核心家系多巴胺受體D3基因Ser9Gly多態(tài)性與精神分裂癥關(guān)聯(lián)研究

核心家系多巴胺受體D3基因Ser9Gly多態(tài)性與精神分裂癥關(guān)聯(lián)研究【摘要】目的：探討多巴胺D3受體基因第一外顯子Ser9Gly多態(tài)性與精神分裂癥易感性的關(guān)聯(lián).方法：對(duì)河南省精神病院200110/200312住院的124個(gè)本地漢族核心家系采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)測(cè)定基因型.應(yīng)用傳遞不平衡檢測(cè)、單體相對(duì)危險(xiǎn)度檢測(cè)判斷基因多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)聯(lián).結(jié)果：在所收集的124個(gè)家系中有101可用于TDT,HRR檢測(cè)，Ser9Gly多態(tài)性存在傳遞不平衡，Gly等位基因較多地傳給下一代，這種傳遞不平衡存在按性別分組的男性患者家族中，而不存在女性患者家族中；按有無(wú)家族史分組，兩組患者中TDT均無(wú)傳遞差異，HRR檢測(cè)有家族史的家系有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，無(wú)家族史的家系無(wú)傳遞差異.結(jié)論：DRD3受體基因第一外顯子Ser9Gly多態(tài)性可能與精神分裂癥易感性存在關(guān)聯(lián)，且可能與男性精神分裂癥關(guān)系更密切，無(wú)明顯的證據(jù)說(shuō)明和家族史不同存在不同的傳遞差異.

【關(guān)鍵詞】精神分裂癥；受體，多巴胺；多態(tài)現(xiàn)象；傳遞不平衡檢測(cè)；單體相對(duì)危險(xiǎn)度檢測(cè)

0引言

多巴胺受體是多巴胺系統(tǒng)行使功能的重要環(huán)節(jié)，而多巴胺受體基因多態(tài)性的研究成為揭示精神分裂癥病因及其它相關(guān)問題的切入口之一.在多巴胺受體亞型內(nèi)，多巴胺遞質(zhì)與D3受體的親合力最高.且隨著核素醫(yī)學(xué)的發(fā)展，已經(jīng)能直觀地看到DRD3受體主要分布在端腦、伏隔核、Collegia氏島以及其它邊緣系統(tǒng)，與特異性表達(dá)、思維、情感、情緒及認(rèn)知等功能相關(guān)，可能參與調(diào)節(jié)多巴胺能系統(tǒng)對(duì)思維和情緒的控制.本研究旨在通過研究樣本總體上和不同分層間的傳遞不平衡檢測(cè)及單體相對(duì)危險(xiǎn)度檢測(cè)尋找DRD3受體的基因第一外顯子Ser9Gly多態(tài)性與精神分裂癥易感性之間的關(guān)聯(lián).

1對(duì)象和方法1對(duì)象

受試對(duì)象為河南省精神病院200110/200312住院的本地漢族患者及父母，共124個(gè)核心家系，男性家系58個(gè)，女性家系66個(gè).患者均符合CCMD3精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，由兩名主治醫(yī)師或者主治以上醫(yī)師確診；家屬患者知情同意.排除非漢族患者.2方法

入選患者填寫一般資料，包括年齡、性別、家族史、發(fā)病年齡等.對(duì)符合入選標(biāo)準(zhǔn)的病例，爭(zhēng)得同意后，抽取肘靜脈血5mL,ACD抗凝，于-70℃低溫冰箱保存,500μL用于提取DNA，DNA提取采用UNIQ10柱式人類基因組抽提試劑盒提取.引物序列為：引物15′GCTCTATCTCCAACTCTCACA3′，引物25′AAGTCTACTCACCTCCAGGTA3′［1］.目的片段擴(kuò)增及基因型判定具體方法見文獻(xiàn)［2］.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：雙親至少一方為雜合子的家系進(jìn)入統(tǒng)計(jì)分析.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用進(jìn)行χ2檢驗(yàn)分析.分析DRD3受體基因第一外顯子Ser9Gly多態(tài)性等位基因頻度和基因型頻度，采用傳遞不平衡檢測(cè)、單體相對(duì)危險(xiǎn)度檢測(cè)等方法，分析其多態(tài)性與精神分裂癥的關(guān)聯(lián).

2結(jié)果

限制性內(nèi)切酶消化片斷電泳各基因型有一定差異.

平衡分析DRD3基因型在整體樣本中、父母組及患者組均符合HW平衡.

