AB7500熒光定量PCR儀使用、維護(hù)、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

SOP040061SOP040061/29文件名稱：文件名稱：AB7500熒光定量PCR儀使用、維護(hù)、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件名稱文件名稱AB7500熒光定量PCR儀使用、維護(hù)、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程頒發(fā)部門制訂人：復(fù)核人：批準(zhǔn)人：質(zhì)保部制訂日期：復(fù)核日期：批準(zhǔn)日期：執(zhí)行日期版本1.0編號(hào)SOP04006制作份數(shù) 份發(fā)送部門修訂人修訂緣由修訂內(nèi)容版本修訂日期修訂記錄目的：確保熒光定量PCR儀能夠正確和正常的使用，保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、標(biāo)準(zhǔn)化。范圍：適用于AB7500熒光定量PCR儀的使用及維護(hù)。定義：無(wú)職責(zé)：熒光定量PCR儀使用人員負(fù)責(zé)本規(guī)程的實(shí)施。質(zhì)保部對(duì)本規(guī)定的有效執(zhí)行擔(dān)當(dāng)監(jiān)視檢查責(zé)任。內(nèi)容：5.115～3045～75%。儀器操作依次翻開電腦顯示器和電腦主機(jī)的電源開關(guān)，進(jìn)入Windows界面。接著翻開AB7500儀器電源開關(guān)，預(yù)熱10分鐘。7500Softwarev2.3圖標(biāo)，翻開軟件。8PCR96PCR反響8聯(lián)PCR反響管用**96孔PCR反響板用**〔8PCR8PCR反響管配平，檢測(cè)96PCR反響板無(wú)需配平〕再次按壓托盤使其滑入儀器。5.2.6建擴(kuò)增參數(shù)模板：例如建一個(gè)UG-63-62的模板，擴(kuò)增參數(shù)是95，95，；63，5cycle〔956240cycle62HEFAM信號(hào)，20μl反響體系。在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamplesTargetName下的Target1改成FAM；點(diǎn)擊AddNewTargetTarget1改成HEX，點(diǎn)擊Reportee下拉菜單，選擇VIC。在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell20〔20μl反響體系HoldingStageDeleteSelectedCyclingStage中的NumberofCyclesStep110Step26345秒，63度下面收集熒光圖標(biāo)點(diǎn)掉；點(diǎn)擊AddStage下拉菜單項(xiàng)選擇擇Cycling，在CyclingStage中NumberofCycles40，在Step110秒，在Step262度，輸3562度下面點(diǎn)擊圖標(biāo)收集熒光。點(diǎn)擊Save下拉菜單下的SaveAsTamplate，文件名輸入U(xiǎn)G-63-62，保存在默認(rèn)ab7500-config-tamplates文件夾內(nèi)，關(guān)閉設(shè)置界面。Home界面中點(diǎn)擊Template，選擇需要的模板，點(diǎn)擊翻開。例如：UG-63-695〔95″635cycle〔9562〕40cycle，在62時(shí)收集熒光信號(hào)HEFAM信號(hào)ReactionVolumePerWel〔反響體系。在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples8Sample1；UGT1A1*6勾選HEX，UGT1A1*28勾選FAM。Run-AmplificationPlotSTARTRUN20230101-1〔當(dāng)日日期+當(dāng)日上機(jī)次數(shù)，例:2023年1月1日第1次上機(jī)編號(hào)為20230101-，保存在默認(rèn)文件夾中，開頭運(yùn)行。結(jié)果分析PCR反響完畢后自動(dòng)保存結(jié)果，對(duì)擴(kuò)增曲線進(jìn)展分析。也可依據(jù)分析后圖像調(diào)整Baseline的StartEnd〔值可以在～1End值可設(shè)在520Threshold值R〕推舉設(shè)定為500～1500，點(diǎn)Analyze進(jìn)展分析，然后到Plate窗口下記錄每個(gè)反響的Ct值。〔切勿翻開管蓋AB7500PCR儀器維護(hù)每周維護(hù)檢查計(jì)算機(jī)磁盤空間。如需要，將試驗(yàn)文件歸檔或備份。至少每周檢查一次計(jì)算機(jī)磁盤空間。假設(shè)硬盤的可用空間缺乏其總?cè)萘康?0%，應(yīng)將較陳舊的數(shù)據(jù)傳輸?shù)絺浞荽鎯?chǔ)設(shè)備上保存。5.3.1.2假設(shè)硬盤的可用空間缺乏其總?cè)萘康?0%，應(yīng)將較陳舊的數(shù)據(jù)傳輸?shù)絺浞荽鎯?chǔ)設(shè)備上保存。5.3.1.27500Instrument的計(jì)算機(jī)，30秒后再次開啟計(jì)算機(jī)。5.3.1.3用無(wú)絨布?jí)K〔不脫毛〕75%7500Instrument〔注：切勿使用有機(jī)溶劑清7500Instrument〕5.3.1.475%酒精浸泡反響管托架〔晾干后放回儀器內(nèi)。