第二節(jié)植物細(xì)胞工程

發(fā)展歷史19世紀(jì)30年代Schwann和Schleidn創(chuàng)立細(xì)胞學(xué)說，認(rèn)為植物和動(dòng)物都是由細(xì)胞構(gòu)成。1943年，美科學(xué)家White正式提出植物細(xì)胞具有全能性的學(xué)說，認(rèn)為每個(gè)植物細(xì)胞具有該植物的全部遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。1934年，荷蘭植物學(xué)家Went等發(fā)現(xiàn)了生長(zhǎng)素，隨后又發(fā)現(xiàn)了其它生長(zhǎng)素。1948年，斯科克等較好地解決了如何從離體組織或器官中誘導(dǎo)植物再生的問題，并確定了腺嘌呤/生長(zhǎng)素的比例是控制芽和根形成的一個(gè)重要條件。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分1953年，Muir開創(chuàng)了建立單細(xì)胞無(wú)性繁殖的工作。1956年，Miller發(fā)現(xiàn)了激動(dòng)素1958年，Steward等從胡蘿卜根韌皮部愈傷組織獲得單細(xì)胞，并經(jīng)誘導(dǎo)形成胚狀體再生了植株，這是世界上首次通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了植物細(xì)胞具有全能性。20世紀(jì)六十年代中后期，植物組織培養(yǎng)進(jìn)入大規(guī)模的應(yīng)用階段。1960年Morel采用蘭屬的莖尖培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)了去病毒和快速繁殖兩個(gè)目的；1975年Rosati從草莓花藥培養(yǎng)中獲得了小孢子發(fā)育的植株。羅宗洛和李繼侗是遠(yuǎn)東植物培養(yǎng)的先驅(qū)。組織培養(yǎng)技術(shù)是我國(guó)農(nóng)業(yè)高新技術(shù)中最重要、最活躍的領(lǐng)域之一，被譽(yù)為第四次綠色革命。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物組織與器官培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)是指在無(wú)菌條下，將離體的植物器官（如根尖、莖尖、葉、花、未成熟的果實(shí)、種子等）、組織（如花藥組織、胚乳、皮層等）、細(xì)胞（體細(xì)胞、生殖細(xì)胞等）、胚胎（如成熟和未成熟的胚）、原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織、潛伏芽，或者長(zhǎng)成新的完整的植株的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。特點(diǎn)：條件要求比較苛刻，整個(gè)培養(yǎng)過程需在無(wú)菌條件下進(jìn)行，營(yíng)養(yǎng)成分及激素濃度適當(dāng)。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分全能細(xì)胞能夠表達(dá)生物體基因組的任何一種基因，并能夠分化出該生物體內(nèi)任何一種類型的細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)育為一個(gè)完全相同的生物體。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分愈傷組織外植體組織增生的細(xì)胞產(chǎn)生的一團(tuán)不定型的疏散排列的薄壁細(xì)胞。這些細(xì)胞的大小、形狀、液泡化程度、胞質(zhì)含量、細(xì)胞壁特性等通常具有很大的差異。愈傷組織細(xì)胞是分化的，但還沒有形成組織上的結(jié)構(gòu)，因此愈傷組織培養(yǎng)過程中沒有明顯的組織或器官上的分化。愈傷組織可以用繼代培養(yǎng)的方式長(zhǎng)期保存，也可以通過懸浮培養(yǎng)而迅速增殖用作無(wú)性系；也可以用作原生質(zhì)體培養(yǎng)時(shí)原生質(zhì)體的來(lái)源。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分外植體植物組織培養(yǎng)時(shí)用來(lái)進(jìn)行離體無(wú)菌培養(yǎng)的離體材料，可以是器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分繼代培養(yǎng)愈傷組織在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，營(yíng)養(yǎng)物枯竭，水分散失，并已經(jīng)積累了一些代謝產(chǎn)物，此時(shí)需要將這些組織轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。這種轉(zhuǎn)移稱為繼代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分細(xì)胞分化或形態(tài)建成多數(shù)情況下植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)是希望得到再生植株，一般植物通過細(xì)胞或組織培養(yǎng)達(dá)到再生目的要經(jīng)過以下兩個(gè)步驟：1）培養(yǎng)的植物細(xì)胞或組織的脫分化，形成愈傷組織。