伊曲康唑分散片人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究

伊曲康唑分散片人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究【摘要】目的:研究伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊在正常人體的藥動(dòng)學(xué)與生物等效性。方法:18名健康男性志愿受試者隨機(jī)交叉口服g單劑量伊曲康唑分散片受試制劑和伊曲康唑膠囊參比制劑后，采用高效液相色譜法測(cè)定伊曲康唑的血漿藥物濃度，采用方差分析及雙單側(cè)t檢驗(yàn)判定其生物等效性。結(jié)果:兩種制劑均符合一級(jí)吸收開(kāi)放性一室模型，伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0→72分別為和ng/(h·mL)，AUC0→∞分別為和ng/(h·mL)，Cmax分別為和ng/mL，Tmax分別為和h，t1/2分別為和h。伊曲康唑分散片的相對(duì)生物利用度為%。結(jié)論:伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊為生物等效制劑。

【關(guān)鍵詞】伊曲康唑；藥物代謝動(dòng)力學(xué)；生物等效性

伊曲康唑?yàn)榭拐婢幬铮饕糜谀钪榫躁幍姥?、花斑癬、皮膚癬菌病如足底部癬、手掌部癬、口腔念珠菌病、真菌性角膜炎、甲真菌病以及系統(tǒng)性真菌病等。由于伊曲康唑是一種高親脂性化合物，患者服用伊曲康唑后生物利用度波動(dòng)較大［1］。臨床上一般采取餐后立即給藥的方式，但食物成分又會(huì)影響其生物利用度［23］。本文對(duì)兩廠(chǎng)家生產(chǎn)的伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊的人體藥動(dòng)學(xué)和相對(duì)生物利用度進(jìn)行研究，并對(duì)兩制劑進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)，為臨床用藥提供參考。

1材料與方法

試驗(yàn)材料

藥品與試劑

受試制劑：伊曲康唑分散片；參比制劑：伊曲康唑膠囊。伊曲康唑?qū)φ掌?。乙腈，甲基叔丁基醚，其它試劑為?guó)產(chǎn)分析純，水為重蒸餾水。

儀器

Agilent1100高效液相色譜儀，配Agilent1100FLD檢測(cè)器及Chemstations色譜工作站。AB135S電子分析天平，TDZ4AWS低速臺(tái)式離心機(jī)。

血藥濃度測(cè)定方法［1］

色譜條件

采用HypersilODS2色譜柱，柱溫30℃；流動(dòng)相：∶乙腈，流速：mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：Ex260nm，Em365nm；進(jìn)樣量：20μL。

溶液的配制

精密稱(chēng)取伊曲康唑?qū)φ掌穖g置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得μg/mL的伊曲康唑?qū)φ掌穬?chǔ)備溶液，用甲醇逐步稀釋成5、1、ng/mL的對(duì)照品工作溶液，置冰箱中冷藏備用。

血樣處理

精密量取樣品血漿mL于10mL離心管中，加1mol/L的氫氧化鈉溶液200μL，旋渦振蕩5min，再加入mL甲基叔丁基醚，旋渦振蕩2min，3000r/min離心5min，吸取上清液置于5mL玻璃離心管中，45℃水浴氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00μL流動(dòng)相溶解，20μL進(jìn)樣。外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行定量分析。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備

用空白血漿將伊曲康唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成、、、、、、ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按樣品處理方法處理并測(cè)定，以伊曲康唑峰面積對(duì)伊曲康唑濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。

回收率及精密度測(cè)定

在空白血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別配制成低、中、高濃度標(biāo)準(zhǔn)系列血樣各5份，按“樣品處理”方法處理并測(cè)定，另用甲醇配制含伊曲康唑濃度分別、、ng/mL的甲醇溶液各1mL，進(jìn)樣20μL，記錄伊曲康唑峰面積，以此為標(biāo)準(zhǔn)，將兩組峰面積進(jìn)行比較計(jì)算伊曲康唑的萃取回收率。取空白血漿及對(duì)照品溶液，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備”項(xiàng)下方法制備伊曲康唑低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)量控制樣品，每一濃度平行操作5份，代入線(xiàn)性方程計(jì)算濃度，以測(cè)得值與加入值的比值計(jì)算回收率，并計(jì)算日內(nèi)精密度。連續(xù)3d配制并測(cè)定上述濃度樣品，考察方法的日間精密度。

樣品穩(wěn)定性

用空白血漿配制3個(gè)不同濃度的樣品，分別進(jìn)行凍融實(shí)驗(yàn)，20℃凍存條件下穩(wěn)定性及樣品室溫穩(wěn)定性試驗(yàn)。結(jié)果樣品反復(fù)凍融4次、20℃凍存條件下120d、室溫放置10h均穩(wěn)定。