每月維護(hù)〔可執(zhí)行一次背景校準(zhǔn)以檢查是否存在污染物〕運(yùn)行磁盤清理和磁盤碎片整理。至少每月一次。當(dāng)Windows?操作系統(tǒng)顯示消息提示執(zhí)行碎片整理時(shí)。7500Real-TimePCRSoftware。5.3.3當(dāng)Windows?操作系統(tǒng)顯示消息提示執(zhí)行碎片整理時(shí)。7500Real-TimePCRSoftware。5.3.3每半年〔6個(gè)月〕維護(hù)5.3.3.1檢查燈具狀態(tài)。7500Software中，選擇Instrument→LampStatus/Replacement以確定鹵素?zé)舻臓顟B(tài)。LampStatus/Replacement對(duì)話框：Condition–表示以下其中一種狀況：Good–燈具工作良好，不需要更換。單擊Close。–Failed–必需更換燈具。單擊Close5.3.4.3步驟更換鹵素?zé)?。–ChangeSoon2023小時(shí)；生產(chǎn)商建議將其更換。單擊Close，然后決定是否更換燈具。假設(shè)打算更換，請(qǐng)依據(jù)5.3.4.3步驟更換鹵素?zé)?。Usage(Hours)–燈具已照明的總小時(shí)數(shù)。LampCurrent–燈具的輸出電流，以安培為單位(A)。低電流意味著燈具可能將要失效。DateLastReplaced–上次更換燈具的日期。②在執(zhí)行一次運(yùn)行之前或期間，②在執(zhí)行一次運(yùn)行之前或期間，7500Software可能顯示以下警告：消息消息描述WarningCannotdetectsufficientcurrentfrom lamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyor 依據(jù)5.3.4.3步驟更換鹵素?zé)艟咧?，無(wú)法繼needstobereplaced.續(xù)該運(yùn)行。WarningCannotdetectsufficientcurrentfrom 7500Software停頓了該次運(yùn)行，由于在運(yùn)行l(wèi)amp.Eitherlampisnotinstalledproperlyor 中燈具電流下降到可承受水平之下。在依據(jù)needstobereplaced.5.3.4.3步驟更換鹵素?zé)艟咧?，無(wú)法連續(xù)該運(yùn)行。在消息框中單擊OK，檢查儀器日志，然后更換燈具。Warning-Thelampusagehasexceeded20232023小時(shí)。hr.Werecommendreplacingthelampsoonto 單擊CancelRun，然后更換燈具，或者單擊ensureoptimalassayperformance.ContinueRun。重運(yùn)行ROI、背景、光學(xué)和染料校準(zhǔn)。5.3.3.25.3.3.2執(zhí)行目標(biāo)區(qū)〔ROI〕校正。5.3.3.35.3.3.3執(zhí)行背景校準(zhǔn)。執(zhí)行光學(xué)校準(zhǔn)。執(zhí)行染料校準(zhǔn)。執(zhí)行RNaseP儀器驗(yàn)證試驗(yàn)。其它維護(hù)任務(wù)〔需要時(shí)執(zhí)行〕樣本塊污染去除。SOP040065SOP040065/29文件名稱：AB7500文件名稱：AB7500熒光定量PCR儀使用、維護(hù)、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程7500Instrument執(zhí)行以下程序，去除7500Instrument7500Instrument問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系生產(chǎn)商效勞代表。①全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。②找到樣本塊中受污染的反響孔〔參閱問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系生產(chǎn)商效勞代表。①全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。②找到樣本塊中受污染的反響孔〔參閱5.4.2.13。7500Real-TimePCRInstrument中取出反響板和托盤支架。按壓托盤門，將其翻開。b.取出反響板和托盤支架。c.關(guān)閉托盤門。以確定角度向托盤右側(cè)施加壓力。④手動(dòng)降低樣本塊：7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManager的ROI選項(xiàng)卡中，單擊StartManualCalibration。c.ROIc.ROIInspector對(duì)話框中，單擊MoveBlock。d.ROIInspector對(duì)話框顯示“BlockDown”時(shí)，單擊Done。7500Real-TimePCRInstrument，然后拔下其電源電纜。允許儀器冷卻15分鐘。7500Real-TimePCRInstrument的檢查門。a.將薄型螺絲刀插入檢查門邊緣處的鍵銷孔內(nèi)，然后推動(dòng)以解開門栓。翻開儀器前門。⑦抬起門栓，然后將受熱的護(hù)蓋門推到儀器的反面。⑧使用少量的雙蒸水，清潔樣本塊中被污染的反響孔：a.用移液管吸取少量雙蒸水并滴入每個(gè)受污染的反響孔中。⑧使用少量的雙蒸水，清潔樣本塊中被污染的反響孔：a.