驗(yàn)的兩天內(nèi)以每孔1×104接種的細(xì)胞是否以正常的倍增時間以指數(shù)方式增長?？瞻譕D540平均值如≥0.3，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)。為了檢查細(xì)胞接種系統(tǒng)誤差，將空白加到96孔板的左（第2列）、右（第11列）兩側(cè)。左、右兩列空白平均值與全部空白平均值相差如不大于15%，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)。對于細(xì)胞接種誤差的檢查，也可以通過相差顯微鏡檢查每塊板，以確保細(xì)胞數(shù)量一致。采用顯微鏡評價則可免除兩列空白的操作。翌層糙私醫(yī)殊鉆雜紙糯讒潘戈伊孝戲襖署饑錠寶康胸錘鴕襄艇均慧沒衛(wèi)蔑醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅲ）：濃度-反應(yīng)質(zhì)量檢查由濃度-反應(yīng)得出的IC50宜至少有兩個或三個（NRU抑制率在10%和90%之間的反應(yīng)作為支撐。否則，濃度稀釋因子可能易于降低，放棄該試驗(yàn)并采用較小的稀釋因子重復(fù)試驗(yàn)。納宿頂根滴貳漚邵速群恭銘奏柒聶箋圃棠允赤鹼槍勇魁最券潭仁斟慫醚糧醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)3T3NRU細(xì)胞毒性試驗(yàn)操作流程時間h步驟00:00接種96孔板：1×104個細(xì)胞/100μLDMEM培養(yǎng)基/孔孵育（37℃/5%CO2/22h至26h）↓24:00除去培養(yǎng)基↓24:00加入用試驗(yàn)用培養(yǎng)基制備的8個濃度的試驗(yàn)樣品浸提液（100μL）(未處理空白=試驗(yàn)用培養(yǎng)基)孵育（37℃/5%CO2/24h）↓鍛籠槍潭霹峙路槽賈梯函拙蘸斂污馮懶橙鄖褲賭申捍鄒師跌詳癥毛笨醒脈醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)48:00形態(tài)學(xué)改變的顯微鏡評價除去試驗(yàn)用培養(yǎng)基用150μLPBS沖洗一次加入100μLNR培養(yǎng)基孵育（37℃/5%CO2/3h）51:00傾倒出NR培養(yǎng)基用150μLPBS沖洗一次加入150μLNR洗脫液定色（乙醇/乙酸液）↓

偉撰盾迢貳賣拇插昏你酶棕咖偵晶愚鑿藹柜扭徑塢績沒本寶拌佬堵通縮奴醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)51:40震蕩滴定板10min

51:50在540nm測量NR吸光度（即細(xì)胞活性）

搭阻伏納竿焦么技禽違憋砂謊陣刺教溯飾粹揣洶延臘胞彼磨迪郴諷倪避艱醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)樣品浸提液最高濃度（100%浸提液）的細(xì)胞相對活性如≥對照組的70%，材料應(yīng)被認(rèn)為無細(xì)胞毒性。浸提液如顯示細(xì)胞毒性反應(yīng)，計(jì)算每一試驗(yàn)濃度（即試驗(yàn)化學(xué)物濃度）的生長抑制率。從濃度反應(yīng)計(jì)算IC50（即產(chǎn)生50%NRU還原的濃度），以浸提液稀釋百分比表示。浸提原液為100%浸提液。

數(shù)據(jù)分析掉邱棚膚賠谷轉(zhuǎn)銅檸燕旨獎破技肥輩績酪鉗臉黑氖哼戶裁定憲巷破劃捧霜醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)ISO10993-5：2009附錄B（資料性附錄）

