支氣管肺泡灌洗液中3種腫瘤標(biāo)志物的含量檢測(cè)及意義

支氣管肺泡灌洗液中3種腫瘤標(biāo)志物的含量檢測(cè)及意義【摘要】目的：研究支氣管肺泡灌洗液中3種腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白片段211(CYFRA211)、組織多肽特異性抗原對(duì)肺癌的臨床診斷意義.方法：采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀法、酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測(cè)62例肺癌患者、36例肺部良性病變患者血清及BALF中CEA和CYFRA211，TPS的含量.結(jié)果：肺癌患者BALF中3種腫瘤標(biāo)志物的含量明顯高于肺部良性病變患者()，且隨著TNM臨床分期升高，腫瘤標(biāo)志物的含量也明顯升高.在不同病理類型的肺癌中，3種肺癌腫瘤標(biāo)志物升高的程度均有所不同.BALF中腫瘤標(biāo)志物的含量與同期血清中的含量相比，出現(xiàn)更早且濃度更高，尤以TPS升高最為明顯.結(jié)論：BALF中3種肺癌標(biāo)志物的檢測(cè)在肺癌的早期診斷、病理類型的推斷及預(yù)后判斷方面都有一定的意義，其臨床價(jià)值優(yōu)于血清.

【關(guān)鍵詞】肺腫瘤；支氣管肺泡灌洗液;腫瘤標(biāo)記，生物學(xué)

0引言

血清腫瘤標(biāo)志物在肺癌中的應(yīng)用已作過大量研究，表明肺癌患者血清中癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)、細(xì)胞角蛋白片段211(CYFRA211)、組織多肽特異性抗原均較肺部良性病變患者和正常對(duì)照有所升高.但相關(guān)的臨床意義，各家報(bào)道不一［1，2］.隨著經(jīng)纖維支氣管肺泡灌洗術(shù)(BAL)的廣泛應(yīng)用，纖支鏡對(duì)肺癌的診斷除了常規(guī)活檢、刷檢外，支氣管肺泡灌洗液中腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)亦可協(xié)助臨床提高對(duì)肺癌的檢測(cè)率.我們擬測(cè)定血清及BALF中CEA，CYFRA211，TPS，的含量，探討其對(duì)肺癌的臨床診斷價(jià)值.

1對(duì)象和方法

對(duì)象

選擇西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸科2001/2003住院患者62例，年齡50~83歲，全部經(jīng)組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)證實(shí)為肺癌患者.其中鱗癌24例，腺癌20例，小細(xì)胞癌18例.按照1997年UICC和ATCC肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ~Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期16例.肺部良性病變組36例，年齡47~73歲，其中慢性支氣管炎急性期13例，支氣管擴(kuò)張伴感染8例，急性支氣管炎9例，支氣管肺炎6例.正常對(duì)照35例，年齡50~67歲，為我院門診體檢正常者.3組受檢對(duì)象的年齡、性別做均衡性檢驗(yàn)，無顯著性差異.因肺癌患者男性多于女性，故所選對(duì)照男性多與女性.

方法

采集及儲(chǔ)存①血清：所有受檢者均采清晨空腹靜脈血3mL，分離后的血清于70℃冰箱保存待測(cè).②BALF:按常規(guī)支氣管鏡檢查術(shù)，將纖維支氣管鏡遠(yuǎn)端插入病變所在段支氣管，而良性病變均選用鏡下所見炎癥最重部位的段或亞段做灌洗.先經(jīng)活檢孔注入20g/L利多卡因1~2mL做灌洗的局部麻醉.然后從分檢孔分次注入37℃無菌生理鹽水30~50mL，停留在6~kPa,吸引回抽適量的BALF，1500r/min離心10min,取上清液檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物,細(xì)胞成分涂片作病理學(xué)檢查,置-70℃低溫冰箱待檢.

檢測(cè)方法CEA和CYFRA211采用Elecys2010電化學(xué)發(fā)光法，檢測(cè)試劑盒購自Boche公司；TPS采用ELISA法，檢測(cè)試劑盒購自瑞典CanAg公司.測(cè)定前所有樣品恢復(fù)至室溫，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行測(cè)定.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)以x±s表示.用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所用統(tǒng)計(jì)方法為KruskalWallis非參數(shù)檢驗(yàn)，組間兩兩比較用Nemenyi法手工計(jì)算.

2結(jié)果

血清和BALF中腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定血清中肺癌組3種腫瘤標(biāo)志物的含量均顯著高于肺部良性病變組和正常對(duì)照組.BALF中3種腫瘤標(biāo)志物的含量亦顯著高于肺部良性病變組.尤以TPS升高最為顯著(Tab1).表1血清和BALF三種腫瘤標(biāo)志物測(cè)定結(jié)果比較

