高中生物-動(dòng)物細(xì)胞融合與單細(xì)胞克隆抗體教學(xué)課件設(shè)計(jì)

？？？？再分化？植物細(xì)胞雜交技術(shù)利用什么原理？用什么方法可以誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合？一、原理：細(xì)胞膜具有流動(dòng)性細(xì)胞的全能性二、誘導(dǎo)方法：離心振動(dòng)電激、聚乙二醇植物細(xì)胞雜交技術(shù)有什么用途？三、用途：獲得雜種植株脫分化如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶啦！動(dòng)物細(xì)胞也能融合嗎？一、動(dòng)物細(xì)胞融合有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動(dòng)。如精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。

兩個(gè)細(xì)胞正在融合受精作用細(xì)胞融合的內(nèi)在原因是:_______________細(xì)胞膜的流動(dòng)性.(一)概念

動(dòng)物細(xì)胞融合也稱(chēng)細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多

個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。（二）動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程與植物原生質(zhì)體融合原理相同，方法類(lèi)似。雜交細(xì)胞:融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。一、動(dòng)物細(xì)胞融合合作探究1

2.動(dòng)物細(xì)胞融合與受精作用的區(qū)別?

3.用不滅活病毒可否誘導(dǎo)細(xì)胞融合?(P52)

受精作用是同種生物之間進(jìn)行的,不需要誘導(dǎo)劑,動(dòng)物細(xì)胞融合是在不同種生物之間進(jìn)行的,必須有誘導(dǎo)劑作用,

不行，滅活是使病毒失去感染能力，如果不滅活病毒會(huì)感染動(dòng)物細(xì)胞，在細(xì)胞中增殖，傷害動(dòng)物細(xì)胞。1、動(dòng)物細(xì)胞融合誘導(dǎo)融合的方法有哪些？動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)不能，雜交細(xì)胞4、敘述動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程(分步表達(dá))1.不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞（細(xì)胞懸液）2.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合4融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂（動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng))6、敘述動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程3雜交細(xì)胞篩選主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較1、原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性4、最有價(jià)值的應(yīng)用2、過(guò)程不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞滅活的病毒PEG等雜交細(xì)胞細(xì)胞融合完成的標(biāo)志:細(xì)胞核融合成一個(gè)核3、優(yōu)點(diǎn)1.突破有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。2.成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。制備單克隆抗體。

1.能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)方法是A．離心B．滅活的病毒C．電刺激D．振動(dòng)

2.動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是A．克服遠(yuǎn)源雜交不親和B．制備單克隆抗體C．培育新物種D．生產(chǎn)雜種細(xì)胞你爭(zhēng)我搶合作探究2？1.抗體是什么？是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？請(qǐng)畫(huà)出體液免疫和細(xì)胞免疫過(guò)程。２、一種Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？二、單克隆抗體3.簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？這種方法獲得的抗體有什么缺陷？

4.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎?怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？提問(wèn)？1.抗體是什么？是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？２、一種Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？二、單克隆抗體漿細(xì)胞一種抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（特異性）。

抗體不純抗原動(dòng)物體刺激漿細(xì)胞抗體抗原不純3.簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？這種方法獲得的抗體有什么缺陷？特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏4.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎?怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？

為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？思考：

B淋巴細(xì)胞具有分泌特異性抗體的能力，

骨髓瘤細(xì)胞具有體外培養(yǎng)時(shí)大量增殖特點(diǎn)設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖雜交細(xì)胞二、單克隆抗體2.制備過(guò)程：2.誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？1.注射抗原的目的是什么？5.大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法3.融合后培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種？4.兩次篩選的目的6.雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)？怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞？合作探究3知識(shí)拓展6.如何篩選雜交瘤細(xì)胞？進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng)？（1）融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。

(2)但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋?zhuān)枚嗫着囵B(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。(陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋?zhuān)话阈柽M(jìn)行3～4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。)注意：在多孔培養(yǎng)板上，培養(yǎng)得到的細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。雜交瘤細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體。

請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)自己所收集的資料，談?wù)剢慰寺】贵w的應(yīng)用。五、單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)

特異性強(qiáng)、產(chǎn)量高、靈敏度高。（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速（如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）五、單克隆抗體的應(yīng)用21本資料由書(shū)利華教育網(wǎng)（即數(shù)理化網(wǎng)）為您整理（2）可用于疾病治療和運(yùn)載藥物(癌癥治療)生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物（治療腫瘤）(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)五、單克隆抗體的應(yīng)用22本資料由書(shū)利華教育網(wǎng)（即數(shù)理化網(wǎng)）為您整理思考若不采用動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，能否生產(chǎn)出單克隆抗體？試簡(jiǎn)要說(shuō)明。

能。基因工程可從經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞中獲取決定所需抗體的基因（目的基因），導(dǎo)入瘤細(xì)胞，然后培養(yǎng)瘤細(xì)胞并從培養(yǎng)液中提取分泌物，可得到單抗隆抗體。本過(guò)程利用了哪些動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)？

動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。【堂堂清】1.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是________________________________特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備2.單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的原因是_________________________________每一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體3.產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是_______________

產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞是__________效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）雜交瘤細(xì)胞4.雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):_______________________________既能無(wú)限增殖，又能分泌特異性抗體5.首次篩選是為了獲得_____________

第二次篩選時(shí)為了獲得_______________________________雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，，又能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞第一步：從一只小鼠體內(nèi)提取T淋巴細(xì)胞，然后與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合。第二步：再用普通培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死去。第三步：對(duì)上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞直接在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，這樣從細(xì)胞培養(yǎng)液中就可以提出破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體。實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)1、已注入過(guò)滅活破傷風(fēng)桿菌的小鼠2、B淋巴細(xì)胞3、選擇培養(yǎng)基4、必須經(jīng)過(guò)專(zhuān)一抗體陽(yáng)性檢驗(yàn)下面是某同學(xué)根據(jù)單克隆抗體技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。指出不足之處。1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞課堂鞏固2、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細(xì)胞是①B淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A、①②③④

B、①③⑤C、①③

D、②④3下圖是單克隆抗體制備過(guò)程示意圖，據(jù)圖回答：（1）圖中A過(guò)程是從小鼠的脾臟中取得__________細(xì)胞，該細(xì)胞能夠產(chǎn)生___________。從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類(lèi)物質(zhì)。（2）B過(guò)程是一個(gè)____________過(guò)程，該過(guò)程的進(jìn)行需要滅活的______或_____________的誘導(dǎo)。免疫的B淋巴特異性抗體特定抗原細(xì)胞融合

病毒

聚乙二醇

3．右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：

（1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？

。原因是

.。

（2）圖中②為

過(guò)程，常用

作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了

，因此不僅能分泌

，還能

。

（3）該方案的目的是

。

不能

無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞.細(xì)胞融合

滅活病毒

雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)

特異性抗體

在體外培養(yǎng)條件下大量增殖

制備單克隆抗體

沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，4、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)選擇特異性強(qiáng),靈敏度高滅活的病毒在體外大量增殖分泌特異性抗體骨髓造血干細(xì)胞主動(dòng)運(yùn)輸（1）_______________技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類(lèi)，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是___