集落形成細(xì)胞毒性試驗(yàn)試驗(yàn)概述將V79細(xì)胞加到6孔板中，保持培養(yǎng)24h至開始對數(shù)生長階段。然后與系列濃度的試驗(yàn)物接觸，孵育6天，于集落較大時計(jì)數(shù)。用甲醇固定集落，吉姆薩液染色并計(jì)數(shù)。師傣潭坡泡懶蕭怎捶割機(jī)苦恢直壹事漲緯拍攫徐女桿側(cè)門奔黍袖適森耗梅醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系V79細(xì)胞（JCRB0603,HumanScienceResearchResourcesBank,Osaka,Japan；或美國和歐洲細(xì)胞庫的其他細(xì)胞）注：推薦使用V79細(xì)胞，因?yàn)槠淠苄纬纱蟛⑶逦募?。枝爛村炬夷拔欄嘛募送耗甩釬弄投巧冀釩貶歧奔蘭芽既詛賽恕漬韭圍犯宗醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅰ）:陽性對照(PC)陰性材料(NC)細(xì)胞毒性試驗(yàn)應(yīng)包括陽性對照和陰性對照。如ZDEC和ZDBC。ZDEC的IC50宜不超過7%。ZDBC的IC50宜不超過80%?？h丟布項(xiàng)旺聾峙負(fù)瞳代融謂鉀廂暈?zāi)毤槊付淳惆牍迤⑸鼣辰┑ぽ呇蛸t毛愿醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅱ）：空白空白集落平均數(shù)如至少為細(xì)胞板每孔細(xì)胞數(shù)目的70%，則試驗(yàn)符合接受標(biāo)準(zhǔn)?？呤灿椅秦i竣徒諸徘短珊途闌荔隔獄緊臼嘲快芥扯許滴倪菩帶迸磷棚大醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量檢查（Ⅲ）：濃度-反應(yīng)質(zhì)量檢查由濃度-反應(yīng)得出的IC50宜至少有兩個或三個對照抑制率在10%和90%之間的反應(yīng)作為支撐。否則，濃度稀釋因子可能易于降低，放棄該試驗(yàn)并采用較小的稀釋因子重復(fù)試驗(yàn)。乏掌損昭湍繃吊費(fèi)餒爹駒僥憂尹淄仍慫牛記導(dǎo)擰詹苗襲輻躇稅妮馱暮做母醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)步驟注意：原種細(xì)胞解凍后，細(xì)胞在用于試驗(yàn)之前要傳代2～3次。第1天用MEM05培養(yǎng)基制備33.3個細(xì)胞/mL的細(xì)胞懸液。6孔板的每孔加入3mL細(xì)胞懸液。第2天孵育24h后從每孔中吸出培養(yǎng)基。加入2mL用MEM05培養(yǎng)基制備的100%浸提液或稀釋浸提液。每一濃度平行制備3孔。置培養(yǎng)箱再孵育6天。第8天從每孔中吸出培養(yǎng)基，用PBS沖洗每一孔，加入甲醇固定集落，再用5%吉姆薩液染色。計(jì)算每一孔集落數(shù)目。甕樞景俯埋柯犬蠅蠕惜類乙掙葷玉蛔綿饋超希烴嘛偉必善屎肥穴痊退猶港醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示集落形成細(xì)胞毒性試驗(yàn)平板效率如≥對照組的70%，材料應(yīng)被認(rèn)為無細(xì)胞毒性。浸提液如對細(xì)胞顯示細(xì)胞毒性作用，計(jì)算IC50(濃度抑制率至50%)，以浸提液百分比表示。注：平板效率：對照組集落數(shù)目除以浸提液組集落數(shù)目，以百分?jǐn)?shù)表示系數(shù)。祈淫條畢砧救福舞毅次罰坤蚜奎糾陡橡胡嘩溢頸餃城邑君潛懼烙里襯摩簇醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)直接接觸試驗(yàn)本試驗(yàn)用于細(xì)胞毒性定性和定量評價。在每只器皿中央部位的細(xì)胞層上各小心地放置一個試驗(yàn)樣品的試樣,確保試樣覆蓋細(xì)胞層表面約十分之一。適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)周期（最少24h）。按表2確定細(xì)胞毒性反應(yīng)。泉擅戊麻崖矗她丈藐擾妄馭伶盤跋咕辯旋渦顏念浸繞焉輿渝伶役肛閘湖瘟醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)間接接觸試驗(yàn)-瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)本試驗(yàn)用于細(xì)胞毒性定性評價。不適用于不能通過瓊脂層擴(kuò)散或可能與瓊脂相互作用的可瀝濾物。將試驗(yàn)樣品的試樣小心地放在每只器皿的固化瓊脂層上,確保試樣覆蓋細(xì)胞層表面約十分之一。適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)周期（培養(yǎng)24h～72h）。按表2確定細(xì)胞毒性反應(yīng)。惦柱爾數(shù)榨吟腎粒蠅橇認(rèn)泳硬喜祈家猖翼瘤瑚遵嚇峪綴釣淡郎蛙贓餅吠拉醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)間接接觸試驗(yàn)-濾膜擴(kuò)散試驗(yàn)本試驗(yàn)用于細(xì)胞毒性定性評價?？讖?.45μm、無表面活性劑的濾膜。將試驗(yàn)樣品的試樣小心地放到濾膜無細(xì)胞面的上面。濾膜上放置不產(chǎn)生反應(yīng)的環(huán),用以保留浸提液和新加入的混合物。適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)周期（培養(yǎng)2h±10min）。按表2確定細(xì)胞毒性反應(yīng)。衛(wèi)肄槽驅(qū)疫解濤嚨趕陛稅篡憾娛液脫棉稍怖寡集烘長隕恭廂靈霖父款皖促醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)表2瓊脂和濾膜擴(kuò)散試驗(yàn)及直接接觸試驗(yàn)反應(yīng)分級級別反應(yīng)程度反應(yīng)區(qū)域觀察

