2023年柱色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告

柱色譜分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告

篇二：色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告

色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告

項(xiàng)目一：氣相色譜流出曲線的研究

一：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、2、3、

掌握氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及工作原理理解色譜流出曲線中各參數(shù)的表達(dá)方法掌握氣

相色譜中定性、定量分析方法

二、實(shí)驗(yàn)原理

氣相色譜的固定相是涂布在載體表面的固定液，試樣氣體由載氣攜帶進(jìn)入色譜柱，與固定

液接觸時(shí)，氣相中各組分便溶解在固定液中。隨著載氣的不斷通入，被溶解的組分又從固定液

中揮發(fā)出來，揮發(fā)出的組分隨載氣向前移動(dòng)時(shí)又再次被固定液溶解。由于各組分在固定液中的

溶解能力不同，隨著載氣的流動(dòng)，各組分在兩相間通過反復(fù)的溶解-揮發(fā)過程，通過一段時(shí)

間，最終實(shí)現(xiàn)彼此分離。

色譜圖是指被測(cè)組分從進(jìn)樣開始，經(jīng)色譜柱分離到組分所有流過檢測(cè)器后，所產(chǎn)生的響

應(yīng)信號(hào)隨時(shí)間分布的圖像。色譜圖上有一組色譜峰，每每個(gè)峰代表試樣中的一個(gè)組分。色譜流

出曲線是以組分流杰出譜柱的時(shí)間或載氣流出的體積為橫坐標(biāo)，以檢測(cè)器對(duì)各組分的電信號(hào)響

應(yīng)值為縱坐標(biāo)的一條曲線。三、儀器與試劑1、儀器氣相色譜儀2、試劑乙醇、正丁

醇

四、實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)1、調(diào)試氣相色譜儀2、分別進(jìn)行進(jìn)樣

3、進(jìn)乙醇和正丁醇的混合物樣品，分別記錄保存時(shí)間五、實(shí)驗(yàn)記錄

1、色譜條件：50m柱經(jīng)：320pm固定液：聚乙二醇

載氣：氮?dú)鈾z測(cè)器類型：fid檢測(cè)器溫度：150℃

柱溫：95℃氣化室溫度：165℃氣體流量：載氣30ml/min

2、色譜圖參數(shù)

六：實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果所占比例可以看出該實(shí)驗(yàn)出峰效果較明顯，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。在做

實(shí)驗(yàn)時(shí)我們應(yīng)注意一些問題，比如說乙醇和正丁醇要按一定的比例來混合，柱溫要設(shè)立合理，最

低要高于正丁

醇的沸點(diǎn)，也不能過高，否則會(huì)使組分不易分開；過低封效果會(huì)不明顯。此外進(jìn)樣時(shí)要

快、準(zhǔn)、穩(wěn)，避免出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。

項(xiàng)目二：白酒中甲醇含量的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、2、

掌握用外標(biāo)法進(jìn)行色譜定量分析的方法。了解氫火焰離子檢測(cè)器的性能和操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

氣相色譜法是一種分離效果好，分離速度快，靈敏度高，操作簡(jiǎn)樸，應(yīng)用范圍廣的分析方

法，它是以氣體為流動(dòng)相，當(dāng)氣體攜帶著欲分離的混合物流經(jīng)色譜柱中的固定相時(shí)，由于混合物

中各組分的性質(zhì)不同，它們與固定相的作用力大小不同，所以組分在流動(dòng)相與固定相之間的分

派系數(shù)不同，通過多次反復(fù)分派之后，各組分在固定相中滯留的時(shí)間不同，與固定相作用力小

的先流杰出譜柱，與固定相作用力大的后流杰出譜柱，從而實(shí)現(xiàn)分離。

外標(biāo)法是在一定的操作條件下，用純組分或已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液配制一系列不同含量的

標(biāo)準(zhǔn)溶液，準(zhǔn)確進(jìn)樣，根據(jù)色譜圖中組分的峰面積（或峰高）對(duì)組分含量作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同

操作條件下，依據(jù)樣品說的峰面積（或峰高），從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相應(yīng)含量。白酒中甲醇

含量的測(cè)定，以氫火焰離子化檢測(cè)器運(yùn)用醵類物質(zhì)在氫火焰中的化學(xué)電離進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)甲醇

的色譜峰高與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較進(jìn)行定量。

三、儀器與試劑1、

儀器

氣相色譜儀，10pl微量注射器1支2、

試劑

甲醇（色譜醇），60%乙醇水溶液（不含甲醇）。四、實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)1、

