優(yōu)質(zhì)課動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植(yízhí)、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等復(fù)習(xí)(fùxí)：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。第一頁，共二十三頁。編輯課件2003年４月７日下午，

12歲的四川簡陽少年小林放

學(xué)路上撿了些鞭炮，并把里

面的火藥抖出來，蹲在地上

將其點(diǎn)燃，導(dǎo)致面部、四肢

不幸被嚴(yán)重?zé)齻⒏腥?，?/p>

當(dāng)?shù)蒯t(yī)院治療半月后，于4月

22日轉(zhuǎn)入(zhuǎnrù)武警四川消防總隊(duì)

醫(yī)院燒傷整形科。為了挽救兒子的生命，小林的爸爸、媽媽向醫(yī)生懇求：“割我們的皮給兒子吧！”燒傷整形科主任魏平經(jīng)不起這份

親情的重托，最終“妥協(xié)”了：同意進(jìn)行這種國內(nèi)

極其罕見的親體皮膚移植手術(shù)。閱讀(yuèdú)資料兒子撿鞭炮嚴(yán)重?zé)齻腥?gǎnrǎn)，父割千塊皮膚第二頁，共二十三頁。編輯課件思考(sīkǎo)一下！1、小林在皮膚燒傷之后，很容易(róngyì)得病，為什么？2、皮膚在我們?nèi)梭w當(dāng)中是第幾道防線(fángxiàn)，其他幾道防線(fángxiàn)是什么？3、選取植皮時(shí)，理論上選擇誰的皮膚最好？為什么？4、自身的健康皮膚是有限的，能不能通過其他途徑獲得自身的皮膚？第三頁，共二十三頁。編輯課件一、動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)過程閱讀“動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)過程”并思考：1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？2、為什么要對取出的動(dòng)物組織(zǔzhī)進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？3、用胰蛋白酶對動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？6、簡述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程第四頁，共二十三頁。編輯課件一、動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)1、概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們(tāmen)分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。原理(yuánlǐ)：細(xì)胞增殖如何進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)?第五頁，共二十三頁。編輯課件胰蛋白酶(yídànbáiméi)或膠原蛋白酶.培養(yǎng)(péiyǎng)條件動(dòng)物(dòngwù)組織分散成

單個(gè)細(xì)胞制成細(xì)胞懸液培養(yǎng)胰蛋白酶膠原蛋白酶原理：細(xì)胞增殖（有絲分裂）結(jié)果：細(xì)胞群，細(xì)胞產(chǎn)物原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物胚胎細(xì)胞或幼齡動(dòng)物的器官組織剪碎第六頁，共二十三頁。編輯課件動(dòng)物細(xì)胞生長(shēngzhǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁：

懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸(jiēchù)時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸(jiēchù)抑制。

第七頁，共二十三頁。編輯課件接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)(cǐshí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。接觸抑制動(dòng)物細(xì)胞生長(shēngzhǎng)特性第八頁，共二十三頁。編輯課件原代培養(yǎng)：通常將直接從動(dòng)物體內(nèi)取出的動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的細(xì)胞(xìbāo)出現(xiàn)接觸抑制后，貼滿瓶壁的細(xì)胞(xìbāo)需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞(xìbāo)增殖。這樣即為傳代培養(yǎng)。第九頁，共二十三頁。編輯課件1、無菌、無毒消毒、滅菌抗生素定期更換培養(yǎng)液（清除代謝廢物）2、營養(yǎng)(yíngyǎng)合成培養(yǎng)基：糖、氨基酸、生長因子、無機(jī)鹽、微量元素

（血清、血漿）3、溫度和pH4、氣體95%空氣，5%CO2培養(yǎng)(péiyǎng)條件第十頁，共二十三頁。編輯課件.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(jìshù)的實(shí)際應(yīng)用1、大量生產(chǎn)細(xì)胞或產(chǎn)物。如：病毒疫苗干擾素

