電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用

關(guān)于電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用第1頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)

二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論第2頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三（一）概念電子顯微鏡技術(shù)：也稱電子顯微技術(shù)或電子顯微術(shù)第3頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三概念電子顯微鏡技術(shù)

電鏡精密儀器

樣品制備技術(shù)

第4頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三1、電子顯微鏡：是用電子束成像的顯微鏡，電子顯微鏡是一種高精密度的電子光學(xué)儀器，它具有較高分辨率本領(lǐng)和放大倍數(shù)，是觀察和研究物質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的重要工具。

發(fā)明背景：它是在發(fā)現(xiàn)電子束具有波動(dòng)性質(zhì)及利用磁場改變電子束行徑，在上述理論的指導(dǎo)下發(fā)明出的。電子顯微鏡主要分為兩種類型：一種是觀察樣品內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的透射電子顯微鏡，另一種是揭示樣品表面形貌的掃描電子顯微鏡。電子顯微鏡特征：電鏡與光鏡的區(qū)別掃描電鏡與透射電鏡比較：（見下表）第5頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三掃描電鏡和透射電鏡比較第6頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三本圖片來自中科科儀第7頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三本圖片來自中科科儀第8頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三2、樣品制備透射電鏡樣品制備的常用方法：包括超薄切片、冷凍復(fù)型、負(fù)染色等。掃描電鏡樣品制備：比透射電鏡樣品制備簡單。除保存樣品表面形貌結(jié)構(gòu)外，只要求樣品干燥并能導(dǎo)電，而不需包埋和切片。制備方法與透射電鏡樣品制備方法一樣。第9頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論第10頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三二．診斷病理學(xué)概述病理學(xué)是研究疾病病因、發(fā)病機(jī)制、形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能、代謝變化的一門基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及其與臨床醫(yī)學(xué)之間的橋梁學(xué)科。主要包括基礎(chǔ)病理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)及診斷病理學(xué)(以往稱外科病理學(xué)或臨床病理學(xué))。各級(jí)醫(yī)院病理科所從事的工作主要是診斷病理學(xué)。病理檢查內(nèi)容通常包括活體組織檢查、手術(shù)切除標(biāo)本檢查、術(shù)中冰凍檢查、細(xì)胞學(xué)檢查、尸體解剖檢查等。病理檢查的手段很多,如:HE常規(guī)檢查、特殊染色(組織化學(xué))、免疫組化、原位分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、電子顯微鏡檢查、病理圖像分析、流式細(xì)胞儀檢查、細(xì)胞培養(yǎng)、傳真病理學(xué)(telepathology)等。第11頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論第12頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三三．電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用（一）電鏡檢查起決定性作用（二）電鏡檢查起參考和修正作用（三）電鏡檢查起驗(yàn)正作用第13頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三三．電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用（一）電鏡檢查起決定性作用：電鏡發(fā)現(xiàn)特異性超微結(jié)構(gòu)信息做出最后病理診斷。例：男,39歲,發(fā)現(xiàn)右側(cè)頸部無痛腫物1年余,花生米大,取腫物做活檢。光鏡:增大的淋巴結(jié),結(jié)構(gòu)紊亂,但仍殘留濾泡與淋巴竇,竇腔及淋巴索充以大量胞質(zhì)豐富的嗜伊紅細(xì)胞,直徑約20μm。核圓,卵圓或扭曲狀。間有增生的淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞。電鏡:大細(xì)胞排列疏松、無連接、胞質(zhì)寬廣,見有似網(wǎng)球拍或柄的雙膜結(jié)構(gòu)(Birbeck顆粒),證明光鏡下嗜伊紅大細(xì)胞為朗格漢斯細(xì)胞(圖1)。診斷為淋巴結(jié)朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥。電鏡診斷具有獨(dú)特的確診價(jià)值。第14頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三圖1朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥:見雙模構(gòu)成的似網(wǎng)球拍狀的Birbeck顆粒。EM×10000注：圖片取自張瑞祥,齊潔敏,張潔茹等.235例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價(jià)值.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2002;15（5）第15頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三（二）電鏡檢查起參考和修正作用：電鏡獲得的信息對(duì)光鏡結(jié)果予以補(bǔ)充或修正,最終做出最后病理診斷。

