多花黃精組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

多花黃精組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了多花黃精組織培養(yǎng)育苗過程中組培室消毒處理、外植體采集、外植體處理、培養(yǎng)基制備、組織培養(yǎng)、煉苗與移栽、出苗、包裝運(yùn)輸、檔案管理等技術(shù)要求。本文件適用于XX省多花黃精組織培養(yǎng)育苗。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4285農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則（所有部分）LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua百合科黃精屬的多年生草本植物，中藥材黃精基源植物。根狀莖肥厚，少有近圓柱形，莖高可達(dá)100cm，葉互生，橢圓形、卵狀披針形至矩圓狀披針形，傘形花序，花被黃綠色，漿果黑色，5月-6月開花，8月-10月結(jié)果。組培室消毒處理組培室用84消毒液稀釋至1000倍或75%乙醇噴灑洗滌組培室地面，保持室內(nèi)清潔。超凈工作臺用紫外燈照射30min，隨后關(guān)閉紫外燈通風(fēng)20min以上，用濕拖把輕輕打掃超凈工作臺四周，降低塵埃，接著用75％乙醇擦拭臺面操作區(qū)域。外植體采集取種子萌發(fā)形成的幼芽，用解剖刀從芽的萌發(fā)的基部切下；取無病害，無腐爛，根系發(fā)達(dá)的多花黃精根狀莖健壯芽頭，在芽點以下2cm-3cm處，用解剖刀切下。外植體處理清洗放入器皿中用洗衣粉等清潔劑沖洗20min。滅菌清洗好的外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺進(jìn)行操作，將芽塊放入滅菌后的燒杯內(nèi)，用75%酒精清洗30s，無菌水沖洗3-5次，0.1%HgCl溶液浸泡10min-15min，最后用無菌水沖洗5次-6次。培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基配方誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基的配方見附錄A。培養(yǎng)基配置、滅菌與保存參照LY/T1882執(zhí)行。組織培養(yǎng)培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25℃±2℃培養(yǎng)室中，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1500lx-2000lx。誘導(dǎo)培養(yǎng)黃精芽塊滅菌后在接種盤中切掉芽塊下部，只留取0.5cm-1cm大小的芽點，迅速接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30d-50d，分化產(chǎn)生5個左右叢生芽時，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)切取其叢生芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，反復(fù)接種繼代培養(yǎng)4-5次后，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)的周期以30d-45d為宜，增殖率為4-7，可繼代4-5次。生根培養(yǎng)將誘導(dǎo)形成的大小相近的繼代苗，在超凈工作臺上切割為單株，接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)25d-30d根系鋪滿培養(yǎng)瓶底部即進(jìn)行煉苗移栽。煉苗煉苗標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)組培苗擁有1個以上的健壯芽點，生長4條-5條根以上時，可進(jìn)行煉苗處理。馴化將裝組培苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)架上取下，轉(zhuǎn)移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在20℃-25℃，封口煉苗3d-5d，開瓶煉苗1d-2d后即可移栽。移栽容器選用穴盤或底部有空的育苗盤。基質(zhì)按照體積比珍珠巖:蛭石:泥炭土=1:2:3。方法取出生根苗，自來水沖洗干凈根部培養(yǎng)基，用1000倍甲基托布X或多菌靈溶液浸泡根部5min~8min，放置于通風(fēng)陰涼處晾干水分至根系發(fā)白變軟，再移栽入已準(zhǔn)備好的基質(zhì)中。移栽前將基質(zhì)澆透水，移栽完成后用花灑進(jìn)行澆水定根。管理環(huán)境條件將移栽的組培苗置于有自動噴霧設(shè)備和遮陽網(wǎng)的大棚中，保持棚內(nèi)光照強(qiáng)度在1000～2000lx，空氣濕度在75%～85%之間，定期澆水，保持基質(zhì)濕度為30%-50%。追肥每隔15d～20d用氮磷鉀（N20-P20-K20）或（N25-P10-K20）水溶性肥600倍～800倍溶液澆苗1次。病害管理對苗期病蟲害以預(yù)防為主，綜合防治。施用農(nóng)藥應(yīng)符合GB4285和GB/T8321（所有部分）的規(guī)定。出苗當(dāng)組培苗根狀莖長3cm以上，重15g以上時可以出苗。包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸包裝包裝應(yīng)用干燥、清潔、無異味、不影響質(zhì)量、容易回收和降解的材料，外包裝應(yīng)用紙箱。標(biāo)志每箱應(yīng)貼上標(biāo)簽，注明品種、數(shù)量、產(chǎn)地、出苗日期等。運(yùn)輸裝車時切勿倒置，用有蓬車輛運(yùn)輸以避免日曬、雨淋，高溫和嚴(yán)寒季節(jié)裝運(yùn)的車廂應(yīng)該有控溫設(shè)施，溫度調(diào)節(jié)至25℃，不低于5℃，到目的地后應(yīng)立即進(jìn)行種植或假植。檔案管理內(nèi)容多花黃精組織培養(yǎng)育苗培育過程中外植體采集、外植體處理、培養(yǎng)基制備、組織培養(yǎng)、煉苗與移栽、出苗、包裝等內(nèi)容，應(yīng)逐項如實記載，記載表格見附錄B。保存檔案采用紙質(zhì)檔案和電子檔案2種方式保存，保存時間3年。

（資料性）組織培養(yǎng)配方多花黃精組織培養(yǎng)育苗培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基成分類別培養(yǎng)基成分誘導(dǎo)培養(yǎng)基mg/L增殖培養(yǎng)基mg/L生根培養(yǎng)基mg/L大量元素NH4N031650825825KNO31900950950MgS04?7H20370185185KH2PO41708585CaCl2?2H20440220220鐵鹽FeS03?7H2027.827.827.8Na2-EDTA37.337.337.3微量元素MnS04?4H2022.322.322.3ZnS04?7H208.68.68.6CuS04?5H200.0250.0250.025Na2Mo04?2H200.250.250.25CoC12?6H200.0250.0250.025KI0.830.830.83H3BO36.26.26.2有機(jī)營養(yǎng)成分煙酸0.50.50.5鹽酸硫胺素0.10.10.1鹽酸吡哆醇0.50.50.5甘氨酸2.02.02.0肌醇100100100防褐變劑抗壞血酸101010植物生長調(diào)節(jié)劑6-芐氨基嘌呤（6-BA）2.04.0/2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）/0.2/吲哚丁酸（IBA）//0.8萘乙酸（NAA）0.5/0.5糖蔗糖300003000030000凝固