2）有新形成的愈傷組織形成一些分生細(xì)胞團(tuán)，隨后由其分化成不同的器官原基。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物組織培養(yǎng)的基本步驟組織培養(yǎng)可分為植株、器官、組織培養(yǎng)。根據(jù)操作方式的不同可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。液體培養(yǎng)又可以分為振蕩培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)和靜止培養(yǎng)。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分培養(yǎng)材料的采集（一）培養(yǎng)材料的采集植物具有全能性的細(xì)胞有三類：1）受精卵2）雌雄配子體及單倍體細(xì)胞3）發(fā)育中的分生組織細(xì)胞本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分（二）培養(yǎng)材料的消毒先將材料用自來(lái)水沖洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無(wú)菌紗布或吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小快。在無(wú)菌環(huán)境中將材料放入70%的酒精中浸泡30-60s。再將材料移入漂白粉飽和液或0.01%升汞(HgCl2)中消毒10min。取出后用無(wú)菌水沖洗三四次。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分制備外植體在無(wú)菌的環(huán)境下，將已消毒的材料用無(wú)菌刀、煎、鑷子等剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮或種皮胚乳（葉片則不需剝皮），然后切成0.2-0.5cm厚的小片。在操作中嚴(yán)禁用手觸摸材料。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分接種和培養(yǎng)接種：在無(wú)菌環(huán)境下，將切好的外植體立即接種在培養(yǎng)基上，每瓶接種4-10個(gè)。封口：接種后，瓶、管用無(wú)菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無(wú)菌膠帶封口。溫度：培養(yǎng)基大多應(yīng)保持在25度左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區(qū)別對(duì)待。增殖：在新梢等形成后需繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中（增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良），增殖1個(gè)月左右后，可視情況進(jìn)行再殖。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分（五）根的誘導(dǎo)繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。一個(gè)月后即可獲得健壯根系。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分（六）組培苗的移苗移載試管苗進(jìn)入自然環(huán)境前必須進(jìn)行煉苗。一般先將培養(yǎng)容器打開，于室內(nèi)自然光照下放三天，然后取出小苗，用自來(lái)水把根系上的營(yíng)養(yǎng)基沖洗干凈，再栽入已準(zhǔn)備好的基質(zhì)中（基質(zhì)使用前最好消毒）。移栽前要適當(dāng)遮蔭，加強(qiáng)水分管理，保持較高的濕度，但要防止亂苗。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物組織培養(yǎng)程序本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分一.植物組織培養(yǎng)

外植體愈傷組織新植株本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分（2）實(shí)例：非洲紫羅蘭的組織培養(yǎng)本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分愈傷組織培養(yǎng)的基本過程（一）愈傷組織的形成（1）啟動(dòng)期：細(xì)胞或原生質(zhì)體準(zhǔn)備分裂的（2）分裂期：開始分裂不斷增殖自細(xì)胞的過程。（3）分化期：細(xì)胞內(nèi)部開始一系列形態(tài)和生理上的變化，分化出形態(tài)和功能不同的細(xì)胞。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分（二）愈傷組織的生長(zhǎng)不斷更換新鮮培養(yǎng)基可以保持愈傷組織長(zhǎng)期生長(zhǎng)旺盛。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分愈傷組織的分化和形態(tài)發(fā)生愈傷組織可以再分化成為芽和根的分生組織并由其發(fā)育成完整植株。