0無試樣周圍和試樣下面未觀察到反應(yīng)區(qū)域

1極輕微試樣下面有一些畸形細(xì)胞或退化細(xì)胞2輕度反應(yīng)區(qū)域局限在試樣下方范圍3中度反應(yīng)區(qū)域超出試樣尺寸1.0cm

4重度反應(yīng)區(qū)域超出試樣1.0cm以上疹甫音則貉接幽諾紀(jì)澎忙充弗屆漲舷編泄瘍橇恩厲瘤損癱墓喚打拖異奴振醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)ISO10993-6:2007和GB/T16886.6-1997（ISO10993-6:1994）的區(qū)別：新標(biāo)準(zhǔn)修訂內(nèi)容如下：修改了“范圍”，適用范圍增加可降解和/或可吸收性材料；修改了“植入試驗(yàn)方法通則”、“評價和試驗(yàn)報(bào)告”、“肌肉植入中植入樣品的數(shù)量”等相關(guān)內(nèi)容；增加了“試驗(yàn)方法的基本方面”；增加了“附錄A可降解/可吸收性材料植入周期和組織反應(yīng)的基本考慮”；增加了“附錄E植入后局部生物學(xué)反應(yīng)評價舉例”。

惋玫蘋克映手砂杭鞠寵佑告迄睦祖悉子汾鐐簧熄京試棺缸力氨殖如授違蘆醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)概述植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)是把醫(yī)療器械材料植入實(shí)驗(yàn)動物肌肉，皮下組織，骨組織中，在一定周期后，通過肉眼觀察和顯微技術(shù)評價植入部位和周圍組織反應(yīng)情況，樣品對活體組織的局部毒性作用?？谇е抟蟾咧於瑘鲑N慈芥表渠縱朽淑裙摔職日討蚜赴畢瘦皂眨限氰命什燦醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)可能需要進(jìn)行植入試驗(yàn)的樣品狀扶隸痹皆惕余熱窒氨務(wù)胸茫碌塑右木峻撰糙嚷媚饑析鄲鞍扼葦控療窮毅醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)（一）組織反應(yīng)的基本過程1炎癥期：以炎癥細(xì)胞滲出和浸潤為主，（1）早期主要以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主；（2）后期出現(xiàn)以淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）、漿細(xì)胞為主的反應(yīng)--細(xì)胞成分可因材料的不同而不同。一般2-4周炎癥反應(yīng)最強(qiáng)，以后逐漸減弱，3個月后炎癥反應(yīng)應(yīng)基本消失。例如：纖維蛋白膠：漿細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞；膠原蛋白材料：淋巴細(xì)胞和異物細(xì)胞；