色譜柱的準(zhǔn)備

將內(nèi)徑為4mm、長(zhǎng)為2m的玻璃或不銹鋼色譜柱洗凈，烘干。采用gdx-102（60-80

目）作為固定相制備色譜柱。

2、色譜操作條件：檢測(cè)器fid;氣化室溫度200°G檢測(cè)室溫度150°G采用程序升溫，

初始柱溫為60℃保持時(shí)間為Imin,此后每Imin升高20°值至升至100℃3、甲醇標(biāo)

準(zhǔn)溶液的配制

以603乙醇水溶液為溶劑，配制濃度分別為0.1菰0.3%、0.5當(dāng)、0.73的甲醇高標(biāo)

準(zhǔn)溶液。4、甲醇含量的色譜測(cè)定

用微量注射器分別吸取10pl各甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜儀，獲得色譜圖，以

保存時(shí)間作為對(duì)照定性，擬定甲醇色譜峰。五：儀器的關(guān)機(jī)與清洗六數(shù)據(jù)解決及計(jì)算結(jié)

果1、

根據(jù)試樣溶液色譜圖中甲醇的峰面積（或峰高），查出試樣溶

液中甲醇的含量（口g/100ml）。篇三：實(shí)驗(yàn)—柱色譜

實(shí)驗(yàn)10柱色譜分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一亞甲基藍(lán)與熒光黃的分離

一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

?學(xué)習(xí)并掌握色譜法的原理及其應(yīng)用。

?學(xué)習(xí)并掌握柱色譜的實(shí)驗(yàn)操作技能。

二實(shí)驗(yàn)原理

色譜法亦稱色層法，層析法等，是分離，純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。色譜

法的基本原理是運(yùn)用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分派）的不同，或其它

親和作用性能的差異，混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分派等作用，從而將各

組分分開。

色譜分離法的分類

（按操作條件的不同）

色譜分離法的分類

（按組分在固定相中的作用原理不同）

色譜法的應(yīng)用

色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用重要涉及以下幾個(gè)方面：

（1）分離混合物

（2）精致提純化合物

(3)運(yùn)用比移值(rf)鑒定化合物

(4)跟蹤反映進(jìn)程

柱色譜常用的有吸附色譜和分派色譜兩類。前者常用氧化鋁或硅膠為吸附劑。后者以硅

膠，硅藻土和纖維素為支持劑，以吸取大量的液體為固定相。

當(dāng)加入的洗脫劑流下時(shí).，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流

動(dòng)，繼續(xù)洗脫時(shí)，吸附能力弱的組分隨溶劑一方面流出。在連續(xù)洗脫過程中，不同組分或不同

色帶就能分別收集，從而達(dá)成分離純化的目的。

1.吸附劑

常用的吸附劑：氧化鋁，硅膠，氧化鎂，碳酸鈣，活性炭或纖維素粉。選擇吸附劑的首

要條件：不與被分離物或展開劑發(fā)生化學(xué)反映。

吸附能力與以下幾點(diǎn)有關(guān)：

(1)吸附劑顆粒大小

(2)吸附劑含水量

柱色譜

2.溶劑

通常根據(jù)被分離物中各組分的極性、溶解度和吸附活性等來考慮。先將帶分離的樣品溶

于盡量少的非極性溶劑中，從柱頂流入柱中，依次增大溶劑的極性，將不同化合物依次洗脫。

常用洗脫劑的極性：

石油酸＜環(huán)己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醛＜乙酸乙酯＜

丙酮V乙醇＜甲醇＜水＜乙酸

三實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)及注意事項(xiàng)

(1)取一支色譜柱，在柱子的收縮部塞一小團(tuán)脫脂棉花，注意松緊要適度。然后在棉花

上鋪一層粗硅膠或石英砂。

(2)將色譜柱垂直固定在鐵架臺(tái)上，往柱內(nèi)加適量7(n乙醇溶液，打開活塞，趕走氣

泡。

(3)再向柱中倒入適量70帶乙醇溶液，打開活塞，控制滴速為1滴/秒，用小錐型瓶承接,

同時(shí)通過漏斗慢慢裝入5ga1203,使其逐漸沉入底部。

【在裝吸附劑的過程中，應(yīng)用質(zhì)軟的物體如試管夾、吸耳球等輕輕敲擊柱身，促使吸附劑

裝填緊密，排除氣泡。最終應(yīng)使吸附劑的上端平整，無凹凸面?！?/p>

（4）加完吸附劑后，在吸附劑上再蓋一張直徑大小合適的小濾紙。

（5）當(dāng)溶劑的液面剛好流至濾紙面時(shí)關(guān)閉二通活塞，立即用移液管加入1ml亞甲基藍(lán)

