正交實驗法優(yōu)選清熱利咽膠囊提取工藝

正交實驗法優(yōu)選清熱利咽膠囊提取工藝【摘要】目的考察清熱利咽膠囊水煎煮工藝條件。方法以加水量、煎煮時間和煎煮次數3個因素進行正交實驗,以沒食子酸含量和浸膏收率為評價指標綜合評分,確定清熱利咽膠囊的最佳提取工藝條件。結果清熱利咽膠囊的最佳提取工藝為：加10倍量水，煎煮3次，每次小時。結論清熱利咽膠囊提取工藝合理、可行。

【關鍵詞】清熱利咽膠囊；正交實驗；提??；沒食子酸；HPLC

【Abstract】ObjectiveToinvestigatethepreparationconditionsforQingreLiyanTheorthogonalexperimentwascarriedonwith3factors,waterquantity,thepreparationtimeandthedecoctionfrequeney,andcompositegradingweremeasuredbythegallicacidcontentandextractionratetodeterminebestpreparationconditionsforQingreLiyanThebestpreparationconditionsofQingreLiyancapsuleis:10timesofwaterquantity,3timesfordecoction,1hoursforeachThepreparationconditionsofQingreLiyancapsuleisreasonableandfeasible.

【Keywords】QingreLiyancapsule；orthogonalexperiment；preparation；gallicacid；HPLC

清熱利咽膠囊為臨床經驗方，由余甘子、桔梗、麥冬等藥物組成，具有清熱瀉火、生津利咽作用，主要用于口干咽燥，咽喉干癢疼痛等癥狀。根據處方中藥物性質，結合生產實際，采用水煎煮法進行提取。擬采用正交實驗方法，以沒食子酸含量和浸膏收率為評價指標進行綜合評分，優(yōu)選清熱利咽膠囊提取工藝?，F將研究結果報告如下。

1實驗材料、試劑和儀器

材料與試劑藥材購于成都市荷花池中藥材市場，經檢測符合《中國藥典》2005年版一部有關的規(guī)定。沒食子酸(批號110831200302，供含量測定)，中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

儀器島津LC10A高效液相色譜儀；賽多利斯BP211D電子天平。

2實驗方法與結果

實驗設計

根據處方中藥物主要有效成分的性質，選擇采用水煎煮提取，并對提取有較大影響的加水量、煎煮時間、煎煮次數三個因素進行考察，每個因素選擇3個水平，用(L9)正交表安排實驗。因素水平見表1.由于余甘子是君藥，沒食子酸是其中的主要有效成分之一，因此選擇沒食子酸為主要評價指標，浸膏收率作為輔助評價指標，采用綜合評分方法對提取條件進行評價。

實驗方法

稱取飲片9份，按正交設計方案，進行煎煮提取，濃縮定容至500ml，備用。表1實驗因素水平表

浸膏收率的測定［1］分別精密量取水煎液50ml于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴濃縮至干，置烘箱中105℃干燥3h，取出，置干燥器中冷卻30min，精密稱重，計算浸膏收率。

沒食子酸含量測定［2］①色譜條件：用18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈%磷酸為流動相；檢測波長為273nm；柱溫40℃；流速1ml/min；理論塔板數按沒食子酸峰計算不低于2500.②對照品溶液的制備：取沒食子酸對照品，精密稱定，加甲醇制成mg/ml的溶液作為對照品溶液。③供試溶液的制備：分別取正交實驗的藥液5ml于25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，振搖均勻，再精密吸取1ml于10ml量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。④缺余甘子陰性樣品的制備：稱取缺余甘子的處方量藥材，同上述方法制成余甘子陰性供試溶液。⑤標準曲線制備：取對照品溶液，分別精密吸取1、2、4、6、8、10ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別進樣10μl，按上述色譜條件測定峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行回歸，得線性方程Y=2011+9，r=9，結果表明，進樣量在～μg之間呈良好的線性關系。⑥測定：分別精密吸取正交實驗樣品溶液及對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定沒食子酸峰面積，計算含量。

實驗結果與分析

以食子酸的含量與浸膏收率為評價指標，沒食子酸的含量代表提取物中有效成分的含量，應作為工藝評價的主要指標，權重系數為；浸膏收率高低也在一定程度反映提取的效果，特別是大生產中具有意義，故權重系數為實驗結果與數據分析。

方差分析結果表明，各因素對提取的影響順序為：C＞A＞B，表明因素C和A影響較大，即加水量和煎煮次數對提取效果有顯著影響，最佳工藝為A3B3C3.由于煎煮時間對提取無顯著影響，結合生產實際，提取工藝條件調整為A3B2C3：即加10倍量水，煎煮3次，每次小時。表2正交實驗及實驗結果表3正交實驗方差分析

驗證實驗

根據篩選的工藝條件，做3份平行實驗進行驗證，結果浸膏收率為%、%、%；沒食子酸的含量為：mg/g、mg/g、mg/g.實驗結果可以看出，所篩選的工藝合理、穩(wěn)定，可行。

3小結與討論

采用多指標綜合評分方法，確定清熱利咽膠囊的提取工藝為：加10倍量水，煎煮3次，每次小時，提取工藝科學、穩(wěn)定、可行，具有生產可行性。

在本復方制劑中對沒食子酸的含量測定，曾采用甲醇水磷酸的不同比例作為流動相進行考察，但基線不穩(wěn)定，樣品分離度差。經過多次實驗，最后確定正文中所用的流動相，能很好地