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分愈傷組織培養(yǎng)事例（1）蘆薈（2）海帶本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物器官培養(yǎng)植物器官培養(yǎng)是指從植株上的各種器官?gòu)哪阁w上分離出來(lái)，放在無(wú)菌的環(huán)境中讓其進(jìn)一步發(fā)育，最終長(zhǎng)成幼苗的過程。相比于細(xì)胞或組織培養(yǎng)而言，植物器官的培養(yǎng)更為復(fù)雜。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用（1）無(wú)性系快速繁殖技術(shù)試管甘蔗、試管香蕉（2）獲得無(wú)病毒植株（3）新品種選育突變育種原生質(zhì)體融合和細(xì)胞雜交花藥、花粉培養(yǎng)與單倍體植株（4）基礎(chǔ)研究上的應(yīng)用（5）種質(zhì)資源的保存（6）人工種子的獲得本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分什么是人工種子？就是最外面包裹一層有機(jī)膜的植物胚狀體。人工種子的優(yōu)勢(shì)：（1）利用人工種子進(jìn)行快速繁殖便于運(yùn)輸和貯藏。（2）按要求配置，效率更高。（3）可以固定雜種優(yōu)勢(shì)，加速良種繁育。（4）可作為植物基因工程和遺傳工程的橋梁。（5）可保存珍貴品種本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分選取目標(biāo)植物從合適的外植體誘導(dǎo)愈傷組織把愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基愈傷組織在液體培養(yǎng)基中增生擴(kuò)大愈傷組織轉(zhuǎn)移到無(wú)激素培養(yǎng)基體細(xì)胞胚包裹人工種皮溫室（大棚）播種獲得目標(biāo)植物本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分人工種子制作過程中，包埋是非常重要的環(huán)節(jié)1）對(duì)所要包埋的胚乳無(wú)傷害2）有足夠的的柔軟性，可以保護(hù)胚乳，并容許其發(fā)育。3）具有一定硬度，避免運(yùn)輸、操作過程中的傷害。4）具有穿透性，傳遞細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)；并能容納其他附加成分，如防腐劑、殺蟲劑等。5）可以用現(xiàn)有的溫室或農(nóng)機(jī)進(jìn)行播種。海藻鹽酸常作為人工種子的包埋劑。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分人工種子的包埋方法主要有如下四種：復(fù)合凝聚：指兩種帶相反電菏的電解質(zhì)在水中相互作用形成多聚體包被溶液。界面聚合：在兩相界面處因溶解度低而成膜。離子交換凝膠：經(jīng)過離子交換而形成絡(luò)合物成為凝膠。變溫凝膠：高溫下為液體，低溫下為固體。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物組織與器官的生物反應(yīng)器培養(yǎng)毛狀根培養(yǎng)：芽的培養(yǎng)體細(xì)胞胚的培養(yǎng)本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物組織與器官培養(yǎng)存在的問題（一）研究中存在的問題：植物組織與器官培養(yǎng)涉及許多學(xué)科，如細(xì)胞、分子、形態(tài)、解剖、生理、生化、發(fā)育、病理、遺傳以及育種等。對(duì)于培養(yǎng)較困難的植物缺乏研究。技術(shù)上的問題：效率偏低、操作比較煩瑣、培養(yǎng)結(jié)果比較難以確定等技術(shù)問題還沒很好解決。應(yīng)用范圍窄生物反應(yīng)器技術(shù)還不成熟。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下，將愈傷組織或其他易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到分散成游離的懸浮細(xì)胞，通過繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖，從而獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。其理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞具有全能性。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法根據(jù)培養(yǎng)對(duì)象，植物細(xì)胞培養(yǎng)可以分為單細(xì)胞培養(yǎng)、單倍體培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。單倍體培養(yǎng)主要指花藥培養(yǎng)。按照培養(yǎng)系統(tǒng)可分為懸浮培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)、固定化培養(yǎng)等。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基植物細(xì)胞培養(yǎng)基比動(dòng)物的簡(jiǎn)單，主要由無(wú)機(jī)鹽、碳源、維生素、植物生長(zhǎng)激素、有機(jī)氮源、有機(jī)酸和一些復(fù)合物組成。無(wú)機(jī)鹽類：濃度為25mmol/L左右。