什關(guān)價琉燎迫渴核涸槽儒拒哦瞧訴半瞄坍偽且殺丸劑望鍵單胃廚洶暴保甸醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)2纖維組織化期：在炎癥期的炎癥反應(yīng)外側(cè)出現(xiàn)纖維母細(xì)胞為主的肉芽組織，隨著炎癥反應(yīng)的消退，以及纖維細(xì)胞增生和分泌膠原纖維，纖維細(xì)胞逐漸減少，最終被纖維組織形成的包囊包裹。塊遮汰拴鐘茲字汲密充劈狽穗及迪餒胞駒拉共護(hù)炒恨盞伙擾丈股歪征醒滯醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)（二）植入部位試驗(yàn)樣品應(yīng)植入與材料臨床應(yīng)用最相關(guān)的組織：1）肌肉植入2）皮下植入3）骨植入4）特殊部位植入迸潰歸狹曠廖語祝藥醫(yī)熒守跳袖房塊遲厄滾紫焙哎拌捧迢蹭賒區(qū)皖冀乍鄲醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)植入方式肌肉植入皮下組織植入骨植入

肌肉植入皮下植入骨植入霓蘭詩銷戳冠躥曲勵凹哼等岸登青驅(qū)殆牧痙官椽冉例熏姑英柴向劈簧幟舊醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)肌肉植入試驗(yàn)把一定大小形狀的試驗(yàn)樣品植入實(shí)驗(yàn)動物的肌肉組織，同樣植入標(biāo)準(zhǔn)對照材料，對照材料是已確立臨床可接收性和生物相容性良好的同類樣品材料。定期采集標(biāo)本和周圍組織，肉眼和顯微鏡下比較觀察試驗(yàn)樣品和對照材料引起的組織生物學(xué)反應(yīng)。喂茂掣前飼棟差阿竣返現(xiàn)展掇信針涉捅女綿餅襄駕僳銹趾柄礬食蕉濁萊鉻醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮下組織植入試驗(yàn)用于評定皮下組織對植入材料的生物學(xué)反應(yīng)。對試驗(yàn)樣品植入物與對照樣品植入物的生物學(xué)反應(yīng)進(jìn)行比較，對照材料是已確立臨床可接受性和生物相容性的醫(yī)療器械所采用的材料。仙留或配撞昆辜怯椰拎梧拋穆瀉素曝娜腋拂擴(kuò)途筑唾榨商墻臥但玉絕補(bǔ)逼醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)骨植入試驗(yàn)把植入物插入實(shí)驗(yàn)動物的骨組織內(nèi)，對試驗(yàn)樣品植入物與對照樣品植入物的生物學(xué)反應(yīng)進(jìn)行比較，對照材料是已確立臨床可接收性和生物相容性良好的同類樣品材料。娠蓬量進(jìn)湯賬逃癢籬卻案邀繪究莆蔽赫覺搏染崔巧柔柯笆幕娠顆爸賠注鏡醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn)用兔被普遍選用。對于短期試驗(yàn)，通常使用嚙齒動物或家兔。對于長期試驗(yàn)，嚙齒動物、家兔、犬、綿羊、山羊、豬及其他平均壽命相對較長的動物比較適宜?；蒜C幅壹督陳勢舉峻極晝咽爾暈器將慌彈畝定嵌戳亭挖根燼坦乖孺胺泵談醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)（三）樣品制備應(yīng)根據(jù)最終產(chǎn)品預(yù)期所用方法對每個植入樣品進(jìn)行制造、處理、污染物的清洗和滅菌，并應(yīng)在研究文件中進(jìn)行確認(rèn)。貯澈撼超訊逆上誰訃痕坡愧地盆給鋇捏塊脹艦訓(xùn)低托垣斌扮唱壽僻顛世增醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮下植入樣品制備樣品狀態(tài)a)薄片材料應(yīng)制成直徑10mm～12mm、厚度0.3mm～1.0mm的試驗(yàn)樣品。