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選修三第一章發(fā)酵工程第一章發(fā)酵工程【滅菌消毒】滅菌方法:①高壓蒸汽滅菌法:工具:高壓蒸汽滅菌鍋一般情況:℃滅菌20min葡萄糖:℃以上會(huì)焦化,℃滅菌30min(也可以)(拓展)根據(jù)滅菌物質(zhì)的特點(diǎn)需要適當(dāng)調(diào)整:(拓展)高壓蒸汽滅菌鍋的使用注意事項(xiàng):高壓蒸汽滅菌鍋使用前要檢查。鍋內(nèi)物品不能擺放太多,太密集,why?滅菌的時(shí)間:開始:時(shí)開始計(jì)時(shí),結(jié)束:打開排氣閥,壓力降到指針為時(shí)滅菌鍋無(wú)法達(dá)到設(shè)定壓力?全部工作結(jié)束后,所有使用過(guò)得器皿、都必需通過(guò)高壓蒸汽滅菌后再洗滌傾倒②過(guò)濾滅菌:工具:G6玻璃砂漏斗,(抽濾滅菌(更快)滅菌對(duì)象:③灼燒滅菌法:接種環(huán)、鑷子消毒方法①紫外線:工具:紫外燈,原理:紫外線:波長(zhǎng)256—266nm使菌體變性在超凈工作臺(tái)上紫外燈(紫外燈操作過(guò)程中關(guān)閉)+滅菌30min誘變育種:紫外線引起基因突變/染色體畸變②消毒劑:對(duì)象:涂布器:浸泡在75%酒精中,接種前,再外植體:浸泡2min—沖洗—30s—10min/0.1%氯化汞5-7min—沖洗—消毒后在無(wú)菌紙/滅菌培養(yǎng)基操作【例】接種間、消毒間的方法進(jìn)行消毒或滅菌【培養(yǎng)基】①菌落特征:大小、形狀、顏色、粗糙程度、隆起程度、。。。。②菌種擴(kuò)大培養(yǎng):將單菌落接種到液體培養(yǎng)基,培養(yǎng)/培養(yǎng)(增加培養(yǎng)基中的濃度,搖床的可以調(diào)節(jié))③微生物計(jì)數(shù)方法:稀釋涂布平板法(活菌計(jì)數(shù)結(jié)果偏:當(dāng)2個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落)顯微鏡計(jì)數(shù)法(血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右)平板劃線法:無(wú)法計(jì)數(shù)④培養(yǎng)基功能:選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基⑤培養(yǎng)基種類:物理狀態(tài):固體培養(yǎng)基(含有瓊脂,獲得單菌落)、液體培養(yǎng)基(擴(kuò)大培養(yǎng))成分:合成培養(yǎng)基(化學(xué)成分清楚)、天然培養(yǎng)基(便宜)用來(lái)菌種保存:培養(yǎng)基(固體斜面培養(yǎng)基)冰箱(低溫)⑥培養(yǎng)基配置過(guò)程:計(jì)算——稱量——溶解(可用水)——————高壓蒸汽滅菌(尿素、酶等物質(zhì)過(guò)濾滅菌)——倒平板(凝固后)——接種(法)——倒置放置(防止)——培養(yǎng)基廢棄(法滅菌)分裝與滅菌的先后關(guān)系:平板:先滅菌在分裝試管:先分裝再滅菌【例】培養(yǎng)基的配置需要在酒精燈火焰旁操作()⑦培養(yǎng)基的成分:1.微生物培養(yǎng)基成分:水、無(wú)機(jī)鹽、、、生長(zhǎng)因子(維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶),2.細(xì)菌培養(yǎng)基成分:常用蛋白胨和來(lái)配置(細(xì)菌喜葷,中性偏堿)實(shí)驗(yàn)室常用:LB培養(yǎng)基(水、氯化鈉、蛋白胨、)3.霉菌培養(yǎng)基成分:添加蔗糖的豆芽汁或可溶性淀粉加無(wú)機(jī)物;(霉菌喜素,中性偏酸)4.酵母菌:培養(yǎng)基5.