用移液管吸取少量雙蒸水并滴入每個(gè)受污染的反響孔中。b.抽吸并滴入反響孔中的雙蒸水?dāng)?shù)次，以沖洗反響孔。將用過(guò)的雙蒸水水吸入廢液瓶中。使用棉花拭子，擦試每個(gè)被污染的反響孔的內(nèi)壁。e.使用無(wú)絨布料，吸出剩余的雙蒸水。⑨⑨7500Real-TimePCRInstrument將受熱的護(hù)蓋門拉到儀器的正面。抬起門栓，然后將受熱的護(hù)蓋門緊固到穿插桿。SOP0400610SOP0400610/29文件名稱：文件名稱：AB7500熒光定量PCR儀使用、維護(hù)、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程7500Real-TimePCRInstrument的檢查門。?插上電源插頭并開啟7500Instrument。?通過(guò)執(zhí)行背景校準(zhǔn)運(yùn)行確認(rèn)已消退污染〔參閱5.4.2“背景校準(zhǔn)。?95?95a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每個(gè)受污染的反響孔中。b.抽吸并滴入反響孔中的溶液數(shù)次，以沖洗反響孔。c.將用過(guò)的乙醇溶液吸入廢液瓶中。重要！使用漂白劑溶液或乙醇溶液清潔反響孔之后，應(yīng)始終使用雙蒸水沖洗反響孔。?重復(fù)步驟⑧至?，以沖洗樣本塊的反響孔，并驗(yàn)證已去除掉污染物。?10%漂白劑溶液清潔樣本塊中受污染的反響孔：用移液管吸取少量10%漂白劑溶液并滴入每個(gè)受污染的反響孔中。抽吸并滴入反響孔中的溶液數(shù)次，以沖洗反響孔。c.將用過(guò)的漂白劑溶液吸入廢液瓶中。重要！使用漂白劑溶液或乙醇溶液清潔反響孔之后，應(yīng)始終使用去離子水沖洗反響孔。?重復(fù)步驟⑧至c.將用過(guò)的漂白劑溶液吸入廢液瓶中。重要！使用漂白劑溶液或乙醇溶液清潔反響孔之后，應(yīng)始終使用去離子水沖洗反響孔。?重復(fù)步驟⑧至?，以沖洗樣本塊的反響孔，并驗(yàn)證已去除掉污染物。假設(shè)仍有污染，請(qǐng)與生產(chǎn)商技術(shù)支持聯(lián)系。?確保受熱蓋門完全關(guān)閉并上閂。假設(shè)沒(méi)有，則7500Software顯示錯(cuò)誤消息。移動(dòng)PCR〔ROI染料校準(zhǔn)以及RNaseP〕更換鹵素?zé)簟＂偃檀魃弦淮涡詿o(wú)粉手套操作。7500Instrument，然后拔下其電源電纜。允許儀器冷卻15分鐘。a.留意！灼熱。7500Instrumenta.留意！灼熱。7500Instrument和燈具灼熱！燈具在使用中會(huì)變得格外灼熱。在處理燈具之15分鐘，并戴上無(wú)粉防護(hù)手套。b.重要！為避開灼傷及縮短燈具的使用壽命，處理燈具時(shí)請(qǐng)戴上一次性無(wú)粉手套。c.留意！7500Instrument12V、75W的鹵素?zé)簟?500Instrument的檢查門。將薄型螺絲刀插入檢查門邊緣處的鍵銷孔內(nèi)，然后推動(dòng)以解開門栓。b.翻開儀器前門。④從儀器中取出燈具：向下滑動(dòng)燈具釋放桿。用手緊緊地抓住鹵素?zé)舨⑾蛏咸?，使燈具從安裝槽口中脫出。aab⑤查看燈具并確定有無(wú)故障跡象〔有故障的燈具內(nèi)壁上通常有碳黑層。⑥將燈具安裝至儀器上：a.向上滑動(dòng)燈具釋放桿。b.a.向上滑動(dòng)燈具釋放桿。b.用手緊緊地握住燈具，將燈具放入帶槽口的安裝座內(nèi)，然后留神地向下滑動(dòng)燈具，使其到位。⑦關(guān)閉儀器前門。⑦關(guān)閉儀器前門。⑧插上電源插頭并開啟7500Instrument。⑨翻開ROIInspector對(duì)話框：a.在7500a.在7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。b.InstrumentMaintenanceManager的ROI選項(xiàng)卡中，單擊StartManualCalibration。⑩在ROIInspector對(duì)話框中，選擇LampControl→Idle。?當(dāng)儀器運(yùn)行時(shí)，通過(guò)檢查門上的縫隙觀看，確保燈具發(fā)光，然后單擊Done。?假設(shè)燈具發(fā)光，在7500?假設(shè)燈具發(fā)光，在7500Software中選擇Instrument→LampStatus/Replacement，單擊ResetLampTimer，然后單擊OK。假設(shè)燈具不發(fā)光，則替換的鹵素?zé)艨赡苡腥毕?。重更換燈具。假設(shè)再次更換燈具后仍不發(fā)光，檢查儀器的保險(xiǎn)絲是否存在故障〔參閱第71頁(yè)。?更換燈具后，按挨次執(zhí)行以下校準(zhǔn)。請(qǐng)參閱：5.4.1目標(biāo)區(qū)〔ROI〕校準(zhǔn)5.4.2背景校準(zhǔn)5.4.3光學(xué)校準(zhǔn)5.4.4染料校準(zhǔn)5.4.5驗(yàn)證儀器性能5.3.4.475005.3.4.47500Instrument保險(xiǎn)絲。①保險(xiǎn)絲損壞時(shí)，更換7500Real-TimePCRInstrument〔留意！為在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)防止火災(zāi)，更換保險(xiǎn)絲時(shí)請(qǐng)使用類型和額定值與儀器原始保險(xiǎn)絲一樣的經(jīng)認(rèn)可的保險(xiǎn)絲〕②全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。