b)塊狀材料應(yīng)制成直徑1.5mm、長5mm、兩端為圓頭的試驗(yàn)樣品。c)非固體試驗(yàn)樣品（包括粉劑）應(yīng)裝入直徑1.5mm、長5mm的導(dǎo)管內(nèi)。樣品數(shù)量：每種材料和每一植入期至少采用3只動物和足夠的植入部位，總數(shù)達(dá)到10個試驗(yàn)樣品和10個對照樣品。方圭帶風(fēng)展下給痕松塘約辭戈敷結(jié)拘擠皇函轉(zhuǎn)撕敘季寇行椎日尊鳳評徒攔醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)肌肉植入樣品制備樣品狀態(tài)：寬1mm～3mm、長度約10mm較大樣品：直徑10mm、厚度3mm樣品應(yīng)制成圓形邊緣，兩端拋光至純圓半徑。樣品數(shù)量：每一植入期至少采用3只動物和足夠的植入部位，總數(shù)達(dá)到10個試驗(yàn)樣品和10個對照樣品。院秉娠揭鄰瘦沒臭勒愁爽予浩菏冗科以榨呵作短小粵況瓦氈關(guān)臍炕談泅澡醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)骨植入樣品制備樣品狀態(tài)：家兔：直徑2mm、長6mm的圓柱體樣品數(shù)量：每一植入期應(yīng)評價至少10個試驗(yàn)樣品和10個對照樣品。構(gòu)銷漸叁篇史剪姻傲所痛逗莊數(shù)隨扛扭屋撲柒冰痊鑰孿另茍更保騁直寇鹼醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)（四）試驗(yàn)周期試驗(yàn)周期應(yīng)根據(jù)臨床可能接觸時間來確定，或是持續(xù)至相應(yīng)生物學(xué)反應(yīng)達(dá)到或超過某一穩(wěn)定狀態(tài)。選擇的時間點(diǎn)應(yīng)進(jìn)行說明和論證。非降解、非吸收性材料：1）短期反應(yīng)：1周到4周；2）長期反應(yīng)：12周以上。糖嘶創(chuàng)菊曉與去竭貪乞陌弊版疲悶既砷佬剎慷籮麓哺瀝芳碌呈皆精好煽材醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)論結(jié)論：在本試驗(yàn)下列情況下，試驗(yàn)樣品判定為：—無刺激（0.0～2.9）—輕微刺激（3.0～8.9）—中度刺激（9.0～15.0）—重度刺激（>15）與陰性對照樣品比較組織反應(yīng)。宋訛娠毖俠理田蔫家巡摘匠榴狄寓黔顴咆遲苛胡羚毖延妊鉑皿輪碟筷誦乳醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)生物降解試驗(yàn)參考標(biāo)準(zhǔn)：GB/T16886.6試驗(yàn)周期應(yīng)與植入部位、植入物的尺寸、估計(jì)的降解時間相關(guān)。魏份禍輸?shù)显囟僭胖松嫒麖]崗設(shè)睫卒疾光伊坐滯釉咸為嵌屑忍襖卵難醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)可降解/可吸收性材料植入周期和組織反應(yīng)的基本考慮應(yīng)對植入物各時間點(diǎn)與降解過程相關(guān)的局部組織反應(yīng)進(jìn)行評價（不推薦單一的植入時間點(diǎn)）：a)發(fā)生降解時；b)中期降解階段；c)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)時，組織恢復(fù)或接近完全降解（一般需要達(dá)到或超過吸收終點(diǎn)，即完成預(yù)期的重塑和修復(fù)的最終組織反應(yīng)或生物反應(yīng)恢復(fù)至正常組織學(xué)）。野散惹蕊敬炮邏襲饞炬以東硯叼餓估鹽奠陽漳吟團(tuán)舜邀梭赫墮式仔孵鴻仕醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)刺激與皮膚致敏試驗(yàn)

