甾體激素類藥物的分析藥物分析

基本要求1．掌握甾體結構類藥物的結構特點與分析方法之間的關系。2．掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3．掌握甾體類藥物的含量原理與方法。4．熟悉甾體類藥物雜質檢查的方法。返回本文檔共67頁；當前第1頁；編輯于星期一\17點50分基本結構：環(huán)戊烷駢多氫菲ABCD12345678910111213141516171819概述本文檔共67頁；當前第2頁；編輯于星期一\17點50分分類：甾體激素腎上腺皮質激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素本文檔共67頁；當前第3頁；編輯于星期一\17點50分腎上腺皮質激素氫化可的松本文檔共67頁；當前第4頁；編輯于星期一\17點50分腎上腺皮質激素醋酸地塞米松本文檔共67頁；當前第5頁；編輯于星期一\17點50分腎上腺皮質激素曲安息龍本文檔共67頁；當前第6頁；編輯于星期一\17點50分腎上腺皮質激素地塞米松磷酸鈉本文檔共67頁；當前第7頁；編輯于星期一\17點50分雄性激素甲睪酮本文檔共67頁；當前第8頁；編輯于星期一\17點50分雄性激素丙酸睪酮本文檔共67頁；當前第9頁；編輯于星期一\17點50分蛋白同化激素苯丙酸諾龍本文檔共67頁；當前第10頁；編輯于星期一\17點50分孕激素黃體酮本文檔共67頁；當前第11頁；編輯于星期一\17點50分孕激素醋酸甲地孕酮本文檔共67頁；當前第12頁；編輯于星期一\17點50分雌性激素炔雌醇本文檔共67頁；當前第13頁；編輯于星期一\17點50分雌性激素雌二醇本文檔共67頁；當前第14頁；編輯于星期一\17點50分炔諾酮此外本文檔共67頁；當前第15頁；編輯于星期一\17點50分炔諾孕酮返回本文檔共67頁；當前第16頁；編輯于星期一\17點50分一、結構與性質

1.腎上腺皮質激素主要活性基團性質△4–3–酮UV、與羰基試劑反應

C17

–

α–醇酮基還原性本文檔共67頁；當前第17頁；編輯于星期一\17點50分2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團性質△4–3–酮UV、與羰基試劑反應

C17–

β–羥基可成酯本文檔共67頁；當前第18頁；編輯于星期一\17點50分3.孕激素主要活性基團性質△4–3–酮UV、與羰基試劑反應C17–甲酮基與亞硝基鐵氰化納反應本文檔共67頁；當前第19頁；編輯于星期一\17點50分4.雌性激素主要活性基團性質A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應C17–乙炔基與AgNO3反應C17–羥基可成酯返回本文檔共67頁；當前第20頁；編輯于星期一\17點50分二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應甾體激素類藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）本文檔共67頁；當前第21頁；編輯于星期一\17點50分與硫酸顯色反應

顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅

絮狀↓灰潑尼松橙

黃→藍綠炔雌醚橙紅

黃綠

↓紅色

炔雌醇橙紅

黃綠

絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄

帶橙清本文檔共67頁；當前第22頁；編輯于星期一\17點50分(二)官能團的反應腎上腺皮質激素藥物呈色四氮唑鹽OHˉ1、C17

–

α–醇酮基還原性呈色反應此外還有斐林試液、多倫試液本文檔共67頁；當前第23頁；編輯于星期一\17點50分甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼本文檔共67頁；當前第24頁；編輯于星期一\17點50分具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛3.甲酮基本文檔共67頁；當前第25頁；編輯于星期一\17點50分黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化納其他甾體淡橙色不顯色本文檔共67頁；當前第26頁；編輯于星期一\17點50分有機氟Fˉ有機破壞有機氯Clˉ4.有機鹵素茜素氟藍

硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓呈色

本文檔共67頁；當前第27頁；編輯于星期一\17點50分雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基本文檔共67頁；當前第28頁；編輯于星期一\17點50分含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基的沉淀反應↓本文檔共67頁；當前第29頁；編輯于星期一\17點50分

(三)制備衍生物測定m.p.鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍△縮氨基脲衍生物1.縮氨基脲的生成m.p.約180℃（分解）2.酯的水解丙酸睪酮堿性條件睪酮m.p.為150℃~156℃本文檔共67頁；當前第30頁；編輯于星期一\17點50分△４-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結構（四）UV法1.結構依據240nm左右280nm左右本文檔共67頁；當前第31頁；編輯于星期一\17點50分2.示例曲安西龍丙酸倍氯米松溶劑甲醇乙醇20μg/ml濃度20μg/ml結果判斷在238nm處有最大吸收在239nm處有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.25～2.45本文檔共67頁；當前第32頁；編輯于星期一\17點50分結構特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（五）IR法本文檔共67頁；當前第33頁；編輯于星期一\17點50分1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動本文檔共67頁；當前第34頁；編輯于星期一\17點50分黃體酮結構特征：△４-3-酮、C17-酮基本文檔共67頁；當前第35頁；編輯于星期一\17點50分1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵本文檔共67頁；當前第36頁；編輯于星期一\17點50分（七）TLC法