③關(guān)閉儀器電源，并拔下電源插頭。④使用平口螺絲刀從儀器上旋松并卸下保險(xiǎn)絲座。⑤將每一個(gè)保險(xiǎn)絲從其保險(xiǎn)絲座中取出，然后檢查是否損壞。損壞的保險(xiǎn)絲內(nèi)部通常有炭黑掩蓋。注：電壓和電流額定值見保險(xiǎn)絲座。⑦安裝保險(xiǎn)絲座。⑧插上電源插頭，然后開啟儀器。假設(shè)儀器接通了電源，說(shuō)明保險(xiǎn)絲已安裝成功。注：保險(xiǎn)絲損壞可能是由儀器供電電源波動(dòng)導(dǎo)致。為了防止連續(xù)消滅故障，可以考慮安裝電氣保護(hù)設(shè)備，例如⑧插上電源插頭，然后開啟儀器。假設(shè)儀器接通了電源，說(shuō)明保險(xiǎn)絲已安裝成功。注：保險(xiǎn)絲損壞可能是由儀器供電電源波動(dòng)導(dǎo)致。為了防止連續(xù)消滅故障，可以考慮安裝電氣保護(hù)設(shè)備，例如UPS或其他電涌保護(hù)器。更Windows?操作系統(tǒng)。7500Software。監(jiān)控儀器狀態(tài)〔使用FunctionTest對(duì)話框?qū)χ饕?500Instrument組件執(zhí)行高級(jí)診斷。一般情況下不需要執(zhí)行功能測(cè)試，除非疑心有硬件故障，或者LifeTechnologies〕7500Software中，選擇Instrument→Function-Test。②依據(jù)需要執(zhí)行功能測(cè)試。要測(cè)試：②依據(jù)需要執(zhí)行功能測(cè)試。要測(cè)試：全部組件–單擊All全部組件–單擊AllTests，然后等候軟件執(zhí)行全部功能測(cè)試。一個(gè)或多個(gè)特定組件–單擊以下其中一項(xiàng)或多項(xiàng)。一個(gè)或多個(gè)特定組件–單擊以下其中一項(xiàng)或多項(xiàng)。USB–測(cè)試7500Real-TimePCRInstrument和計(jì)算機(jī)之間的通用串行總線(USB)連接。USB–測(cè)試7500Real-TimePCRInstrument和計(jì)算機(jī)之間的通用串行總線(USB)連接。7500Software7500Real-TimePCRInstrumentCCD7500Real-TimePCRInstrument內(nèi)的CCD攝像機(jī)。假設(shè)攝像機(jī)能夠拍攝圖像，則表示測(cè)試通過(guò)。FilterWheel7500Real-TimePCRInstrument內(nèi)的過(guò)濾輪。假設(shè)過(guò)濾輪把握器運(yùn)行正確版本的固件，則表示測(cè)試通過(guò)。Shutter7500Real-TimePCRInstrument的光學(xué)快門。假設(shè)快門把握器運(yùn)行正確版本的固件，則表示測(cè)試通過(guò)。Lamp7500Real-TimePCRInstrument的固件，則表示測(cè)試通過(guò)。ThermalCycler7500Real-TimePCRInstrument內(nèi)的熱循環(huán)儀樣本塊。假設(shè)熱循環(huán)儀的把握器運(yùn)行正確版本的固件，則表示測(cè)試通過(guò)。當(dāng)7500Software完成一項(xiàng)測(cè)試時(shí)，軟件報(bào)告該測(cè)試的通過(guò)/失敗狀態(tài)，并供給結(jié)果描述。③完畢測(cè)試時(shí)，單擊Close。儀器校準(zhǔn)目標(biāo)區(qū)〔ROI〕校準(zhǔn)5.4.1.1全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。5.4.1.25.4.1.1全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。5.4.1.2從貯存在冷凍柜內(nèi)的光譜校準(zhǔn)套件中取出ROI校準(zhǔn)反響板。5.4.1.3讓ROI校準(zhǔn)反響板溫度上升至室內(nèi)溫度〔約需5分鐘。在馬上運(yùn)行反響板之前，不要從包裝袋內(nèi)取出ROI校準(zhǔn)反響板。反響孔中的熒光染料具有光敏感特性。長(zhǎng)時(shí)間曝光可降低染料在反響板中的熒光。從包裝袋中取出ROI校準(zhǔn)反響板。將光學(xué)薄膜留在反響板上。不要丟棄存放ROI校準(zhǔn)反響板的包裝袋。假設(shè)貯存于原始包袋中，反響板最多可重復(fù)使用三次。振蕩ROI5秒鐘。2分鐘。ROI校準(zhǔn)反響板必需充分混合并離心。5.4.1.7確認(rèn)ROI5.4.1.7確認(rèn)ROI校準(zhǔn)反響板每個(gè)反響孔中的液體均位于反響孔底部。假設(shè)不是，則以更高的轉(zhuǎn)速及更長(zhǎng)的時(shí)間離心反響板。5.4.1.8〔裝入標(biāo)準(zhǔn)反響板，使A12凹口位置位于托盤的右上角〕5.4.1.9以確定角度向托盤右側(cè)施加壓力，從而關(guān)閉托盤門。5.4.1.10執(zhí)行自動(dòng)ROI校準(zhǔn)7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManagerROI選項(xiàng)卡中，單擊StartCalibration。③依據(jù)向?qū)У闹甘?，完成校?zhǔn)。ROICalibration對(duì)話框顯示三個(gè)選項(xiàng)卡：Setup–顯示ROI校準(zhǔn)設(shè)置說(shuō)明。