必須有鉀元素，濃度為20mmol/L或更高。碳源：蔗糖或葡萄糖是常規(guī)的碳源，果糖差一些。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物生長(zhǎng)激素：生長(zhǎng)素或細(xì)胞分裂素。生長(zhǎng)素促進(jìn)細(xì)胞分裂，促使根形成；IAA，2，4-D，NAA，IBA。細(xì)胞分裂素是BA和玉米素。有機(jī)氮源：主要有蛋白水解產(chǎn)物，谷氨酰氨或氨基酸混合物。有機(jī)酸：復(fù)合物質(zhì)：椰子汁本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分培養(yǎng)基的準(zhǔn)備高純度的藥品應(yīng)用蒸餾水或高純度的去離子水調(diào)pH值高溫滅菌（1200C15-20min）某些藥品需用過濾除菌需配高濃度母液本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物單細(xì)胞培養(yǎng)主要是觀察細(xì)胞個(gè)體是如何進(jìn)行分裂、分化、生長(zhǎng)及發(fā)育為大規(guī)模培養(yǎng)奠定基礎(chǔ)。單細(xì)胞制備方法：機(jī)械化：效率低，獲得的細(xì)胞數(shù)量有限。酶解法：最為有效的一種獲得單細(xì)胞的方法。可用來(lái)制備原生質(zhì)體。愈傷組織誘導(dǎo)法：本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分單細(xì)胞培養(yǎng)方法平板培養(yǎng)法：將一定量細(xì)胞接種到或混合到裝有一薄層固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。具體步驟為：1）單細(xì)胞懸浮液的制備并記數(shù)；調(diào)節(jié)細(xì)胞密度；澆平板；接種培養(yǎng)?？醋o(hù)培養(yǎng)和飼養(yǎng)層培養(yǎng)法（1）看護(hù)培養(yǎng)：看護(hù)培養(yǎng)由Muir于1953年創(chuàng)立，是指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，使其持續(xù)分裂和增殖的一種培養(yǎng)方法。這快愈傷組織被稱為看護(hù)組織。具體方法是將單個(gè)細(xì)胞接種于濾紙上，再置于愈傷組織之上培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、成功率高。缺點(diǎn)是不能在顯微鏡下直接觀察。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分飼養(yǎng)層培養(yǎng)：是用處理過的無(wú)活性的或分裂很慢，不具備分裂代謝能力的細(xì)胞來(lái)飼養(yǎng)所需培養(yǎng)的細(xì)胞，使其分裂和生長(zhǎng)。液體潛層靜置培養(yǎng)法：將一定密度的懸浮細(xì)胞放在培養(yǎng)皿中形成一淺薄層，封口靜止培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)是易于補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，可以鏡檢。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法：細(xì)胞接種于液體培養(yǎng)基中，在保持良好的分散狀態(tài)情況下培養(yǎng)。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)是：能大量提供比較均勻的細(xì)胞。細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)吸收、環(huán)境條件好，細(xì)胞增殖快。適合大規(guī)模培養(yǎng)，生產(chǎn)有價(jià)值的活性代謝產(chǎn)物。細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定的方法有：細(xì)胞記數(shù)細(xì)胞體積細(xì)胞鮮重和干重本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的同步化方法物理方法：體積選擇法和冷處理法化學(xué)方法：饑餓法、抑制法和有絲分裂抑制法本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分細(xì)胞的保存繼代培養(yǎng)保存法低溫保存法冰凍保存本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物原生質(zhì)體培養(yǎng)將植物細(xì)胞壁除去后得到的裸露的球形細(xì)胞,即為原生質(zhì)體.特點(diǎn):無(wú)細(xì)胞壁障礙,可以方便地進(jìn)行有關(guān)遺傳操作,并且對(duì)膜和細(xì)胞器等進(jìn)行研究.具有全能性,并能進(jìn)行人工培養(yǎng)發(fā)育成完整植株.原生質(zhì)體適合進(jìn)行誘導(dǎo)融合形成雜種細(xì)胞.本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分科研和生產(chǎn)用途提供生理生化研究的材料.用作研究基因調(diào)控和表達(dá),遺傳工程研究的材料.進(jìn)行原生質(zhì)體融合,建立雜交品種;同時(shí)可研究染色體行為和基因定位等.