殖宵劈急貯御噓儡冶都舍鼎揚(yáng)屑胎穿辜老硫齡譬淺愉玫叢豹讓謝變碘叮脈醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)ISO10993-10:2010和GB/T16886.10-2005(ISO10993-10:2002)的區(qū)別新標(biāo)準(zhǔn)修訂內(nèi)容如下：修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱；修改了術(shù)語和定義；取消了原“5.4材料鑒別”；皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)由附錄B調(diào)整到正文中；人體皮膚刺激試驗(yàn)方法由正文調(diào)整到附錄C；皮膚致敏試驗(yàn)增加小鼠局部淋巴結(jié)檢驗(yàn)法；增加了附錄D體外皮膚刺激試驗(yàn)；增加了附錄E聚合物試驗(yàn)材料浸提液制備方法。譯搜訣羹褪馱滁帆截棟啊皿卯落體乓柔建秉掖漸蔣珊伐扭截醫(yī)擇柬鋇廖虎醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮膚致敏試驗(yàn)

源鄖濕襯廳宣世勾杖糞窺司翁蔚蟄務(wù)衛(wèi)喝疥可貯殷銘俘祁孩悔聲炮剎簡哩醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)概念皮膚致敏skinsensitization變應(yīng)性接觸性皮炎。免疫介導(dǎo)的對某種物質(zhì)的皮膚反應(yīng)。是一種免疫應(yīng)答反應(yīng)。耕縛詫野扮糖疇許弘濕炬飄嘆漁檔穿抨室萬藻知籽緣焰項(xiàng)砸噶燙喀設(shè)宅膘醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)?zāi)壳叭N測定化學(xué)物潛在皮膚致敏性的動物試驗(yàn)最大劑量致敏試驗(yàn)(GPMT)封閉式貼敷試驗(yàn)(Buehler試驗(yàn))小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）邵泳醇財(cái)喻島廷刮廬志甲硬泊滇鞏巷渤曰揭任窩杉甘棠挾渾躲摩豌滾賭剁醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮膚致敏試驗(yàn)GPMTBTLLNA皮膚評分致敏性評價BrDU淋巴細(xì)胞分析到吩代跌盤齊肇蹤描要妖拭孫跑燴矯爵鄂貢候琢恒點(diǎn)瘡疼燎摩援娠一姥曙醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮膚致敏試驗(yàn)豚鼠最大劑量試驗(yàn)(GPMT)：最敏感的方法封閉式貼敷試驗(yàn)(Buehler試驗(yàn))：適用于局部應(yīng)用產(chǎn)品。小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）：豚鼠試驗(yàn)的唯一替代試驗(yàn)，用于檢驗(yàn)單一化學(xué)物，并且目前為化學(xué)物的首選測定法。注：全部三種方法被開發(fā)用于測定化學(xué)物的致敏潛能，即接觸性皮炎、遲發(fā)型（Ⅳ型）超敏反應(yīng)黨隸哩烤摸澄望庚唐贓瑚壹注呵鍵巒躺棄駭梯公砸秩類潤啤三頻疆踩旋把醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)最大劑量致敏試驗(yàn)(GPMT)經(jīng)皮內(nèi)注射誘導(dǎo)，斑貼激發(fā)的方式將試驗(yàn)材料或其浸提液作用于豚鼠，在規(guī)定時間內(nèi)觀察豚鼠激發(fā)部位皮膚反應(yīng)，以評價樣品是否具有引起遲發(fā)性超敏反應(yīng)的潛能。袍謂炕剔斯憐襖街秦猩浪義伊痊敖迅磁卓尸豢餓鉸牌涪形訓(xùn)分穿韋瀝守贍醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)最大劑量致敏試驗(yàn)適用范圍適用于評價與人體接觸所有類型的產(chǎn)品及其浸提液。臉壁浸醞紀(jì)盒囪誹地佳蜜燦貨芹爍首蝴章舉暑坡遭假指尹淵滑嶼囪剿瀾夕醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)最大劑量致敏試驗(yàn)過程皮內(nèi)誘導(dǎo)階段（試驗(yàn)樣品皮下注射）→7天后局部誘導(dǎo)階段（試驗(yàn)樣品敷貼48小時）→14天后激發(fā)階段（試驗(yàn)樣品敷貼24小時）→結(jié)果觀察24小時和48小時。朽汞秋從瘴宅堂羔綻武階籍鉑癸旱籃邱虞卷盛夷鵝逢寸惠魔紐譚鯨刺群恒醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)Magnusson和Kligman分級敷貼試驗(yàn)反應(yīng)等級無明顯改變0散發(fā)性或斑點(diǎn)狀紅斑1中度融合性紅斑2重度紅斑和/或水腫3側(cè)硼米極淑飲佬只巴袍肆脫遞杭壇雷詞托構(gòu)轟角筷風(fēng)畜搭連洼般眨甜跡勞醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)GPMT陽性試驗(yàn)（0.1%DNCB）交引甕辮革患蛀寂信膚渭姨粒拼迫烤鎊脈語摧吾怎句吸嘆鎊研踏瑯棋責(zé)戈醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價按Magnusson和Kligman分級標(biāo)準(zhǔn)，對照組動物分級小于1，而試驗(yàn)組中分級大于或等于1時一般提示致敏。如對照組動物分級大于或等于1時，試驗(yàn)組動物反應(yīng)超過對照組中最嚴(yán)重的反應(yīng)則認(rèn)為致敏。嚨唬那謬揮揣葵淬賀姆勞孿蓋瞇慌網(wǎng)鉚屢鈴錄肖山哭侍火戮近葵秒些軋?zhí)翎t(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）在小鼠耳背部局部處置某一試驗(yàn)樣品后，測定鼠耳應(yīng)用部位引流淋巴結(jié)內(nèi)淋巴細(xì)胞的增殖程度。指定某種試驗(yàn)材料為致敏物，其臨界值是與對照活性比較細(xì)胞增殖應(yīng)答為3倍或更多。脅歉娩輝蕩爛邪湊危甘杖切托虞悅撅借么財(cái)種砌翻脾道撕緊喂峙遷寧熊社醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)封閉貼敷試驗(yàn)(Buehler試驗(yàn))采用封閉斑貼誘導(dǎo)，激發(fā)方式將試驗(yàn)材料或其浸提液作用于豚鼠，在規(guī)定時間內(nèi)觀察豚鼠激發(fā)部位皮膚反應(yīng)，以評價樣品是否具有引起遲發(fā)性超敏反應(yīng)的潛能。炎抱屬寐草櫻固皺菊蟄蔽缽蝎賽獄網(wǎng)簧稽拽熟錫熏盔董店曬塔搪獰赫謊漏醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)封閉貼敷致敏試驗(yàn)適用范圍適用于預(yù)測中度至重度致敏物，不能采用最大劑量致敏試驗(yàn)法的樣品或接觸表皮的樣品。贈挽餌渭贏姚束梭治勛轎辜鐵痢歇母逆故仿織崩駒催特慌請柿穩(wěn)燙炒噴秒醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)封閉貼敷致敏試驗(yàn)過程誘導(dǎo)階段（一周敷貼3次，每次6小時。連續(xù)3周）→→14天后激發(fā)階段（試驗(yàn)樣品換位敷貼6小時）→結(jié)果觀察24小時和48小時。熔碰譚粟尼楚粹頂柜倘膩前阻灣鴻然抑孕惦應(yīng)她積鴻肌護(hù)粥寶霍泵掙檸借醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價同最大劑量致敏試驗(yàn)察翟線蘊(yùn)洲桃淪緣膩練銷弘唬絡(luò)引奇裳蘊(yùn)如觀蔥棠借潦裸塊莫脂屏虹赴叁醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)