主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別

方法：對照品法要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同。本文檔共67頁；當前第37頁；編輯于星期一\17點50分（八）HPLC法

主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）

方法：對照品法要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。返回本文檔共67頁；當前第38頁；編輯于星期一\17點50分三、特殊雜質檢查（一）其他甾體的檢查

檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結構相似，也有一定的藥理作用而又互不相同.

本文檔共67頁；當前第39頁；編輯于星期一\17點50分檢查方法（具有一定分離能力）TLC法（高低濃度對比法）HPLC法（類似高低濃度對比法）本文檔共67頁；當前第40頁；編輯于星期一\17點50分（1）TLC法（高低濃度對比法）

判定方法：

規(guī)定雜質斑點數目

規(guī)定雜質斑點顏色本文檔共67頁；當前第41頁；編輯于星期一\17點50分例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60μg/ml層析：供試液點樣、展開、斑點檢出。

對照液判斷：供試液如顯雜質斑點，不得多于3個，其顏色與對照液的主斑點比較，不得更深。本文檔共67頁；當前第42頁；編輯于星期一\17點50分（2）HPLC法（主成分自身對照法）判定方法：

規(guī)定雜質峰數目規(guī)定雜質峰面積本文檔共67頁；當前第43頁；編輯于星期一\17點50分硒的檢查（二）來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫有毒方法藥物氧瓶燃燒二氨基萘比色法測定本文檔共67頁；當前第44頁；編輯于星期一\17點50分（三）有機溶劑殘留量的檢查（靈敏度法）甲醇不得出峰檢測限=3.1ng丙酮≤5.0%內標法+校正因子以地塞米松磷酸鈉為例GC法本文檔共67頁；當前第45頁；編輯于星期一\17點50分地塞米松磷酸鈉檢查甲醇和丙酮精密稱取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加內標溶液2ml，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)與丙酮100μl(≈79mg)置100ml量瓶中，精密加內標溶液20ml，加水至刻度，作為對照液。照氣相色譜法測定，含丙酮不得過5.0%，并不得出現甲醇峰。本文檔共67頁；當前第46頁；編輯于星期一\17點50分（二）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉對照品比色法供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍：740nm對照液：同上本文檔共67頁；當前第47頁；編輯于星期一\17點50分（對照液0.0035%KH2PO4）返回本文檔共67頁；當前第48頁；編輯于星期一\17點50分（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內標法）（甾體激素類藥物常含有結構相似的其他甾體雜質，對利用結構特征設計的比色法有干擾）四、含量測定測定對象：甾體激素類藥物的原料和制劑。本文檔共67頁；當前第49頁；編輯于星期一\17點50分示例：黃體酮的含量測定

色譜條件：固定相ODS，流動相甲醇-水（65:35），檢測波長254nm，內標物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗：n>1000，R符合規(guī)定。

本文檔共67頁；當前第50頁；編輯于星期一\17點50分測定樣品：黃體酮原料、注射液。

定量方法：內標法本文檔共67頁；當前第51頁；編輯于星期一\17點50分（二）UV法△４-3-酮240nm（±）腎上腺皮質激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥苯環(huán)280nm（±）雌激素本文檔共67頁；當前第52頁；編輯于星期一\17點50分示例：醋酸地塞米松片的含量測定（1）配制供試液

（2）測定：240nm

（3）計算

本文檔共67頁；當前第53頁；編輯于星期一\17點50分腎上腺皮質激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理異煙腙（黃）酮基異煙肼-3CHCl（縮合）1.異煙肼比色法（三）比色法本文檔共67頁；當前第54頁；編輯于星期一\17點50分異煙腙（黃色）本文檔共67頁；當前第55頁；編輯于星期一\17點50分（2）方法對照品法55℃異煙肼揮去乙醇對照液供試液A暗45′本文檔共67頁；當前第56頁；編輯于星期一\17點50分（3）討論反應速度（反應專屬性）A.C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應反應專屬性C3－酮基本文檔共67頁；當前第57頁；編輯于星期一\17點50分B.溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無水甲醇無水乙醇本文檔共67頁；當前第58頁；編輯于星期一\17點50分C.水分、溫度、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時→O2與光線無影響t℃↑→ν↑本文檔共67頁；當前第59頁；編輯于星期一\17點50分D.酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸:異煙肼