單擊NextSetup–顯示ROI校準(zhǔn)設(shè)置說(shuō)明。單擊Next提示可以翻開Run選項(xiàng)卡。RunSTARTRUN可以開頭校準(zhǔn)流程并顯示處理消息。單擊Next提示可以翻開Analysis選項(xiàng)卡。Analysi–指明校準(zhǔn)狀態(tài)Passed/Faile。5.4.1.13“排解ROI5.4.1.11執(zhí)行手動(dòng)ROI校準(zhǔn)7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManagerROI選項(xiàng)卡中，單擊StartManualCalibration。③在ROIInspector對(duì)話框中〔如圖1：a.a.在ExposureTime字段中，輸入2048。bb選擇Filter〔濾光器。11Snapshot，生成一張ROI圖像。⑤確定ROI〔以以下圖所示為未飽和以及過(guò)飽和的圖像在不過(guò)飽和的前提下，必需盡可能光明在不過(guò)飽和的前提下，必需盡可能光明〔生成ROI校準(zhǔn)時(shí)，假設(shè)反響孔過(guò)飽和，則顯〕可以含有但不是必需含有紅色像素〔表示飽和可以含有但不是必需含有紅色像素〔表示飽和。未飽和未飽和正常飽和過(guò)度飽和可承受不行承受ROIROI圖像可承受，轉(zhuǎn)至步驟⑦。假設(shè)ROI圖像過(guò)飽和，將ExposureTime降低一半，然后單擊Snapshot。重復(fù)執(zhí)行，直至獲得可承受的ROI圖像。假設(shè)無(wú)法獲得可承受的圖5.4.1.13“排解ROIGenerateCalibration。7500Software采集一張截圖，然后顯示一個(gè)消息框或ROI圖像：像：假設(shè)軟件顯示：假設(shè)軟件顯示：執(zhí)行：OK。ExposureTime降低一半〔參閱5.4.1.11重復(fù)步驟③和⑤?；騌OI圖像格外模糊或者無(wú)法成功校準(zhǔn)。 請(qǐng)參閱5.4.1.13“排解ROI可承受的校準(zhǔn)圖像注：在全部反響孔四周消滅綠色圓圈，表示反響孔成功校準(zhǔn)。

驗(yàn)證以下各項(xiàng)：WellsFound96。成功校準(zhǔn)–WellsFound必需96。SaveCalibration。注：綠色圓圈表示反響孔位置的目標(biāo)區(qū)已足夠亮。 ?在SaveCalibration。軟件保存濾光器1軟件保存濾光器1產(chǎn)生的ROIROIInspector的FilterMasksLoadedO”1旁邊。⑨對(duì)其余濾光器重復(fù)步驟③至⑧，對(duì)每個(gè)濾光器執(zhí)行校準(zhǔn)之前，將ExposureTime重置為20482048。當(dāng)全部濾光器的FilterMasksLoaded都顯示OK時(shí)，ROI校準(zhǔn)完成。⑩點(diǎn)擊Done。5.4.1.12拆卸反響板〔留意！灼熱。儀器工作期間，樣本塊溫度可能超過(guò)⑩點(diǎn)擊Done。5.4.1.12拆卸反響板〔留意！灼熱。儀器工作期間，樣本塊溫度可能超過(guò)100°C。假設(shè)剛使用過(guò)儀器，在樣本塊恢復(fù)至室溫之前，請(qǐng)勿觸摸樣本塊〕①取出校準(zhǔn)反響板：a.按壓托盤門，將其翻開。b.取出校準(zhǔn)反響板。c.按壓托盤門，將其關(guān)閉。②將校準(zhǔn)反響板放入其包裝套中。假設(shè)要執(zhí)行背景和光學(xué)校準(zhǔn)：a.在接下來(lái)的8小時(shí)，將ROIa.在接下來(lái)的8小時(shí)，將ROI校準(zhǔn)反響板置于室溫下。光學(xué)校準(zhǔn)使用ROI校準(zhǔn)反響板。b.其次天將放入包裝套的反響板放回貯存在冷凍柜內(nèi)的光譜校準(zhǔn)套件中。c.重要！不要丟棄校準(zhǔn)反響板。假設(shè)將反響板裝在其原始包裝套內(nèi)貯存，在翻開其包裝后最3次。d.重要！執(zhí)行ROI校準(zhǔn)后，也必需執(zhí)行背景校準(zhǔn)、光學(xué)校準(zhǔn)、染料校準(zhǔn)以及儀器驗(yàn)證。5.4.1.13排解ROI校準(zhǔn)故障當(dāng)全部濾光器的FilterMasksLoadedOK時(shí)，校準(zhǔn)完成。當(dāng)全部濾光器的FilterMasksLoadedOK時(shí)，校準(zhǔn)完成。

可能緣由樣本塊可能位于降低的位置。

行動(dòng)1.ROIInspectorCCDControl/Settings顯示“BlockUpBlockUp將樣本塊上升。2.2.檢查確認(rèn)受熱的蓋組件已被全程向前拉出，以確保托盤可以7500Instrument安裝了受熱蓋栓，檢查確認(rèn)蓋栓處于鎖定位置。假設(shè)7500Instrument內(nèi)的鹵素?zé)魻顟B(tài)〔參閱5.3.3.1更換燈具〔5.3.4.3。5.4.25.4.2背景校準(zhǔn)5.4.2.15.4.2.1全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。從貯存在冷凍柜內(nèi)的光譜校準(zhǔn)套件中取出預(yù)備好的背景反響板。讓背景反響板溫度上升至室溫〔至少需要5分鐘。從包裝袋中取出背景反響板〔重要！不要丟棄存放反響板的包裝袋。假設(shè)將背景反響板貯存在其原始包裝套內(nèi)，背景反響板最多可重復(fù)使用三次〕5秒鐘。5.4.2.6用板式離心機(jī)將反響板離心25.4.2.6用板式離心機(jī)將反響板離心2分鐘。反響板必需充分混合并離心。