單克隆抗體胰島素2、給基因工程提供受體細(xì)胞。3、檢測(jiǎncè)有毒物質(zhì)及毒性。4、用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)。第十一頁，共二十三頁。編輯課件二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)(jìshù)和克隆動(dòng)物克隆(kèlónɡ)就是無性繁殖，具體地說，是指一個(gè)共同的祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子、細(xì)胞或個(gè)體。a.分子(fēnzǐ)水平上：b.細(xì)胞水平上：c.個(gè)體水平上：1.什么是克??？一般指DNA克隆。指一個(gè)單一的細(xì)胞分裂所形成的細(xì)胞群體。指基因型完全相同的兩個(gè)或一個(gè)群體。第十二頁，共二十三頁。編輯課件2、克隆(kèlónɡ)動(dòng)物能否用類似植物組織培養(yǎng)的方法獲得？為什么？目前(mùqián)不能。因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞的全能性隨著分化(fēnhuà)程度的提高逐漸受到限制。目前，用動(dòng)物體細(xì)胞克隆的動(dòng)物，實(shí)際上是通過核移植來實(shí)現(xiàn)的。

第十三頁，共二十三頁。編輯課件將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞(xìbāo)的＿＿＿，移入一個(gè)已經(jīng)去掉＿＿＿的＿＿細(xì)胞中，使其＿＿并發(fā)育成一個(gè)新的＿＿，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。分類

胚胎細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核移植細(xì)胞核細(xì)胞核卵母重組(zhònɡzǔ)胚胎(pēitāi)核移植技術(shù)第十四頁，共二十三頁。編輯課件電激處理使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎卵母細(xì)胞采集、培養(yǎng)MⅡ期卵母細(xì)胞供體牛供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞代孕母?？寺∨ｓw細(xì)胞培養(yǎng)去核卵母細(xì)胞去核胚胎(pēitāi)移植體細(xì)胞核移植過程(guòchéng)

（體細(xì)胞克隆動(dòng)物）第十五頁，共二十三頁。編輯課件體細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢(luǎncháo)卵母細(xì)胞（MⅡ中期：）去核去核的卵母細(xì)胞注入(zhùrù)重組(zhònɡzǔ)細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植將胚胎移入受體（代孕）母體生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢?？偨Y(jié)：體細(xì)胞核移植過程（供核）（供質(zhì)）據(jù)上圖思考下列問題：第十六頁，共二十三頁。編輯課件整個(gè)過程(guòchéng)用了哪些技術(shù)？細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植新生牛的性別、基因？與供體相同繁殖方式？無性繁殖原理？動(dòng)物細(xì)胞核的全能性體細(xì)胞核移植技術(shù)(jìshù)第十七頁，共二十三頁。編輯課件1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須(bìxū)先去掉受體卵母細(xì)胞的核？

為使核移植的胚胎或動(dòng)物的核遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用(lìyòng)價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?.實(shí)施細(xì)胞工程時(shí)，所需受體細(xì)胞大多采用(cǎiyòng)卵母細(xì)胞的原因？體積大，易操作。含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。第十八頁，共二十三頁。編輯課件3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物(dòngwù)，是對體細(xì)胞供體動(dòng)物(dòngwù)進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是的，因?yàn)椋孩倏寺?dòng)物絕大部分DNA來自(láizì)于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA,即線粒體中的DNA是來自(láizì)于受體卵母細(xì)胞。所以，用教材中所述的方法克隆的動(dòng)物不是供核動(dòng)物完全相同的復(fù)制。

②生物的性狀不僅(bùjǐn)與遺傳物質(zhì)有關(guān)，還受環(huán)境的影響。

4、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞第十九頁，共二十三頁。編輯課件①加速家畜遺傳(yíchuán)改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育②保護(hù)瀕危(bīnwēi)物種，增加存活數(shù)量③克隆動(dòng)物作為生物(shēngwù)反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白④可以作為異種移植的供體4、應(yīng)用前景：⑤可以用于組織器官的移植第二十頁，共二十三頁。編輯課件5.體細(xì)胞核移植技術(shù)(jìshù)的應(yīng)用前景第二十一頁，共二十三頁。編輯課件5、存在(cúnzài)問題：①成功率低②克隆動(dòng)物(dòngwù)存在健康問題③克隆動(dòng)物食品的安全性問題存有爭議第二十二頁，共二十三頁。編輯課件內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：?！睙齻慰浦魅挝浩?/p>