慢性ITP時(shí)脾臟的形態(tài)學(xué)及免疫組化研究

慢性ITP時(shí)脾臟的形態(tài)學(xué)及免疫組化研究【摘要】目的研究ITP時(shí)脾臟的病理形態(tài)及免疫組化特點(diǎn)。方法應(yīng)用光鏡觀察36例ITP脾臟的形態(tài)特征；用免疫組化S-P法檢測(cè)CD3、CD4、CD8、CD20、CD41、CD43、CD45Ro、CD68、P53和PCNA在ITP脾臟組織中的表達(dá)情況。結(jié)果本組男女之比為:1，男性平均年齡歲，女性平均年齡歲。脾臟呈輕度腫大。主要組織學(xué)改變是白髓濾泡反應(yīng)性增生，生發(fā)中心擴(kuò)大，濾泡周邊帶增寬，中央動(dòng)脈壁增厚、纖維化，微血管增生。CD8+細(xì)胞多于CD4+T淋巴細(xì)胞；含血小板抗原的CD41+和CD43+淋巴細(xì)胞主要分布于生發(fā)中心；PCNA+淋巴細(xì)胞在紅、白髓中均呈彌漫而密集分布；CD68+組織細(xì)胞數(shù)量較正常增多，T、B淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞呈增殖現(xiàn)象。結(jié)論ITP脾CD8+淋巴細(xì)胞明顯高于CD4+淋巴細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞及組織增生現(xiàn)象提示輔助T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)和功能異常。DEX治療ITP能有效緩解病情。

【關(guān)鍵詞】特發(fā)性血小板減少癥；脾臟；病理學(xué)；免疫組織化學(xué)

Chronicidiopathicthrombocytopenicpurpura:apathologicandimmunohistochemicalstudyofthespleen

【Abstract】ObjectiveToinvestigatethepathomorphologicalandimmunochemicalfeaturesofthespleeninidiopathicthrombocytopenicpurpura.MethodsLightmicroscopywasusedtostudythemorphologiccharacteristicsof36casesofthespleeninidiopathicthrombocytopenicpurpura.TheexpressionofCD3,CD4,CD8,CD20,CD41,CD43,CD45RoCD68,P53andPCNAproteinweredetectedinallcaseswithS-Pimmunohistochemicalmethod.ResultsTheratioofthemalewithfemaleis:1.Theaverageageofthemalesisyearsold.Theaverageageofthefemalesisyearsold.ThesplenomegalyofthechronicITPislow-grade.Themainpathologicchangeisreactivefollicularhyperplasiaofthewhitepulpandgerminalcentralenlargingandbroadenofthemarginalzone.Thethickandfibrosiswallsofmiddlespleenarteries.TheCD8+lymphocytesCD4+lymphocytes.ThelymphocyteswhichexpressplatlateantigenCD41andCD43mainlydistributeinthecenterofthefolliculasarea.PCNApositivelymphocyteslocateddifusslyanddenselyinredpulpandwhitepulp.TheincreasingnumberofcellssuggeststheproliferationofTandBcellsandInITPpatients,abnormaldistributionofTlymphocytesubsetsandchangesoftheproliferationofTandBlymphocytesandhistocytesmayimplythedysfunctionofTh1/Th2.TreatmentwithDEXhasbeneficialeffectofITP.

【Keywords】idiopathicthrombocytopenicpurpura;spleen;pathology;immunohistochemistry

慢性特發(fā)性血小板減少癥是常見出血性疾病之一，發(fā)病機(jī)理與免疫異常有關(guān)，血循環(huán)中存在抗血小板抗體使血小板破壞過多，同時(shí)還作用于骨髓巨核系細(xì)胞，影響其增殖、分化及成熟過程［1］。本研究用免疫組化方法對(duì)破壞血小板的重要器官與場(chǎng)所的脾臟檢測(cè)CD系列單克隆抗體的表達(dá)，以期提高對(duì)本病的認(rèn)識(shí)水平。

1材料與方法

1．1標(biāo)本來源收集我院1996年1月～2006年6月間CITP患者行外科手術(shù)治療脾切除標(biāo)本36例；另選10例因創(chuàng)傷性脾破裂而手術(shù)切除的正常脾標(biāo)本作對(duì)照研究。

