無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

文件名稱(chēng)無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)編制 審核 批準(zhǔn) 生效日期1.的無(wú)療輔種種。2范圍菌。3職責(zé)操本。4程序4.檢驗(yàn)依據(jù)范人和典錄Ⅺ無(wú)菌檢查法4器、設(shè)備立式壓力蒸汽滅菌器、數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、凈化工作臺(tái)、試管、量筒、酒精燈、燒杯、電磁爐、。4.3養(yǎng)基4.基種類(lèi)及培養(yǎng)條件）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 ～35培養(yǎng)。）改良馬丁培養(yǎng)基 ～28培養(yǎng)。注商購(gòu)脫水培養(yǎng)基的每一個(gè)批號(hào)做一次培養(yǎng)基的靈敏度檢查每次制備的培養(yǎng)基應(yīng)隨機(jī)取不少于支與供試品同時(shí)進(jìn)行無(wú)菌檢查。4.3.2基制備按商購(gòu)脫水培養(yǎng)基說(shuō)明配制，培養(yǎng)基的p值應(yīng)符合規(guī)定，否則必須校正。4.基及實(shí)驗(yàn)用具滅菌培養(yǎng)基分裝后放入立式壓力蒸汽滅菌器中滅菌（1±℃下滅菌30in實(shí)驗(yàn)用具根據(jù)需要采用高壓蒸汽滅菌（1±℃下滅菌30干燥箱滅菌（1下滅菌120in4.4種金黃色葡萄球菌(StaphylococcusCaureus)003銅綠假單胞菌(Pseudomonas〔CMCC(B)〕10)104草孢菌（Bacillusilis501生孢梭菌(Clostridiu〔CMCC(B)〕64s941白色念珠菌(Candida〕98001黑曲霉(Aspergil〔CMCC(F)〕980034液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中30～35培養(yǎng)時(shí)～1文件名稱(chēng)無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)編制 審核 批準(zhǔn) 生效日期2小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，2～2℃培養(yǎng)4小時(shí)，上述培養(yǎng)物用0.9%氯化鈉溶液制成每1菌數(shù)小于100cfu形成單位）的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上232℃培養(yǎng)5天，加入～5ml0v聚山梨酯800氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05v聚山梨酯800氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)小于100懸液。液放在小時(shí)內(nèi)使用，若保存在～℃可在時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液保存在～℃，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。4釋液、沖洗液及其制備方法4.6.1蛋0.1%液取蛋白胨1水1000ml溶解，濾清，調(diào)節(jié)p值至702，。4.6.2白胨緩沖液取磷酸二氫鉀3.酸氫二鈉7.23g鈉4.白胨1水1000ml溶解，濾清，分裝，滅菌。根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。如需要，可在上或滅性。4法驗(yàn)證試驗(yàn)當(dāng)建立產(chǎn)品的無(wú)菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢的發(fā)應(yīng)。。菌種及菌液制備除大腸埃希菌（EscherichiaMcoli〕，萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金色萄菌。薄過(guò)濾法洗加于100cfu菌，過(guò)濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為對(duì)照。置規(guī)定度培養(yǎng)～天，各試驗(yàn)菌同法操作。直接接種法取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8管，分別接入小于1金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各管，取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的改良馬丁培養(yǎng)基管，分別接入小于100念珠菌、黑曲霉各管。其中1每規(guī)品另管作為對(duì)照，按置規(guī)定的溫度培養(yǎng)～天。果斷驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，可采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換法菌法。2文件名稱(chēng)無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)編制 審核 批準(zhǔn) 生效日期方法驗(yàn)證試無(wú)。4試品的無(wú)菌檢查4.8.1數(shù)量量驗(yàn)小數(shù)另定按表規(guī)定；上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)按表、表規(guī)定。表、表2表中最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的供菌加1最小檢驗(yàn)數(shù)量作陽(yáng)性對(duì)若接加品支（或瓶）作陽(yáng)性對(duì)照用。4.8.2量是指一次試驗(yàn)所用的供試品總（或m除另有規(guī)定外每份培養(yǎng)基接種的供試品量按表、表規(guī)定。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基。采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于直接接種法的總接種量，只要供試品特性允許的。4.8.3對(duì)照應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌：無(wú)抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對(duì)照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭，加量小于10品用量同供試品無(wú)菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)87小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好。4.8.4對(duì)照供試品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有生長(zhǎng)。無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對(duì)微生物毒性。無(wú)菌檢查法包括薄膜過(guò)濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。供試品所法與同。，可用適宜的無(wú)菌器材（如帶有除菌過(guò)濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無(wú)菌空氣，再按無(wú)菌操作起開(kāi)容器內(nèi)。4.品處理及接種培養(yǎng)基定行。