植物(MS培養(yǎng)基成分):水、無(wú)機(jī)鹽(大量元素、微量元素)、維生素、氨基酸、糖、類物質(zhì)(可以改動(dòng):)6.動(dòng)物:液體培養(yǎng)基成分:水、無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素、糖、、素、素7.胚胎:液體培養(yǎng)基加入:水、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)物、維生素、激素、氨基酸、核苷酸動(dòng)物血清、激素單克隆抗體克隆化培養(yǎng)時(shí),不加,因?yàn)?.胚胎干細(xì)胞:液體培養(yǎng)基加入:水、無(wú)機(jī)鹽、動(dòng)物血清、維生素、細(xì)胞(why?)【例】酵母菌通常使用培養(yǎng)基(填牛肉膏蛋白胨、MS、麥芽汁瓊脂)使用滅菌法滅菌【微生物的培養(yǎng)】①土壤微生物的培養(yǎng):(菌種的分離純化)溶解—振蕩—獲?。ㄈ。幚恚ㄖ苽渚海臃N(平板劃線法/稀釋涂布平板法(計(jì)數(shù))——獲得單菌落(實(shí)現(xiàn)菌種)②影印法的優(yōu)點(diǎn)?③微生物的育種:方法?場(chǎng)所?【抑菌效果的檢測(cè)】:制備細(xì)菌懸液——制備的濾紙圓片——將其浸泡——測(cè)定透明圈(抑菌圈)的大小【分離分解尿素的微生物—以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基—對(duì)照組:LB固體培養(yǎng)基】尿素+培養(yǎng)基其他成分(G6玻璃砂漏斗過(guò)濾滅菌)(高壓蒸汽滅菌;做凝固劑)(適當(dāng)冷卻后混合)接種(平板劃線法/稀釋涂布平板法)單菌落菌落周圍出現(xiàn)(原因:尿素分解菌含有將尿素使周圍環(huán)境PH,從而使變色)(需要測(cè)量菌落或紅色環(huán)帶的直徑——計(jì)算比值)紅色環(huán)帶越寬,菌株對(duì)尿素的分解能力越強(qiáng)(判斷)尿素固體培養(yǎng)基會(huì)直接殺死其他無(wú)法利用尿素的微生物()(判斷)選擇培養(yǎng)基中菌落數(shù)較少(和空白培養(yǎng)基相比)?()(判斷)尿素為分解尿素的細(xì)菌只提供氮源()(拓展)菌種篩選:高產(chǎn)纖維素酶菌株—以為唯一碳源—通過(guò)—發(fā)生進(jìn)化【例】產(chǎn)酸的微生物——培養(yǎng)基中加入以便篩選醋酸發(fā)酵培養(yǎng)基中加入自養(yǎng)的微生物——不加原因?【泡菜的腌制——主要是乳酸菌(菌、菌、菌),發(fā)酵產(chǎn)物:乳酸、等】?jī)?yōu)良乳酸菌——能力強(qiáng)、抑制胃腸道內(nèi)病原菌,是制作益生菌飼料的良好菌種。①泡菜壇——熱水消毒——腌制時(shí)可以泡菜——水封壇口——?jiǎng)?chuàng)造缺氧環(huán)境(要嚴(yán)謹(jǐn))②開水短時(shí)間燙泡菜?③泡菜的處理:6%鹽水(鹽+冷開水)腌制——抑制其他微生物的生長(zhǎng)白酒——作用?④加入陳泡菜汁?相當(dāng)于接種已經(jīng)培養(yǎng)的發(fā)酵菌⑤第7天左右食用——亞硝酸鹽接近水平(發(fā)酵過(guò)程中亞硝酸鹽含量先上升后下降)⑥菌種變化?【果酒的制作——酒精檢測(cè)——酸性重鉻酸鉀】①酵母菌(已知約500多種)來(lái)源?②優(yōu)質(zhì)酵母菌應(yīng)具有的能力?(起泡酵母:能力)③酵母菌的呼吸作用:注意:厭氧呼吸能量只產(chǎn)生于第一階段:酵母菌的CO2產(chǎn)生場(chǎng)所:所以乙醇發(fā)酵過(guò)程中要注意④發(fā)酵原理:℃左右葡萄糖(等糖類)—2乙醇+2CO2+能量(酵母菌不能直接利用糯米等)⑤發(fā)酵過(guò)程:發(fā)酵開始時(shí),由于酵母菌的需氧呼吸會(huì)使發(fā)酵瓶?jī)?nèi)出現(xiàn),原因是?