3傳遞不平衡與單體型相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分析收集的124個(gè)家系中，有101個(gè)家系可用TDT和HRR檢測(cè).表1精神分裂癥患者101個(gè)家系TDT檢測(cè)表2精神分裂癥患者101個(gè)家系HRR檢測(cè)

進(jìn)入統(tǒng)計(jì)方程的家系按性別分層有男性家系48個(gè)，女性家系53個(gè)，分別進(jìn)行TDT檢測(cè)和HRR檢測(cè).男性家系TDT存在傳遞不平衡；而女性家系TDT未發(fā)現(xiàn)不平衡傳遞；HRR檢測(cè)，男性家系存在等位基因優(yōu)先傳遞［χ2=,P=,OR=,95%CI為(,)］；而女性家族χ2=,P=,OR=,95%CI為(,)，95%可信區(qū)間基本包含了無(wú)聯(lián)系區(qū)段，不支持二者存在聯(lián)系(Tab4).表3不同性別的精神分裂癥患者家系TDT檢測(cè)表4不同性別的精神分裂癥患者家系HRR檢測(cè)

3．3不同家族史家系分析按有無(wú)家族史分層，進(jìn)入統(tǒng)計(jì)方程的有家族史的家系38個(gè)，無(wú)家族史的家系63個(gè)，分別進(jìn)行TDT檢測(cè)和HRR檢測(cè).TDT檢測(cè)，有無(wú)家族史的家系中P均＞，均未發(fā)現(xiàn)傳遞不平衡.HRR檢測(cè)前者χ2=,P=,OR=，95%CI為(,)，Gly存在優(yōu)先傳遞現(xiàn)象；后者χ2=,P=,OR=,95%CI為(,，Tab6).表5不同家族史的精神分裂癥患者家系TDT檢測(cè)表6不同家族史的精神分裂癥患者家系HRR檢測(cè)

3討論

我們研究表明,DRD3受體基因第一外顯子Ser9Gly多態(tài)性可能與精神分裂癥易感性存在關(guān)聯(lián)，且可能與男性精神分裂癥關(guān)系更密切，無(wú)明顯的證據(jù)說(shuō)明和家族史不同存在不同的傳遞差異.

3．1DRD3基因多態(tài)性與精神分裂癥易感性關(guān)聯(lián)分析早在1996年，Crocq等［3］在英國(guó)和法國(guó)兩個(gè)獨(dú)立的人群中對(duì)DRD3基因第一外顯子的Ser9Gly多態(tài)性與精神分裂癥的相關(guān)性進(jìn)行了兩個(gè)獨(dú)立研究，首次發(fā)現(xiàn)了DRD3基因Ser9Gly多態(tài)性與精神分裂癥易感性相關(guān)，且在患者組Gly分布較多.我們對(duì)所入組的核心家系首先進(jìn)行HardyWeinberg分析，樣本基因型分布符合這一平衡.關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)DRD3基因多態(tài)位點(diǎn)Ser9Gly存在傳遞不平衡Gly較多的傳給下一代，與Crocq等［3］,JamesL等［4］及國(guó)內(nèi)學(xué)者周儒倫等［5］的結(jié)果類似.支持DRD3基因多態(tài)性Ser9Gly與精神分裂癥易感性存

在關(guān)聯(lián).JonssonE等［6］在瑞士人群病例對(duì)照研究及Meta分析，發(fā)現(xiàn)純合子在患者組分布較多，提出純合子組合可能增加精神分裂癥的易感性.Spurlock等［7］卻發(fā)現(xiàn)Ser/Ser基因型在精神分裂癥患者組分布較多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.最近Ambrosio等［8］在核心家系對(duì)DRD3多態(tài)位點(diǎn)Ser9Gly與精神分裂癥相關(guān)性進(jìn)行TDT,HRR檢測(cè)均無(wú)顯著性差異.

結(jié)果的不同可能與樣本量大小、多項(xiàng)研究病例與對(duì)照的選擇偏倚、人群來(lái)源的不同有關(guān).在大量分子生物學(xué)研究中，當(dāng)最低的基因頻率≥，即視為多態(tài).在生物進(jìn)化過程中，突變的發(fā)生率本身是受周圍環(huán)境因素多方面影響的，等位基因Ser9是野生型，Gly是突變型，在某一范圍內(nèi)Ser9Ser就有可能或保持相對(duì)高度保守，占有相當(dāng)大的比率.而精神分裂癥本身的高度異質(zhì)性，又受多因素的影響，增加了假陽(yáng)性和假陰性關(guān)聯(lián)的機(jī)率.有研究表明不同區(qū)域內(nèi)的人群存在基因構(gòu)成的不同，或者也可能成為研究結(jié)果差異的原因之一.我們選擇了內(nèi)對(duì)照，應(yīng)用傳遞不平衡和單體相對(duì)危險(xiǎn)度分析，避免了關(guān)聯(lián)研究中存在的不恰當(dāng)?shù)膶?duì)照問題，人群構(gòu)成相對(duì)單一.樣本量雖不算大，但可以為以后的研究及已存在的不一致的研究結(jié)果提供新的證據(jù)積累.

我們?cè)趯?duì)患者按性別進(jìn)行分層時(shí)，TDT與HRR檢測(cè)均提示男性患者父母優(yōu)先將等位基因Gly傳給患者，而女性組未發(fā)現(xiàn)差異.與Griffon等［9］的結(jié)果一致.還有學(xué)者指出與男性初發(fā)年齡相關(guān)［10］.Mant等［11］指出純合子Ser9Ser在男性患者和有家族史的患者中分布較多.Gly等位基因的傳遞差異可能

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