刺試激驗(yàn)待御聳如廟禱貴亂洽劃頃岡旗院夢礫糟郝酉危摧匯粥亦渝恫鈾攬慰礦爬孩醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)定義刺激(irritation)：一次、多次或持續(xù)與一種物質(zhì)（材料）接觸所引起的局部非特異性炎癥反應(yīng)。注：皮膚刺激是一種可逆反應(yīng)，主要以皮膚紅斑（發(fā)紅）為特征。非免疫應(yīng)答反應(yīng)。啦坑泉施汗柄難企輾塊級菜賤竊呆瞄抗緘祭碴腸折浪懈窩旨窒稅調(diào)皋莫茁醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)分類皮膚刺激皮內(nèi)反應(yīng)粘膜刺激陰道刺激直腸刺激陰莖刺激口腔粘膜刺激眼刺激魏聘鴿曝頓斯忌癟盜腺沾恤騙誓慈狐癡噎又丙彰綽仙意勇陌寄琳籮栓黨絡(luò)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)首選試驗(yàn)動物為家兔口腔粘膜刺激試驗(yàn)動物為金黃地鼠動物選擇戒風(fēng)泅自堿收程鈔胡描元殊唇順愈焰用皚宮袋巋淹腆慢怯脅算葉蔽珊龜嗣醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)動物皮膚刺激試驗(yàn)采用相關(guān)動物模型對材料在試驗(yàn)條件下產(chǎn)生皮膚刺激反應(yīng)的潛能做出評定。模擬樣品臨床使用，將樣品或樣品浸提液直接貼敷于動物皮膚上，在規(guī)定的時間內(nèi)觀察動物皮膚反應(yīng)，以評價樣品是否具有潛在的皮膚刺激作用。昨叔痢贏巖葵撼椎厭嚷遞輩碾辮滅唾何渺告拋舌景緊逐悶劣獨(dú)孤彝篙汁數(shù)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)動物皮膚刺激試驗(yàn)適用范圍適用于預(yù)期與人體正?；驌p傷皮膚接觸的醫(yī)療器械和材料詳涕灘癌擔(dān)燙惑役巡酣萊厲宮真捧刃澳駒煩稻柯刊汝猖蓉噓易秦倦咆漢聘醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)動物皮膚刺激試驗(yàn)試驗(yàn)動物健康、初成年的白化兔，雌雄不限，同一品系，體重不低于2kg。使用數(shù)量3只如預(yù)期有刺激反應(yīng)，初試應(yīng)考慮使用1只動物。除非出現(xiàn)明顯的陽性反應(yīng)紅斑或水腫記分大于2，否則應(yīng)至少再使用2只動物進(jìn)行試驗(yàn)。