乙醇發(fā)酵過(guò)程中微生物的變化:前期有氧:酵母菌需氧呼吸,菌大量繁殖后期氧含量低:濃度過(guò)高,生長(zhǎng)受抑制⑥發(fā)酵結(jié)束的標(biāo)志:酒精發(fā)酵:⑦發(fā)酵的產(chǎn)物:果酒制備過(guò)程中,pH會(huì)變小:why?⑧如何提高酒精產(chǎn)量:1.加入適量(可分2次加入,why?)2.選擇/比值較高的菌株用于生產(chǎn)(改變菌種)⑨釀酒工業(yè)流程:淀粉等—處理—葡萄糖—酒精發(fā)酵—處理—濃度更高的酒精釀酒時(shí),糯米蒸熟處理why?糯米釀酒要糖化處理why?【果醋的制作】①優(yōu)良醋酸菌?醋酸菌的活化:適宜濃度的②醋酸發(fā)酵場(chǎng)所:細(xì)胞溶膠——全程有③發(fā)酵原理:℃,醋酸發(fā)酵過(guò)程中,pH會(huì)變小氧氣、糖源充足時(shí),葡萄糖——缺少糖源時(shí),乙醇——乙醛——④發(fā)酵過(guò)程:微生物的變化?⑤發(fā)酵結(jié)束的標(biāo)志:醋酸發(fā)酵:乙醇含量最低發(fā)酵結(jié)束加:可以防止醋酸菌繼續(xù)代謝【例】醋酸發(fā)酵時(shí),培養(yǎng)基可以加作為反應(yīng)物【例】當(dāng)醋酸菌和乳酸菌共同生長(zhǎng)時(shí),在培養(yǎng)基中加入來(lái)篩選醋酸菌(拓展)醋酸發(fā)酵——培養(yǎng)基加入——出現(xiàn)透明圈(拓展)發(fā)酵過(guò)程可以翻動(dòng)發(fā)酵料(散熱)——/(拓展)酵母菌和醋酸菌在結(jié)構(gòu)上最大的區(qū)別是:(拓展)果酒釀果醋:培養(yǎng)條件需要改變?果酒釀果醋時(shí),除原料和菌種外,還要添加材料如谷殼、玉米芯等(營(yíng)造有氧環(huán)境)作為發(fā)酵料,無(wú)需添加額外氮源why?【例】容器是否裝滿?果酒制備?果醋制備?泡菜腌制?【例】果酒的酒精度隨糖度的增加而增加,當(dāng)糖度繼續(xù)增加,酒精度反而下降,分析原因可能是。在酒精發(fā)酵后期,(填“需要”或“不需要”)定期放氣,原因是_。為了保持果醋產(chǎn)品的色澤和風(fēng)昧,發(fā)酵終止后,需低溫殺菌,目的是研究表明,應(yīng)用耐高溫酵母菌能進(jìn)一步提高酒精產(chǎn)生率,其可能的原因是(答出2點(diǎn)即可)?!纠酷劸乒に囍小昂筇幚怼杯h(huán)節(jié)的一個(gè)重要工序是將酒樣置于87℃保溫30min,目的是【例】?jī)?yōu)良起泡酵母菌種篩選:將分離得到的釀酒酵母分別接種于酵母菌培養(yǎng)基中,15℃培養(yǎng)24h后,觀測(cè)記錄產(chǎn)氣量。篩選得到的優(yōu)良菌種除產(chǎn)氣能力、酒精耐受能力、耐酸能力強(qiáng)外,還應(yīng)有等特點(diǎn)。當(dāng)觀察到時(shí)表示發(fā)酵完畢,獲得葡萄酒原酒。隨后,原酒經(jīng)過(guò)一定的調(diào)配和勾兌后,在其中加人適量和蔗糖,裝瓶密封,置于15℃條件下,進(jìn)行二次發(fā)酵。如果發(fā)酵產(chǎn)品是微生物的代謝產(chǎn)物,可采用.(答出1點(diǎn)即可)等方法進(jìn)行提取。(拓展)起泡酒的制備:起泡葡萄酒的初次發(fā)酵——25℃左右,直到不再產(chǎn)生氣泡,停止發(fā)酵——原酒再次發(fā)酵:目的:為了起泡——降低,再加入起泡酵母和蔗糖進(jìn)行二次發(fā)酵【工業(yè)發(fā)酵過(guò)程】選育優(yōu)良菌株的方法:育種、育種優(yōu)良菌種的特點(diǎn):高產(chǎn)、培養(yǎng)基來(lái)源充足且廉價(jià),被轉(zhuǎn)化率高,發(fā)酵
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