4.8.5.1濾法薄膜過(guò)濾法應(yīng)優(yōu)先采用封閉式薄膜過(guò)濾器，也可使用一般薄膜過(guò)濾器。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑不于0μ5直徑約為5據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前完。3文件名稱(chēng)無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)編制 審核 批準(zhǔn) 生效日期水溶性供試液過(guò)濾前先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml洗量不得超過(guò)10免濾膜上的微生物受損傷。水溶液供試品 取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含適量稀釋液的無(wú)菌容器內(nèi)，混勻，立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的，將100ml醇酸鹽流應(yīng)分成等，別于含5醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基容器中，其中一份做陽(yáng)性對(duì)照用。可溶于水的固體制劑供試品 取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶，然后照水試法。β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素供試品取規(guī)定量，按水溶液或固體制劑供試品的處理方法處理，立即過(guò)濾，用適宜的沖洗液沖洗濾膜。再用含適量.內(nèi)酰胺酶的沖洗液清除殘留在濾筒、濾膜上的抗生素后接種培養(yǎng)基，必要時(shí)培養(yǎng)基中可加少量的.內(nèi)酰胺酶；或?qū)V膜直接接種至含適量.內(nèi)酰胺酶的中基品操。溶劑品 取定量直接濾含酯其他適宜乳化劑的含0～1聚山梨酯8的沖洗液沖洗濾膜至少次。濾膜于含不聚梨酯培養(yǎng)基中培養(yǎng)。接種培養(yǎng)基照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。性品酯過(guò)，趁熱迅速過(guò)濾。濾適丙不于10l釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作為供試液過(guò)濾。過(guò)濾后濾膜沖洗及接種培養(yǎng)基照非水溶劑項(xiàng)法。品取規(guī)定量，將各容器置至少－2℃的冰室冷凍約小時(shí)。以無(wú)菌操作迅速在容器上端鉆一小孔，釋放拋射劑后再無(wú)菌開(kāi)啟容器，并將供試液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中，然后水下。器中的內(nèi)容物，若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解，直接過(guò)濾，或混合至含適量稀釋液的無(wú)，然品。用裝針。具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具輸血、輸液袋等供試品取規(guī)定量，每個(gè)最小包裝用5～10液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接帶。注：①無(wú)菌十四烷酸異丙酯的制備采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾除菌為0μ的脂溶性濾膜，在1干熱滅菌小時(shí)。4文件名稱(chēng)無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)編制 審核 批準(zhǔn) 生效日期4.8.5.2種法直接接種法即取規(guī)定量供試品分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器的10%同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于1良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于1養(yǎng)和驗(yàn)?；鞈乙旱确浅吻逅芤汗┰嚻?取規(guī)定量，接種至各管培養(yǎng)基中。固體制劑供試品取規(guī)定量直接接種至各管培養(yǎng)基中?；蚣尤脒m宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后，取規(guī)定量接種至各管培基。菌的品 管入中。溶劑品 取規(guī)定量混合酯其它適宜的乳化劑及稀釋其接或至梨酯其它適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。敷供試品 取規(guī)定同約10或m1cmcm的供試品，接種于足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。腸線(xiàn)、縫合線(xiàn)等供試品 ，包管品中。滅菌醫(yī)用器具供試品 取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段，接種于足以浸沒(méi)供試品養(yǎng)。放性藥品 品瓶支，接種于裝量為7.養(yǎng)基中。每管接種量為0.2ml4.8.6及觀(guān)察容養(yǎng)培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀(guān)察并記錄是否有菌生長(zhǎng)如在養(yǎng)后，不能從外觀(guān)上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)養(yǎng)天、真菌培養(yǎng)天，觀(guān)察接種的同種否。4.8.7判斷生管，。若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物所少判：⑴。⑵。⑶技不引的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品不。5文件名稱(chēng)無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)編制 審核 批準(zhǔn) 生效日期5.件及附錄表量品 量（個(gè)） 接種每種培養(yǎng)基所需的最少檢驗(yàn)數(shù)量注射劑≤10010＜N≤500

10或個(gè)（取較多者）1個(gè)大體積注射劑（＞100ml品

＞500 2或2或

（取較少者）1個(gè)（取較少者）≤200＞200桶裝無(wú)菌固體原料

5或個(gè)（取較多者）1個(gè)≤4 每個(gè)容器＜≤50 2%個(gè)容器（取較多者）＞50 2或1個(gè)容器（取較多者）（≥克） 個(gè)容器具≤10010＜N≤500

10或件（取較多者）1件＞500 2或（取較少者）。表2.體制劑最少檢驗(yàn)量及上市抽驗(yàn)樣品的最少檢驗(yàn)數(shù)量量（ml≤1

每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量全量

供試品最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）01＜＜5 半量 10≤＜20 2ml 102≤＜50 5ml 105≤＜100 10ml 105≤＜10脈給藥) 半量 1010≤≤500 半量 6＞500 500ml 6注：①若供試品每個(gè)容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的最少檢驗(yàn)數(shù)量加倍。表量量 支或瓶/ 每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量 供試品最少檢驗(yàn)數(shù)量瓶或支)M<50mg 全量 050M<300mg300M<5g

半量 10150mg 10≥5g 500mg 0外科用