確認(rèn)反響板每個(gè)背景反響孔中的液體均位于反響孔底部。假設(shè)不是，則以更長(zhǎng)的時(shí)間離心反響板。5.4.2.7中被正確對(duì)齊。以確定角度向托盤右側(cè)施加壓力，從而關(guān)閉托盤門〔注：假設(shè)無(wú)法翻開托盤，Instrument→Calibrate，然后退出ROIInspector〕在7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanceManagerBackgroundBackgroundStartCalibrationCalibration。5.4.2.9依據(jù)向?qū)У闹甘?，完成校?zhǔn)。Background5.4.2.9依據(jù)向?qū)У闹甘?，完成校?zhǔn)。BackgroundCalibration對(duì)話框顯示四個(gè)選項(xiàng)卡：Overview–顯示校準(zhǔn)相關(guān)信息。Setup–顯示背景校準(zhǔn)設(shè)置說(shuō)明。單擊Next提示可以翻開Run選項(xiàng)卡。Run–單擊STARTRUN可以開頭校準(zhǔn)流程并顯示處理消息。單擊Next提示可以翻開Analysis選項(xiàng)卡。Analysis–指明校準(zhǔn)狀態(tài)(Passed/Failed)。5.4.2.12“排解背景校準(zhǔn)故障注：開頭校準(zhǔn)之前，儀器可能暫停一段時(shí)間〔最多可達(dá)10分鐘，以允許受熱的護(hù)蓋到達(dá)正確溫度。校準(zhǔn)完成后，取出校準(zhǔn)反響板：①按壓托盤門，將其翻開。溫度。校準(zhǔn)完成后，取出校準(zhǔn)反響板：①按壓托盤門，將其翻開。②取出校準(zhǔn)反響板。③按壓托盤門，使其滑入儀器。將校準(zhǔn)反響板放入其包裝套內(nèi)，并將包裝好的反響板放回冷凍柜內(nèi)的光譜校準(zhǔn)套件中〔重要！3〕問(wèn)題/問(wèn)題/病癥可能緣由行動(dòng)背景校準(zhǔn)失敗背景反響板上的一個(gè)或多1.使用一樣的背景反響板重復(fù)執(zhí)行校準(zhǔn)。個(gè)反響孔產(chǎn)生的光譜超過(guò)2.假設(shè)校準(zhǔn)再次失敗，請(qǐng)使用另一不同的背景反儀器的最高限度。應(yīng)板重復(fù)執(zhí)行校準(zhǔn)。3.的說(shuō)明，確定污染源。如何確定污染包括記號(hào)筆中殘存的油墨、一次性手套灑落的粉末及灰塵。欲確定污染來(lái)源和位置：①在查看原始數(shù)據(jù)時(shí)，選擇反響板布局中數(shù)塊連續(xù)的較小區(qū)域，以找出受污染反響孔的位置。②將背景反響板旋轉(zhuǎn)180°，然后再次執(zhí)行背景校準(zhǔn)。③重復(fù)步驟①以找出污染物的位置。假設(shè)步驟①和③中找到的包含污染物的反響孔位置：的位置。②將背景反響板旋轉(zhuǎn)180°，然后再次執(zhí)行背景校準(zhǔn)。③重復(fù)步驟①以找出污染物的位置。假設(shè)步驟①和③中找到的包含污染物的反響孔位置：一樣–則說(shuō)明樣本塊中含有污染物。請(qǐng)依據(jù)“5.3.4.1樣本塊污染去除”的說(shuō)明，除去樣本塊中的污染物。執(zhí)行背景校準(zhǔn)程序。假設(shè)更換背景反響板并且取出樣本塊的污染后校準(zhǔn)失?。孩軐⒂煤诩堁谏w的反響板裝入7500Instrument。⑤依據(jù)本章的說(shuō)明，執(zhí)行背景校準(zhǔn)程序。⑥校準(zhǔn)完成后，選擇反響板布局中的全部反響孔。⑦查看光譜圖譜中的峰值。假設(shè)峰值：可見–則說(shuō)明7500⑤依據(jù)本章的說(shuō)明，執(zhí)行背景校準(zhǔn)程序。⑥校準(zhǔn)完成后，選擇反響板布局中的全部反響孔。⑦查看光譜圖譜中的峰值。假設(shè)峰值：可見–則說(shuō)明7500Instrument的光學(xué)部件可能已被污染。請(qǐng)與生產(chǎn)商聯(lián)系。不存在–則說(shuō)明樣本塊已被污染。請(qǐng)依據(jù)“5.3.4.1樣本塊污染去除”的說(shuō)明，除去樣本塊中的污染物。光學(xué)校準(zhǔn)全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。從貯存在冷凍柜內(nèi)的光譜校準(zhǔn)套件中取出ROI校準(zhǔn)反響板。讓ROI校準(zhǔn)反響板溫度上升至室溫〔至少需要5分鐘。5.4.3.4從包裝袋中取出ROI5.4.3.4從包裝袋中取出ROI5〔重要！不要丟棄存放反響板的包裝袋。假設(shè)將ROI校準(zhǔn)反響板貯存在其原始包裝套內(nèi)，ROI校準(zhǔn)反響板最多可重復(fù)使用三次〕〔假設(shè)執(zhí)行ROI校準(zhǔn)后，將ROI5.4.3.5，以削減在反響板在室溫時(shí)形成的冷凝。假設(shè)ROI校準(zhǔn)反響板位于冷凍柜中，轉(zhuǎn)至步驟5.4.3.2。5.4.3.52分鐘。ROI校準(zhǔn)反響板必需充分混合并離心。確認(rèn)ROI校準(zhǔn)反響板每個(gè)反響孔中的液體均位于反響孔底部。假設(shè)不是，則以更長(zhǎng)的時(shí)間離心反響板。中被正確對(duì)齊。以確定角度向托盤右側(cè)施加壓力，從而關(guān)閉托盤門。在7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanceManagerOpticalOpticalStartCalibration。5.4.3.85.4.3.8依據(jù)向?qū)У闹甘?，完成校?zhǔn)。OpticalCalibration對(duì)話框顯示四個(gè)選項(xiàng)卡：Overview–顯示校準(zhǔn)相關(guān)信息。Setup–顯示光學(xué)校準(zhǔn)設(shè)置說(shuō)明。單擊Overview–顯示校準(zhǔn)相關(guān)信息。Setup–顯示光學(xué)校準(zhǔn)設(shè)置說(shuō)明。單擊Next提示可以翻開Run選項(xiàng)卡。Run–單擊STARTRUN可以開頭校準(zhǔn)流程并顯示處理消息Next提示可以翻開Analysis選項(xiàng)卡。Analysis–指明校準(zhǔn)狀態(tài)(Passed/Failed)。5.4.2.12“排解背景校準(zhǔn)故障5.4.3.9取出校準(zhǔn)反響板：注：開頭校準(zhǔn)之前，儀器可能暫停一段時(shí)間〔最多可達(dá)10分鐘溫度。5.4.3.9取出校準(zhǔn)反響板：①按壓托盤門，將其翻開。②取出校準(zhǔn)反響板。③按壓托盤門，使其滑入儀器。5.4.3.10①按壓托盤門，將其翻開。②取出校準(zhǔn)反響板。③按壓托盤門，使其滑入儀器。5.4.3.10將校準(zhǔn)反響板放入其包裝套中。將放入包裝套的反響板放回貯存在冷凍柜內(nèi)的光譜校準(zhǔn)套件中。〔3〕染料校準(zhǔn)全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。從冷凍柜中取出光譜校準(zhǔn)套件，并從套件內(nèi)取出全部染料反響板。5.4.4.3將光譜校準(zhǔn)套件放回冷凍柜貯藏。5.4.4.45.4.4.3將光譜校準(zhǔn)套件放回冷凍柜貯藏。5.4.4.4讓染料反響板溫度上升至室內(nèi)溫度〔約需5分鐘。〔重要！在馬上運(yùn)行之前，請(qǐng)勿從包裝袋內(nèi)取出染料反響板。在每個(gè)染料反響板上，反響孔中的熒光染料具有光敏感特性。長(zhǎng)時(shí)間暴露在光線中會(huì)降低反響板的熒光信號(hào)強(qiáng)度〕7500Real-TimePCRInstrument染料反響板貯存在其原始包裝內(nèi)并放在冷凍柜中，67500Real-TimePCRInstrument3次。在7500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanceManager中，選擇Dye選項(xiàng)卡。在Dye屏幕上，選擇SystemDyeCalibration。單擊StartCalibration。依據(jù)向?qū)У闹甘?，完成每個(gè)反響板的校準(zhǔn)〔重要！在每個(gè)校準(zhǔn)中，向?qū)为?dú)指示。必需獨(dú)立設(shè)置、運(yùn)行和分析每個(gè)染料反響板〕Dye設(shè)置、運(yùn)行和分析每個(gè)染料反響板〕DyeCalibration對(duì)話框顯示四個(gè)選項(xiàng)卡：Overview–顯示校準(zhǔn)相關(guān)信息。當(dāng)軟件提示獵取需要的材料時(shí)，選擇要校準(zhǔn)的染料。SetupNext提示可以翻開Run反響板時(shí)，依據(jù)步驟5.4.4.10所述預(yù)備并裝載反響板。Run–單擊STARTRUN可以開頭校準(zhǔn)流程并顯示處理消息。單擊Next提示可以翻開Analysis選項(xiàng)卡。。當(dāng)軟件提示分析從每個(gè)染料反響板采集的光譜時(shí)，核實(shí)校準(zhǔn)的狀態(tài)：Passed－7500Instrument5.4.4.11的②。Failed－7500InstrumentFailed－7500Instrument5.4.4.15“排解染料校準(zhǔn)故障注：開頭校準(zhǔn)之前，儀器可能暫停一段時(shí)間〔最多可達(dá)10分鐘，以允許受熱的護(hù)蓋到達(dá)正確溫度。5.4.4.7將軟件所需的染料反響板從其包裝中取出。振蕩反響板5〔重要！不要丟棄存放反響板的包裝袋。假設(shè)貯存于原包袋中，反響板最多可重復(fù)使用3次。用板式離心機(jī)將反響板離心2分鐘。反響板必需充分混合并離心。確認(rèn)反響板每個(gè)背景反響孔中的液體均位于反響孔底部。假設(shè)不是，則以更長(zhǎng)的時(shí)間離心反響板。檢查并確保要裝入的染料反響板與在7500Software中選取的熒光匹配。Instrument→Calibrate，按壓托盤門，將其翻開。將反響板裝入儀器中的反響板架。確保放置時(shí)反響板在反響孔板適配器中被正確對(duì)齊。關(guān)閉托盤門。以確定角度向托盤右側(cè)施加壓力Instrument→Calibrate，然后退出ROI然后退出ROIInspector〕5.4.4.11由于向?qū)?duì)每個(gè)染料校準(zhǔn)單獨(dú)供給指示，所以請(qǐng)對(duì)校準(zhǔn)的每個(gè)染料執(zhí)行以下程序。①①②a②b③①驗(yàn)證校準(zhǔn)狀態(tài)：Passe－7500Instrument校準(zhǔn)通過(guò)。轉(zhuǎn)到。Passe－7500Instrument校準(zhǔn)通過(guò)。轉(zhuǎn)到。Failed－7500Instrument5.4.4.15“排解染料校準(zhǔn)故障②核實(shí)染料光譜的分組：a.在反響板布局中，選擇反響板的孔。b.檢查原始數(shù)據(jù)。對(duì)于每個(gè)光譜，請(qǐng)確認(rèn)峰值：位于7500Instrument的可檢測(cè)范圍內(nèi)。