進(jìn)行細(xì)胞器的分離,或進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞器的遺傳實(shí)驗(yàn).本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分原生質(zhì)體的制備1)原生質(zhì)體的來(lái)源:葉片,根尖,花粉和愈傷組織原生質(zhì)體的分離:機(jī)械化和酶解法原生質(zhì)體的純化:過濾-離心法漂浮法沉降法和漂浮法結(jié)合本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分原生質(zhì)體鑒定與活力測(cè)定原生質(zhì)體鑒定:低滲爆破法:熒光染色法:綠色熒光顯示纖維素的存在,紅色是真正的原生質(zhì)體.原生質(zhì)體測(cè)定:染色法:FDA,酚藏花紅,EvansBlue,胞質(zhì)環(huán)流法滲透壓變化法氧電極法本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分原生質(zhì)體培養(yǎng)液體培養(yǎng)法固體培養(yǎng)法雙層培養(yǎng)法本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分原生質(zhì)體的發(fā)育和植株再生(1)細(xì)胞壁的再生(2)分裂(3)愈傷組織和胚狀體的形成(4)植株再生兩個(gè)途徑:愈傷組織誘導(dǎo)誘導(dǎo)胚狀體(胡蘿卜原生質(zhì)體培養(yǎng))本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞雜交（細(xì)胞融合）:將兩種植物的體細(xì)胞融合成一個(gè)雜種細(xì)胞；通過組織培養(yǎng)技術(shù)將雜種細(xì)胞培育成新植物體1960年英國(guó)諾丁漢大學(xué)Cocking教授領(lǐng)導(dǎo)的小組率先利用真菌纖維素酶，成功地制備出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根細(xì)胞原生質(zhì)體,開辟了原生質(zhì)體融合研究的新階段。

植物細(xì)胞雜交的主要過程如下：1.原生質(zhì)體的制備。2.原生質(zhì)體的融合

。3.雜合體的鑒別與篩選

。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物體細(xì)胞雜交過程圖本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合的方法物理法：離心、振動(dòng)、電刺激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分實(shí)例番茄-馬鈴薯煙草—海島煙草白菜—甘藍(lán)胡蘿卜—羊角芹

打破了遠(yuǎn)緣生物不能雜交的屏障，提供了創(chuàng)造新物種的可能。意義本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分工業(yè)化植物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)主要有兩大類：

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)

本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞兩相培養(yǎng)技術(shù)兩相培養(yǎng)技術(shù)是指在培養(yǎng)體系中加入水溶性或酯溶性的有機(jī)物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培養(yǎng)體系形成上、下兩相，細(xì)胞在水相中生長(zhǎng)，合成的次生代謝物質(zhì)分泌出來(lái)后轉(zhuǎn)移到有機(jī)相中。建立植物細(xì)胞的兩相培養(yǎng)系統(tǒng)必須滿足以下條件：本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分（1）添加的有機(jī)物或多聚化合物對(duì)植物細(xì)胞無(wú)毒，不會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)與產(chǎn)物的合成。（2）產(chǎn)物能比較容易的被有機(jī)物吸收或溶解于有機(jī)相中。（3）兩相之間容易分離。（4）有機(jī)物或多聚化合物不能吸收培養(yǎng)基中的有效成分。本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞的生物反應(yīng)器固定化培養(yǎng)細(xì)胞固定化是指游離的細(xì)胞包埋在多糖或多聚化合物制備的網(wǎng)狀支持物中、培養(yǎng)液呈流動(dòng)狀態(tài)進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)的一門技術(shù)。植物細(xì)胞固定化方法：凝膠包埋、表面吸附、網(wǎng)格或泡沫材料固定、膜固定。固定化細(xì)胞的活力測(cè)定：染色法呼吸強(qiáng)度測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)速率的測(cè)定本文檔共61頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期三\12點(diǎn)8分植物細(xì)胞的生物反應(yīng)