細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告計(jì)劃

動(dòng)物細(xì)胞培育1、掌無(wú)操作術(shù)。2、掌原和傳細(xì)胞育。3、掌細(xì)冷凍復(fù)蘇術(shù)。4、認(rèn)培成纖細(xì)胞形態(tài)。將動(dòng)物體的織從體拿出經(jīng)各酶（用胰白）、螯合（常用EDTA）或機(jī)械方法辦理，分別成單細(xì)胞，置適合的培育基中培育，使細(xì)胞得以生計(jì)、生長(zhǎng)和生殖，這一過(guò)程稱(chēng)原代培育。細(xì)胞在培育瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能持續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)目擴(kuò)大，就一定進(jìn)行傳代（再培育）。傳代培育也是一種將細(xì)胞種保留下去的方法。同時(shí)也是利用培育細(xì)胞進(jìn)行各樣實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就能夠，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。對(duì)擁有挪動(dòng)特征的穩(wěn)固細(xì)胞系或細(xì)胞株進(jìn)行長(zhǎng)久保留，一方面能夠作為細(xì)胞研究的試驗(yàn)資料，另一方面能夠做細(xì)胞制品的生產(chǎn)資料。當(dāng)前寬泛應(yīng)用的細(xì)胞保留方法是低溫冷凍保留法，。細(xì)胞的冷凍保留的原則是慢凍快融，這樣做是為了防備細(xì)胞因?yàn)槔鋬鲞^(guò)程中產(chǎn)生了冰晶而發(fā)生細(xì)胞破碎。三、實(shí)驗(yàn)器械及藥品。器械：懷胎的小白鼠、培育箱、培育瓶、培育皿、移液器、眼科剪、鑷子、酒精燈、離心計(jì)、水浴鍋、倒置顯微鏡、

CO培育箱、超凈工作臺(tái)、離心管、2高壓滅菌鍋、試管架等。藥：血、DMEM合成培育基、抗DMSO冷劑、、S緩液等。。1、毒菌。將實(shí)所用的具槍、育、科、子及個(gè)的驗(yàn)服等集滅、干制75%的酒精以備實(shí)驗(yàn)時(shí)所需。1/32、培育基的配制。分別取10ml的小牛血清、90ml的DMEM合成培育基，將兩種培育基混淆在一同，再向此中加入1ml的抗生素，吹打混勻就獲得了細(xì)胞培育的培育液。3、原代培育。（1）、準(zhǔn)備。將實(shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)用到的工具以及藥品所有放在超凈工作臺(tái)長(zhǎng)進(jìn)行紫外消毒滅菌。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前帶好乳膠手套，用酒精敵手進(jìn)行消毒。將懷胎的小白鼠放在酒精中殺死，拿出子宮內(nèi)的胚胎組織。（2）、剪切與消化。將胚胎組織放于平板中，用眼科剪將組織塊剪碎，剪得越碎越好。將剪碎的組織塊放于離心管中，加入大概200μl的胰酶進(jìn)行消化?？蓪⑵渲糜?度恒溫箱中進(jìn)行消化。（3）、分別細(xì)胞。消化到一準(zhǔn)時(shí)間時(shí)，假如離心管中的溶液中出現(xiàn)了顯然的污濁，可用吸管吸出少量消化液在鏡下察看，如組織已分別成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，則應(yīng)當(dāng)加入與胰酶等量的培育液停止消化。離心管于離心計(jì)中離心，棄上清液，獲得分別的細(xì)胞。（4）、轉(zhuǎn)移細(xì)胞并培。向含有別細(xì)管制好培液，吹打，育移到培中℃溫O箱培育，瓶口少少擰2的松一點(diǎn)。4、傳代培育。（1）、倒置顯微鏡下察看細(xì)胞的形態(tài)。倒置顯微鏡下察看培育細(xì)胞的長(zhǎng)勢(shì)及密度，依據(jù)細(xì)胞密度決定傳代的稀釋倍數(shù)。（2）、采集原代培育的細(xì)胞。吸出培育瓶中的舊培育液，并用PBS沖刷兩遍。而后向培育瓶中加入200μl的胰酶進(jìn)行化。消化一段時(shí)間用配置好的培育等比率停止消化。而后離心，集到原代培育的細(xì)。（3）、傳代細(xì)胞的培育。向離心管內(nèi)加入大概7—8ml的培育液，吹打混勻。將培育液轉(zhuǎn)移到培育瓶中，置于37

恒溫O培箱中育培育2

1—2天于顯鏡下看胞的態(tài)。5、胞冷保留。（1）、采細(xì)胞吸培育瓶中的培液，用PBS沖刷兩遍。而后向培育瓶中加入200μl的酶進(jìn)行消化。消化段時(shí)間后用配置好培育液等比率停止2/3消化。而后離心，采集細(xì)胞。（2）、冷凍。向離心管中加入必定量的培育液以及10%—20%的DMSO冷凍液，吹打混勻并轉(zhuǎn)移到冷凍管中。先將冷凍管在4度冰箱中置n70度的冰箱中冷凍留宿。（3）、復(fù)蘇。將冷凍的細(xì)胞拿出來(lái)后，馬上放在40度水浴中，使其迅速消融。并對(duì)消融的細(xì)胞進(jìn)前進(jìn)一步的察看。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。傳代第一次換液原代第一次的細(xì)胞原代第四天的細(xì)胞冷凍復(fù)蘇的細(xì)胞六、實(shí)驗(yàn)剖析與從本次實(shí)驗(yàn)的圖片能夠看出來(lái)，實(shí)驗(yàn)做得還算成功，細(xì)胞基本上沒(méi)有被污染。在做的過(guò)程中必定要特別注意無(wú)菌操作，這是決定試驗(yàn)成功的重點(diǎn)要素。在做原代培育的時(shí)候，必定要將小鼠胚胎