和熒光黃的乙醇混合液，盡量免待分離混合液粘附在柱的內(nèi)壁上。

（6）打開二通活塞，等柱內(nèi)的溶劑恰好流到濾紙面時(shí)，關(guān)閉二通活塞，向柱內(nèi)加入70%

乙醇，打開二通活塞進(jìn)行洗脫。

（7）用錐形瓶收集藍(lán)色的亞甲基藍(lán)溶液。【洗脫時(shí)切勿使溶劑流干！】

（8）當(dāng)藍(lán)色溶液收集完后，等柱內(nèi)的702乙醇溶液恰好流到濾紙面時(shí)，關(guān)閉二通話

塞，加入適量2%氨水作為洗脫劑。打開二通活塞收集黃綠色的熒光黃溶液，直到其完全被洗

出。

（9）用量筒分別量取所分離出來的亞甲基藍(lán)和熒光黃溶液的體積后，倒入指定的回收瓶

中。

（10）分離結(jié)束后，應(yīng)先讓溶劑盡量流干，然后倒置，用吸耳球從活塞國(guó)向管內(nèi)擠壓空

氣，將吸附劑從柱頂擠壓出。使用過的吸附劑倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽。

四操作注意事項(xiàng)

特別注意：有機(jī)溶劑對(duì)身體特有害別是心肺；肝臟等所有過柱操作都要在通風(fēng)櫥里進(jìn)

行?。。≈V是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。下面我就幾年來過柱的體會(huì)寫些心得，希

望對(duì)大家能有所幫助。

1、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓壓力可以增長(zhǎng)淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集

的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)

問

也最長(zhǎng)，比如天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。減壓柱可以減少硅膠的使用

量，感覺可以節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外

面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西也許得不到，并且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很

大的噪音，并且時(shí)間長(zhǎng)）。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對(duì)它有比較深厚的感情，但是自從嘗試

了加壓后，就幾乎再也沒動(dòng)過減壓的念頭了。加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只

但是外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供

氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中合用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(huì)

減低分離效果。個(gè)人覺得加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較合用的。

2、關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)當(dāng)是粗長(zhǎng)的最佳柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣

后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^薄），這樣相對(duì)的減小了分離的難度。試想

假如柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢

沖了。而假如樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當(dāng)然采用粗大的

柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，但是這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不

環(huán)保的說，但是溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi)）?，F(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：

5?10,書中寫硅膠量是樣品量的30?40倍，具體的選擇要具體分析。假如所需組分和雜質(zhì)

分的比較開（是指在所需組分rf在0.2~0.4,雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用

小柱子（例如200毫克的樣品，用2cmx20cm的柱子）；假如相差不到0.1,就要加大柱子,

我覺得可以增長(zhǎng)柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。

3、關(guān)于無水無氧柱，合用于對(duì)氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品可以濕柱，也可以干柱。但是

在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，由于溶劑和硅膠飽利時(shí)放出的熱量有也許是產(chǎn)品分

解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。這個(gè)我分離的次數(shù)很少，一般都是通過紫外燈

查看的。

4、關(guān)于濕法、干法上樣

濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，

不然溶劑就成了淋洗劑了。有的上樣后在硅膠上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì)出

現(xiàn)，是由于硅膠對(duì)樣品的吸附飽和這就應(yīng)當(dāng)先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，假如不能

重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。有些樣品溶解性差，能

溶解的溶劑又不能上柱（比如dmf,dms。等，會(huì)隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫

尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是1：1,我覺得是越少越好，但

是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上）。溶劑的

選擇。當(dāng)然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油酸，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用

正己烷的，太貴了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程，所以

夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)氣憤泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠,

所以產(chǎn)品假如想過元素分析的話要留神，應(yīng)當(dāng)通過后繼解決，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用

的相對(duì)較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了。由于某些因素，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜

嘛），我們這里是用2.51的塑料桶裝的。此外溶劑在過柱子后最佳也回收使用，一方面環(huán)

保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，當(dāng)然比較忙的時(shí)候我是不回收的，太費(fèi)事了。這里要注意的

是，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油酸和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致極