生物利用度試驗(yàn)方法

18名健康志愿受試者，均為男性，年齡歲，身高cm，體重kg，無(wú)煙酒嗜好，實(shí)驗(yàn)前經(jīng)詢(xún)問(wèn)病史、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。受試者無(wú)藥物過(guò)敏史和藥物依賴(lài)史，無(wú)慢性病史，兩周內(nèi)未服用任何藥物。受試期間統(tǒng)一清淡飲食，不使用除受試制劑以外的任何藥物，不接受煙、酒及含咖啡因飲料。受試者試驗(yàn)前簽署知情同意書(shū)。試驗(yàn)方案經(jīng)中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

采用兩制劑雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將受試者隨機(jī)等分成兩組，每組9人。受試者禁食12h后，于早上8：00分別口服受試制劑或參比制劑g，統(tǒng)一用溫開(kāi)水200mL送服。服藥前1h及服藥后2h禁止飲水，服藥后4h及10h統(tǒng)一進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)餐。受試者服藥前及服藥后、、、、、、、、、、、h取靜脈血4mL。間隔2周后，交叉單劑量服用參比制劑或受試制劑，并于相同時(shí)間點(diǎn)采集血樣。血樣置肝素管中，立即離心，分離出血漿，于20℃冰箱中貯藏。

藥動(dòng)學(xué)分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

18名受試者血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS藥動(dòng)學(xué)程序［4］處理，符合一室模型。擬合求得消除速率常數(shù)λz，t1/2，梯形面積法求得AUC0→72，AUC0→∞=AUC0→72+

C72/λZ，Tmax及Cmax均用實(shí)測(cè)值，相對(duì)生物利用度F=AUC0→72/AUC0→72(R)×100%。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法：AUC0→72和Cmax經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行藥物間、周期間、個(gè)體間的三因素方差分析，再以雙單側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)行等效性判斷。若受試制劑AUC0→72對(duì)數(shù)值的90%可信限落在參比制劑80％～125%范圍內(nèi)，Cmax對(duì)數(shù)值的90%可信限落在參比制劑70％～143%范圍內(nèi)，則認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效［23］。Tmax采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法，判斷試驗(yàn)制劑與參比制劑之間有無(wú)差別。

2結(jié)果

色譜圖

圖1分別為空白血漿、標(biāo)準(zhǔn)品、空白血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)品和受試者服藥后血樣的色譜圖。伊曲康唑的保留時(shí)間約為min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)及其它雜質(zhì)不干擾樣品的分離測(cè)定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍和最小可定量濃度

回歸方程為A=+，相關(guān)系數(shù)r=。伊曲康唑血漿濃度在～ng/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，最低定量限為ng/mL。

回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果

萃取回收率：伊曲康唑低、中、高濃度的萃取回收率分別為%、%、%。

方法回收率及精密度：伊曲康唑低、中、高三個(gè)濃度的方法回收率、日內(nèi)精密度、日間精密度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。方法回收率均在85%～115%之內(nèi)，日內(nèi)、日間RSD均小于15%。符合生物等效性研究的方法學(xué)要求。表1回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

血藥濃度測(cè)定結(jié)果

18例受試者口服伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊g后各時(shí)間的平均血漿藥物濃度時(shí)間曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。

藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

單劑量口服伊曲康唑T和R制劑g后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。表2主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

生物等效性分析結(jié)果

AUC0→12、Tmax、Cmax分別經(jīng)三因素方差分析，僅個(gè)體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，藥物間、周期間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)雙向單側(cè)t檢驗(yàn)，logAUC0→72TL=，TH=，均大于，；logCmaxTL=，TH=，均大于，。等效性檢驗(yàn)合格，說(shuō)明試驗(yàn)制劑與參比制劑均在規(guī)定的80%～120%范圍內(nèi)，90%置信區(qū)間AUC0→72為%～%，Cmax為%～%。受試制劑相對(duì)于參比制劑的生物利用度為%。Tmax采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)符合要求。因此判定兩制劑具有生物等效性。

3討論

本研究建立的HPLC法測(cè)定伊曲康唑的血漿藥物濃度，色譜條件穩(wěn)定。方法簡(jiǎn)便，特異性高，無(wú)內(nèi)源性物質(zhì)及其他雜質(zhì)干擾，回收率、精密度等符合藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究的要求。

AUC0→72、Tmax、Cmax分別經(jīng)三因素方差分析，周期間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，無(wú)周期間影響。受試制劑和參比制劑的各主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雙單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)制劑與參比制劑為生物等效制劑。

試驗(yàn)結(jié)果中，健康受試者口服伊曲康唑g分散片后，達(dá)峰濃度時(shí)間Tmax為h左右，口服伊曲康唑g膠囊后，達(dá)峰濃度時(shí)間Tmax為h左右，受試制劑Tmax較參比制劑小，符合分散片口服吸收快的特點(diǎn)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］繆海均,劉皋林,惲蕓蕾,等.鹽酸伊曲康唑膠囊的人體生物等效性研究［J］.中國(guó)藥房,2006,17(1):4243.

［2］BaroneJA,KohJG,BiermanRH,etal.Foodinteractionandsteadystatepharmacokineticsofitraconazolecapsulesinhealthymalevoluneteers［J］.AntimicrobAgen