1．2方法標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4mm厚連續(xù)切片，染色，每張切片均再次經(jīng)2位副高以上醫(yī)師復(fù)檢結(jié)果一致為最終診斷。鼠抗人P53抗體、CD系列抗體、PCNA單克隆抗體和S-P試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。每例標(biāo)本分別標(biāo)記上述抗體，DAB顯色，以PBS緩沖液代替第一抗體作陰性對(duì)照；分別用已知對(duì)P53高表達(dá)的肺癌組織和對(duì)CD系列高表達(dá)的淋巴結(jié)作陽性對(duì)照。

2結(jié)果

2．1臨床資料共獲ITP脾36例，男6例，女30例，男女之比為:1，男性平均年齡歲；女性平均年齡歲。所有病例均以全身皮膚彌漫散在瘀點(diǎn)或瘀斑或紫癜為首發(fā)癥狀，育齡婦女則長(zhǎng)期月經(jīng)過多。實(shí)驗(yàn)室檢查：血小板計(jì)數(shù)在×109/L之間，其中1例血小板只有12×109/L。血紅蛋白和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)大多減少，多呈小細(xì)胞低色素缺鐵性貧血；白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常；出血時(shí)間大多延長(zhǎng)，而凝血時(shí)間正常；骨髓像均見巨核細(xì)胞顯著增多，以顆粒性巨核細(xì)胞和裸核為主，產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞少見。用酶聯(lián)免疫熒光法檢測(cè)血小板相關(guān)抗體：PAIgG增高33例，占%；PAIgM增高8例，占22%，且常伴較嚴(yán)重出血；T8細(xì)胞百分值增高，而T4細(xì)胞比值下降。本組臨床上均排除繼發(fā)性血小板減少，診斷ITP明確。本組均因內(nèi)科治療不滿意而行脾切除術(shù)，術(shù)后第5天平均應(yīng)用地塞米松40mg/d左右，血小板上升維持在×109/L。

2．2形態(tài)學(xué)觀察

2．2．1巨檢脾臟有不同程度腫大，大小范圍為××；重量為115～185g。表面光滑，包膜無增厚，切面脾小結(jié)明顯，無出血、壞死。

2．2．2鏡檢主要表現(xiàn)為：白髓濾泡反應(yīng)性增生，生發(fā)中心擴(kuò)大，濾泡邊緣帶增寬，其內(nèi)見漿細(xì)胞浸潤(rùn)，經(jīng)激素治療后的病例濾泡呈退行性變化，數(shù)量減少，生發(fā)中心不明顯，濾泡周邊帶無增寬，細(xì)胞數(shù)量減少；脾竇擴(kuò)張、淤血，紅髓內(nèi)可見多少不等嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，部分聚集成片；脾索內(nèi)可見吞噬紅細(xì)胞及血小板的巨噬細(xì)胞；中央動(dòng)脈管壁增厚、纖維化，多見年長(zhǎng)者，并有PAS陽性物質(zhì)沉著；約半數(shù)病例出現(xiàn)輕度髓樣化生；微細(xì)血管密度增加；紅髓中組織細(xì)胞增生，可見泡沫細(xì)胞形成。

2．2．3免疫表型CD3+和CD45Ro+T淋巴細(xì)胞分布彌漫而密集；CD20+B細(xì)胞主要分布于濾泡套區(qū)和邊緣區(qū)及生發(fā)中心內(nèi)；CD8+T淋巴細(xì)胞明顯多于CD4+T淋巴細(xì)胞；CD68+組織細(xì)胞明顯多于正常對(duì)照組；含血小板抗原CD41+和CD43+淋巴細(xì)胞主要分布于生發(fā)中心；P53+淋巴細(xì)胞分布彌漫且多呈弱陽性；PCNA+淋巴細(xì)胞在紅、白髓均呈彌漫分布。

3討論

ITP是一種由自身抗體引起的血小板破壞過多的自身免疫性疾?。?］。主要在脾臟產(chǎn)生抗血小板抗體，屬IgG型［3］；脾又是破壞血小板的重要場(chǎng)所。切除脾可去掉產(chǎn)生抗體的器官和破壞血小板的場(chǎng)所，使外周血中的血小板上升。我們認(rèn)為，對(duì)內(nèi)科治療無效的慢性型患者應(yīng)盡早脾切除以提高療效。而對(duì)ITP的兒童一定要慎重，因?yàn)閮和凶杂目赡?，要?yán)格掌握手術(shù)指征。本組脾切除后，臨床療效滿意和確切，多數(shù)病例獲得持續(xù)緩解。