例：男,因左頜下淋巴結(jié)腫大就診。經(jīng)淋巴結(jié)活檢,病理診斷為淋巴組織增生。不久頜下淋巴結(jié)又腫大,再次淋巴結(jié)(頜下)活檢病理診斷為惡性淋巴瘤(免疫母細(xì)胞型)。電鏡:瘤細(xì)胞大、多邊形或不規(guī)則形,核質(zhì)比大,核膜彎曲,不規(guī)則或奇特的內(nèi)陷,核常染色質(zhì)豐富,網(wǎng)欄狀大核仁。少許胞質(zhì)突,胞質(zhì)內(nèi)核糖體豐富,其他細(xì)胞器稀少。質(zhì)膜間見發(fā)育不良的橋粒樣連接(圖2)。最后病理診斷為頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌。隨后臨床發(fā)現(xiàn)鼻咽癌原發(fā)灶。此例電鏡有確診價(jià)值。第16頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三圖2

轉(zhuǎn)移癌:瘤細(xì)胞大、長圓形,胞核大、梭形,核膜不平滑,顯著增大的核質(zhì)比質(zhì)膜間有橋粒樣連接,胞質(zhì)含少許欠發(fā)達(dá)的細(xì)胞器,網(wǎng)欄狀大核仁,兩團(tuán)染色質(zhì)間顆粒。EM×10000注：圖片取自張瑞祥,齊潔敏,張潔茹等.235例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價(jià)值.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2002;15（5）第17頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三（三）電鏡檢查起驗(yàn)正作用：超微結(jié)構(gòu)信息進(jìn)一步證實(shí)、豐富了光鏡的組織學(xué)診斷

例：男,30歲,肝穿活檢。光鏡診斷:慢遷肝。雖未見典型碎屑樣壞死,但不除外活動(dòng)性變化。電鏡見肝細(xì)胞大,疏松,細(xì)胞周圍間隙加大,有微絨毛化,滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生,內(nèi)含管狀體,肝竇內(nèi)充塞膠原纖維。有的區(qū)域見部分肝細(xì)胞胞質(zhì)有胞溶,周圍有淋巴細(xì)胞浸潤。最后電鏡診斷:慢性遷延性乙型病毒性肝炎有輕微活動(dòng)(圖3)。電鏡有確診價(jià)值。第18頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三圖3

慢性遷延性乙型病毒性肝炎:滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生,腔內(nèi)含量多的乙肝表面抗原管狀體。EM×8000注：圖片取自張瑞祥,齊潔敏,張潔茹等.235例疑難病理標(biāo)本的電鏡診斷價(jià)值.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2002;15（5）第19頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三電子顯微鏡技術(shù)及在病理診斷上的作用一、電子顯微鏡技術(shù)二、診斷病理學(xué)三、電子顯微鏡技術(shù)在病理診斷上的作用四、討論第20頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三四、討論國內(nèi)外對(duì)電鏡診斷的價(jià)值,在腫瘤應(yīng)用方面報(bào)道較多,Gyorkey等65%。文獻(xiàn)中電鏡診斷價(jià)值的比率高低不同。主要原因是病例的選擇不太相同,使用標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)的方法也不同還有檢查者的光鏡診斷水平或側(cè)重點(diǎn)不同等因素也有關(guān)第21頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三應(yīng)用電鏡做最后病理診斷工作,有以下幾點(diǎn)注意：(1)由于電鏡費(fèi)用較高,制作程序繁雜,應(yīng)有選擇地送電鏡檢查。有的臨床醫(yī)師,認(rèn)為電鏡是優(yōu)于光鏡的先進(jìn)技術(shù)而盲目送檢,如胃鏡取胃黏膜活檢無選擇的送電鏡檢查,造成資源、人力和財(cái)力的浪費(fèi)。(2)電鏡標(biāo)本要求盡可能活體取材,立即投入預(yù)冷的固定液中固定,以利完好地保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。(3)涉及病原學(xué)診斷,特別是懷疑病毒、支原體、衣原體等微生物感染的標(biāo)本應(yīng)充分使用電鏡。(4)作為輔助手段應(yīng)用電鏡時(shí)應(yīng)做到:

第22頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三①在光鏡觀察基礎(chǔ)上有的放矢地做電鏡觀察

②半薄切片選區(qū)定位要求準(zhǔn)確③超微結(jié)構(gòu)觀察仍應(yīng)依次行組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)觀察,根據(jù)需要采取不同的放大倍率觀察

④樹立電鏡觀察是為獲得組織細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)病理信息的觀念,而不是代替光鏡診斷。第23頁，講稿共26頁，2023年5月2日，星期三因此,如同戰(zhàn)爭