性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子

后，溶劑最后回收要采用常壓，由于在減壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來，常壓時(shí)就

會(huì)減少這種現(xiàn)象，假如雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反映那就慘了。

5、關(guān)于操作問題

5.1裝柱。

柱子下面的活塞可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子

裝實(shí)

就行。裝完的柱子應(yīng)當(dāng)要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品

就會(huì)從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太

大的影響，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然假如你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但

是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！

用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加

少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗

劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2~4cm就夠了），再加壓，這樣避

免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

5.3淋洗劑的選擇。

感覺上要使所需點(diǎn)在rf在0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過

柱子就用那種極性，假如rf在0.6,即使相差0.2也不容易在柱子上分開，由于柱子是一個(gè)

多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）

的三次方或四次方大。此外，一般你的物質(zhì)酸性的話淋洗劑里面要加入幾滴乙酸，堿性的話通

常使用氨水或是三乙胺等弱堿。

5.4樣品的收集。

用硅膠作固定相過柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以假如樣品與硅膠的吸附比

較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧

化鋁作固定相。

5.5最后的解決。

柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以假如想送分

析，最佳用少量的溶劑洗滌一下，由于大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒了，必要

時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。

此外，再過柱的時(shí)候，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡，一是和使用的溶劑有關(guān)，假如是易揮發(fā)的溶劑，

如乙醛、二氯甲烷等，在室溫稍高的情況下，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此，在室溫高的時(shí)候，可

以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對(duì)小的溶劑。尚有，使用混合溶劑時(shí)，使用的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)當(dāng)相

差不大，如：乙酸乙酯和石油酸（60~90）,而乙醛卻要選擇30—60的石油酸。二是：不管

是用帶砂板的還是塞棉花的，在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避

免柱中有空氣！

最后過柱子需要耐心，不要著急。篇四：柱色譜分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告==

柱色譜分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告

篇五：柱色譜和薄層色譜——預(yù)習(xí)報(bào)告

預(yù)習(xí)報(bào)告

一、實(shí)驗(yàn)名稱：薄層色譜和柱色譜

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、學(xué)習(xí)薄層色譜和柱色譜技術(shù)的原理和應(yīng)用

2、掌握薄層色譜和柱色譜分離技術(shù)和操作要點(diǎn)。

3、掌握如何對(duì)的的配置展開劑

三、實(shí)驗(yàn)原理：色譜法的基本原理，是運(yùn)用混合物各組分在固定相

和流動(dòng)相中分派平衡常數(shù)的差異。簡(jiǎn)樸地說就是，當(dāng)

流動(dòng)相流經(jīng)固定相時(shí)，由于固定相對(duì)各組分的吸附或

溶解性能的不同，使吸附力較弱或溶解度較小的組分

在固定相中移動(dòng)的速度較快，在多次反復(fù)平衡過程中

導(dǎo)致各組分在固定相中形成了分離的''色帶"，從而

得到分離。

四、重要試劑規(guī)格及用量

1%偶氮苯的甲苯溶液，1省蘇丹ii的甲苯溶液，1%的竣甲基纖維素

鈉（cmc）水溶液，硅膠g,立即比為9：1的甲苯-乙酸乙酯。

五、實(shí)驗(yàn)裝置圖（見實(shí)驗(yàn)記錄本）

六、實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)

（一）薄層色譜實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)：

1、薄層板的制備（此實(shí)驗(yàn)中不考慮，有直接的可用）

2、取兩塊薄層板，分別在距一端1cm處用鉛筆輕輕地畫一條

線，作為起始線。用分別兩根毛細(xì)管，分別取偶氮苯、蘇丹

甲苯溶液和其混合液放在起始線上，取兩個(gè)樣點(diǎn)，且兩樣點(diǎn)

相距1到1.5厘米，且樣點(diǎn)的直徑不超過2毫米。假如樣點(diǎn)顏色太淺，可

以等其變干后在反復(fù)幾次。

3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作為展開劑，待樣點(diǎn)干燥后，小心放入已加入展開

劑的廣口瓶中，點(diǎn)樣一端應(yīng)進(jìn)入展開劑0.5cm,蓋好瓶蓋，觀測(cè)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，觀測(cè)

展開劑前沿上升至離板的上端1cm處取出，盡快用鉛筆在展開劑上升的前沿處劃

一記號(hào)，比較兩者的rf值的大小。

（二）柱色譜實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)

1、在色譜柱上端放一個(gè)干燥的漏斗，將吸附劑倒入其中，