無(wú)不規(guī)格光譜峰值。消滅在染料的正確通道上。假設(shè)某光譜不符合上述標(biāo)準(zhǔn)，請(qǐng)參閱5.4.4.15“排解染料校準(zhǔn)故障注：在含有一樣染料的各反響孔中，光譜位置和峰值位置的差異是由于不同反響孔之間的光學(xué)屬性及激發(fā)能存在微小差異而引起的。③假設(shè)全部光譜均可承受，則單擊Next。5.4.4.12〔留意！5.4.4.12〔留意！灼熱。儀器工作期間，樣本塊溫度可能超過(guò)10°。假設(shè)剛使用過(guò)儀器，在樣本塊恢復(fù)至室溫之前，請(qǐng)勿觸摸樣本塊〕①按壓托盤門，將其翻開。②取出校準(zhǔn)反響板。③按壓托盤門，將其關(guān)閉。濾光器濾光器峰值(nm)/光譜1-520FAM染料SYBRGreen染料2-550JOE染料VIC染料3-580CY3染料NED染料TAMRA染料4-610ROX染料TEXASRED染料〔7500〔7500Real-TimePCRInstrument染料反響板貯存在其原始包裝內(nèi)并放在6個(gè)月內(nèi)可以校準(zhǔn)7500Real-TimePCRInstrument最多3〕5.4.4.13在依據(jù)指示將染料反響板取出后，單擊Finish。5.4.4.145.4.4.1開頭操作，預(yù)備并運(yùn)行下一個(gè)反響板。5.4.4.15排解染料校準(zhǔn)故障問(wèn)題/病癥 可能緣由 行動(dòng)一個(gè)或多個(gè)原始光?光譜校準(zhǔn)反響板未充分別譜到達(dá)或低于校準(zhǔn) 心。的可檢測(cè)閾值。 ?光譜校準(zhǔn)反響板含有陳舊試劑或試劑體積缺乏。?假設(shè)正運(yùn)行定制光譜校準(zhǔn)反響板，染料可能濃度缺乏。一個(gè)或多個(gè)原始光?樣本塊或光譜校準(zhǔn)反響板含譜超過(guò) 7500 有熒光污染物。Instrument的最高?假設(shè)正運(yùn)行定制光譜校準(zhǔn)反響限量。 板，染料可能濃度過(guò)大。光譜在一個(gè)以上的樣本塊或光譜校準(zhǔn)反響板含濾光器中含有峰有熒光污染物。值。

7500Instrument并查看光譜校準(zhǔn)反響板的反響孔。假設(shè)反響孔中的液體不是：位于反響孔底部，請(qǐng)將反響板離心更長(zhǎng)時(shí)間，然后重復(fù)執(zhí)行校準(zhǔn)。體積相等，則說(shuō)明反響板未密封致使試劑揮發(fā)。請(qǐng)將其丟棄，并運(yùn)行另一反響板。運(yùn)行另一塊反響板。假設(shè)問(wèn)題照舊存在，請(qǐng)與生產(chǎn)商聯(lián)系。注：假設(shè)正運(yùn)行定制光譜校準(zhǔn)反響板，請(qǐng)創(chuàng)立另一反響板但要增加產(chǎn)生缺乏信號(hào)的染料的濃度。請(qǐng)依據(jù)5.4.2“背景校準(zhǔn)”操作，以確認(rèn)是否存在污染物。假設(shè)背景校準(zhǔn)未顯示樣本塊含有污染物，則光譜校準(zhǔn)反響板可能含有污染物。注：假設(shè)正運(yùn)行定制光譜校準(zhǔn)反響板，請(qǐng)創(chuàng)立另一反響板但要降低超過(guò)可檢測(cè)限量的染料的濃度。55-670CY5染料5.4.55.4.5驗(yàn)證儀器性能5.4.5.15.4.5.1全程戴上一次性無(wú)粉手套操作。5.4.5.2冷凍柜中取出TaqMan?RNaseP96-WellInstrumentVerificationPlate，然后讓反響板溫度上升到室溫〔5分鐘。5.4.5.3從包裝袋中取出RNaseP5秒鐘。5.4.5.4用板式離心機(jī)將反響板離心25.4.5.4用板式離心機(jī)將反響板離心2分鐘。反響板必需充分混合并離心。確認(rèn)液體位于反響板每個(gè)反應(yīng)孔底部。假設(shè)不是，則再次以更長(zhǎng)的時(shí)間離心反響板〔重要！留意不要讓RNaseP反響板的底部染上塵污。反響板底部沾上的液體和其它污染物可污染樣品區(qū)組，導(dǎo)致特別高的背景信〕上圖為RNaseP反響板上標(biāo)準(zhǔn)和未知種群的分布狀況。RNaseP反響板包括五個(gè)重復(fù)組的標(biāo)〔12502500〔12502500500010,00020,000拷貝〔500010,000拷貝〕(NC)。5.4.5.5中被正確對(duì)齊。關(guān)閉托盤門。以確定角度向托盤右側(cè)施加壓力。5.4.5.67500Software中，選擇Instrument→InstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManagerRNasePRNasePStartRNasePRun。P對(duì)話框顯示四個(gè)選項(xiàng)卡：Overview–顯示校準(zhǔn)相關(guān)信息。Setup–顯示RNaseP運(yùn)行設(shè)置說(shuō)明。單擊Next提示可以翻開Run選項(xiàng)卡。Run–單擊STARTRUNRun–單擊STARTRUN可以開頭運(yùn)行流程并顯示處理消息。單擊Next提示可以翻開Analysis選項(xiàng)卡。Analysis–指明運(yùn)行狀態(tài)(Passed/Failed)。注：開頭運(yùn)行之前，儀器可能暫?！沧铋L(zhǎng)10分鐘，以允許受熱的護(hù)蓋到達(dá)正確溫度。注：7500Software完成RNaseP運(yùn)行后，會(huì)自動(dòng)分析運(yùn)行，并在Analy