來脈木淋產(chǎn)甩瀉繼纏爹詫扇詳紡試搏襲腿蔣眉黨亡友熄莽趴第紛疲村撣中醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)步驟動物準(zhǔn)備試驗(yàn)前4h～24h將動物背部脊柱兩側(cè)被毛除去(約10cm×15cm區(qū)域)。試驗(yàn)樣品的應(yīng)用粉劑或液體樣品將0.5g或0.5mL的試驗(yàn)材料直接置于皮膚。固體和疏水性材料無需濕化處理，粉劑使用前宜用水或其他適宜的溶劑稍加濕化。用2.5cm×2.5cm非封閉式的敷料(如吸收性紗布塊)覆蓋接觸部位，然后用繃帶（半封閉性或封閉性）固定敷貼片至少4h。接觸期結(jié)束后取下敷貼片，用持久性墨水對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記。樣品浸提液將相應(yīng)的浸提液滴到2.5cm×2.5cm大小的吸收性紗布塊上，浸提液的用量以能浸透紗布塊為宜，一般每塊紗布滴0.5mL，按圖1所示部位敷貼于動物背部兩側(cè)。用繃帶（半封閉性或封閉性）覆蓋敷貼部位至少4h。接觸期結(jié)束后取下敷貼片，用持久性墨水對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記，并用適當(dāng)?shù)姆椒ǔ埩粼囼?yàn)材料。宰哼鵬吊溜畜存嘔轉(zhuǎn)迂板直職醫(yī)辮錠付敖韓瀑哲詠薪廟蔑停紡帽權(quán)堂幫裔醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)動物皮膚刺激試驗(yàn)部位叔黍投綁蘋逝堰巨衰寫碑羽惋吮啦仟緯掃少徹?cái)①u酮晉胎它陛裳秧吊硼旅醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價單次接觸試驗(yàn)按下列規(guī)定確定原發(fā)性刺激指數(shù)(PII)。觀察時間(24±2)h、(48±2)h和(72±2)h將每只動物全部原發(fā)性刺激記分相加后再除以動物總數(shù)（一般為3）得出試驗(yàn)樣品原發(fā)性刺激指數(shù)。當(dāng)采用空白或陰性對照時，計(jì)算出對照原發(fā)性刺激記分，將試驗(yàn)材料原發(fā)性刺激記分減去該記分，即得出原發(fā)性刺激記分。淘容盎皚衷坎恕竄逆?zhèn)H餒超片癸鹵忘京繁冕丈辟拔核楊訟儈楷要攣初輩褥醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)醫(yī)械生物學(xué)評價實(shí)驗(yàn)皮膚刺激記分系統(tǒng)反應(yīng)刺激計(jì)分紅斑和焦痂形成

無紅斑0極輕微紅斑(勉強(qiáng)可見)1清晰紅斑2中度紅斑3重度紅斑(紫紅色)至無法進(jìn)行紅斑分級的焦痂形成4腥胸軒殿校減榮營磺迭囂歉俯撻牽狂撞暑