血清和BALF中3種腫瘤標(biāo)志物水平與腫瘤臨床分期的關(guān)系從Tab2可看出，臨床分期越高，3種腫瘤標(biāo)志物的含量越高.Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ期比較血清3種腫瘤標(biāo)志物差異均無顯著性，而Ⅳ期和Ⅰ~Ⅱ期比較，3種腫瘤標(biāo)志物均有顯著性差異(）.此外，與肺部良性病變組比較，僅Ⅲ,Ⅳ期的腫瘤標(biāo)志物含量有顯著性差異，而Ⅰ~Ⅱ期與之比較，血清3種腫瘤標(biāo)志物均無顯著性差異.在肺泡灌洗液中，隨著臨床分期的增高，3種腫瘤標(biāo)志物升高更為顯著，Ⅲ,Ⅳ期與Ⅰ~Ⅱ期比較，3種腫瘤標(biāo)志物均有顯著升高，與肺部良性病變組比較，Ⅰ~Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ期的3種腫瘤標(biāo)志物含量均有顯著性升高.表2血清和BALF中三種腫瘤標(biāo)志物水平與腫瘤臨床分期的關(guān)系

血清和BALF中3種腫瘤標(biāo)志物水平與腫瘤病理類型的關(guān)系在血清和肺泡灌洗液中,CEA在腺癌中均有明顯升高，CYFRA211在鱗癌中均有明顯升高.TPS在3種病理類型中無顯著差異.表3血清和BALF中三種腫瘤標(biāo)志物水平與腫瘤病理類型的關(guān)系

3討論

肺癌是當(dāng)今世界最常見的惡性腫瘤，且死亡率極高，因環(huán)境污染、吸煙等因素導(dǎo)致的肺癌的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)［3］.肺癌早期癥狀不明顯，往往錯(cuò)過最佳的診斷和治療時(shí)機(jī)，肺癌腫瘤標(biāo)志物的研究是實(shí)現(xiàn)肺癌早期診斷的重要途徑.

TPS是一種與細(xì)胞角蛋白18(cytokeratin18)呈高度相關(guān)的蛋白類抗原物質(zhì).因惡性腫瘤患者存在細(xì)胞角蛋白18片段的過度表達(dá)并被運(yùn)輸?shù)交颊叩难髦校视肨PS可對(duì)血清中的細(xì)胞角蛋白片段上的相應(yīng)抗原進(jìn)行定量測(cè)定.國外已將TPS測(cè)定廣泛應(yīng)用于肺癌患者的診斷、療效觀察及預(yù)后的判斷［4-6］，而陳名聲等［2］報(bào)道TPS與肺癌生物學(xué)行為有關(guān).我們亦發(fā)現(xiàn)肺癌患者血清和BALF中TPS含量均顯著高于肺部良性病變組和健康對(duì)照組.CEA是基因編碼于19號(hào)染色體上的相對(duì)分子質(zhì)量×104的糖蛋白,為胚胎性致癌抗原,有研究發(fā)現(xiàn)肺腺癌細(xì)胞能直接產(chǎn)生CEA［7］.我們的結(jié)果中肺癌患者血清和BALF中CEA含量均明顯高于對(duì)照組，且在肺腺癌中顯著高于鱗癌和小細(xì)胞肺癌.CYFRA211是由正常上皮細(xì)胞表達(dá)的CK19的一個(gè)可溶性片段,主要存在于肺腫瘤上皮細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，是檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌尤其是鱗癌的重要腫瘤標(biāo)志物［8］.我們的結(jié)果也顯示肺癌患者血清及BALF中CYFRA211含量明顯高于肺部良性病變，且在鱗癌中升高尤為明顯.

對(duì)于三種標(biāo)志物和腫瘤分期關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤分期的升高，CEA、TPS和CYFRA211的濃度和陽性率逐漸升高，尤以BALF中腫瘤標(biāo)志物升高更為明顯.表明中晚期患者腫瘤標(biāo)志物的含量均比早期患者高.在BALF中，Ⅲ、Ⅳ期與Ⅰ~Ⅱ期比較，三種腫瘤標(biāo)志物均有顯著升高，而在血清中，僅Ⅳ期與Ⅰ、Ⅱ期比較有顯著升高，這提示腫瘤標(biāo)志物含量與腫瘤負(fù)荷大小、腫瘤的浸潤發(fā)展以及腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均有一定的關(guān)系，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［9，10］.與肺部良性病變組比較，血清僅Ⅲ、Ⅳ期的腫瘤標(biāo)志物含量有顯著性差異，而Ⅰ~Ⅱ期與之比較，3種腫瘤標(biāo)志物均無顯著性差異.而在BALF中，與肺部良性病變組比較，Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的三種腫瘤標(biāo)志物含量均有顯著性升高.由此可見，在肺癌早期，腫瘤標(biāo)志物量少時(shí)，在血清中難以檢出，因此與炎癥組難以區(qū)別，而BALF是取自病變部位的支氣管肺泡內(nèi)，所以其內(nèi)腫瘤標(biāo)志物含量比血清出現(xiàn)早，濃度高，相對(duì)來說其檢測(cè)結(jié)果對(duì)肺癌的早期診斷更有意義.

上述結(jié)果表明，三種腫瘤標(biāo)志物在BALF中含量的檢測(cè)比血清更為敏感，BALF中腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)對(duì)肺癌的早期診斷價(jià)值優(yōu)于血清，因而BALF作為腫瘤標(biāo)志物的標(biāo)本來源，在臨床應(yīng)用及肺癌研究中有重要的臨床價(jià)值.

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