ITP是由脾產(chǎn)生的大量IgG引起的［4］?？贵w包被的血小板由于被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞快速清除而壽命短暫，特別是脾和肝。包被較重的血小板由肝吞噬細(xì)胞清除；而包被較輕的血小板則通過肝再經(jīng)脾而被清除［5］；因此，脾臟是破壞血小板的重要器官和場(chǎng)所?？梢娖⑶谐苡行ё钄嘌“宓钠茐?。本組病例脾切除后48h血小板明顯上升，經(jīng)2年隨訪，不需激素長(zhǎng)期維持，血小板基本保持在正常范圍。

近年研究表明，自身免疫性疾病的發(fā)生與機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境平衡紊亂有關(guān)，而輔助T細(xì)胞與抑制T細(xì)胞亞群間的平衡是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的中心環(huán)節(jié)。研究結(jié)果顯示［6］，ITP患者外周血CD8+細(xì)胞百分率顯著增高，CD3+、CD4+細(xì)胞明顯減少，CD4+/CD8+下降。Th與Ts亞群比例失調(diào)，Th與Ts之和明顯超過總T細(xì)胞，說明外周血中存在CD4+、CD8+雙標(biāo)記細(xì)胞，真正的CD8+細(xì)胞減少。相關(guān)分析結(jié)果，CD4+/CD8+與IL-2呈顯著正相關(guān)，血小板計(jì)數(shù)與CD8+細(xì)胞百分率呈顯著負(fù)相關(guān)，并發(fā)現(xiàn)ITP患者T細(xì)胞亞群比例失調(diào)是IL-2活性降低的始動(dòng)因素。揭示細(xì)胞免疫功能異常與ITP的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有顯著關(guān)系。細(xì)胞毒性T細(xì)胞在ITP中的作用很早就被學(xué)者重視，Wybran和Fudenbery［7］認(rèn)為部分ITP患者檢測(cè)不到自身抗體有可能因?yàn)榇嬖诙喾N致病機(jī)制。Handin［8］也認(rèn)為血小板自身抗體復(fù)合物一旦在體內(nèi)激活淋巴細(xì)胞，這些激活的淋巴細(xì)胞就可對(duì)血小板產(chǎn)生細(xì)胞毒性破壞作用。這就可以部分解釋為何在經(jīng)脾切除和激素治療后有的患者始終存在持續(xù)的血小板破壞。而Morimoto等［8］研究也提示細(xì)胞介導(dǎo)的血小板破壞可能是細(xì)胞毒性T細(xì)胞直接作用于血小板的結(jié)果。最近Olsson等［9］發(fā)現(xiàn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的血小板破壞作用可能是慢性ITP患者發(fā)病中的一個(gè)重要機(jī)制，在此研究中，利用DNA芯片技術(shù)掃描活動(dòng)期、緩解期ITP患者以及正常人的CD3+細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞毒性基因和Th1反應(yīng)相關(guān)基因在ITP患者中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組。認(rèn)為細(xì)胞毒性細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而扮演了破壞血小板的重要角色［9］。

本組研究顯示脾組織中CD4+、CD8+細(xì)胞和CD68+樹突狀細(xì)胞均有不同程度增生，而CD8+細(xì)胞明顯多于CD4+淋巴細(xì)胞，與外周血淋巴細(xì)胞相關(guān)研究［2］相似，提示T細(xì)胞亞群與免疫遞呈細(xì)胞的平衡紊亂是ITP細(xì)胞免疫功能異常導(dǎo)致血小板破壞的重要因素。

【參考文獻(xiàn)】

1CinesDB,BlannehetteVA.Immunethrombocytopenicpurpura.NEngJMed，2002,346:995-1008.

2范磊，阮長(zhǎng)耿.特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病機(jī)制.蘇州醫(yī)藥,2006，32：357-359.

3HayesMM，JacobsP，WoodL，etpathologyinimmuneClinPathol,1985,38:985-988.

4JiangDY，ListudyofthespleeninchronicimmunethrombocytopenicpurpurawithspecialreferencetohyperplasticfolliclesandfoamyPatholLabMed,1995,1999,533-537.

5MarrackP，KapplerJ，KotzinBL，etal.Autoimmunedisease:whyandwhereMed,2001，7:899-905.

6WilsonBS，DeloritchTL，Janus-likeroleofregulalatoryinNKTcellinautoimmunedis