DB 5304T 059-2023 動物疫病監(jiān)測采樣技術規(guī)范

ICS11.220CCSICS11.220CCSB41玉 溪 市 地 方 標 準DB5304/T059—2023動物疫病監(jiān)測采樣技術規(guī)范2023-04-20發(fā)布 2023-07-19實施玉溪市場監(jiān)理局 發(fā)布DB5304/T059DB5304/T059—2023前 言本文按照GB/T1.1—2020《標化作導則 第部分標準文的結和起規(guī)則的起草。本文件由玉溪市動物疫病預防控制中心提出。本文件由玉溪市農業(yè)農村局歸口。本文件起草單位：玉溪市動物疫病預防控制中心I動物疫病監(jiān)測采樣技術規(guī)范范圍本文件適用于獸醫(yī)診斷、疫情監(jiān)測、畜禽疫病防控和免疫效果評價等動物疫病實驗室檢測所需樣品（病料）的采集、保存和運送。（NY/T541 下列術語和定義適用于本文件。3.1動物疫病監(jiān)測調查動物群體中某種疫病或病原的存在情況。3.2樣品取自動物或環(huán)境，擬通過檢測反映動物個體、群體或環(huán)境有關狀況的材料或物品。3.3采樣——急性死亡的患畜，懷疑患有炭疽時，先排除炭疽后，再進行解剖取樣。1～3（（A）。1——用于流行病學調查、抗體監(jiān)測、動物群體健康評估等樣品，數(shù)量、種類、分布等要滿足流行病學調查和生物統(tǒng)計學的要求?！杉劳鰟游锊×?，應于動物死亡后2小時內采集；無法完成時，夏天不得超過6小時，冬天不得超過24小時。——采樣過程應注意無菌操作，所需器具均應事先嚴格滅菌?！铙w動物采樣時，應避免過度刺激或損害動物?！龊脗€人安全防護、環(huán)境消毒和病害肉尸的無害化處理。采樣人員應熟練掌握采樣工作程序和采樣操作技術，做好個人安全防護。保定器（繩）、牛鼻鉗、口籠等。防護服、防護帽、口罩、手套、膠鞋、護目鏡、消毒藥、噴壺等。采樣單、記號筆、簽字筆、不干膠標簽、記錄本等。保存液25%～50%甘油生理鹽水（加雙抗）、阿氏液、PBS液等（附錄C）?！i：前腔靜脈、耳緣靜脈、股靜脈、前肢隱靜脈采血；——禽類：翅靜脈、心臟、頸靜脈采血；——牛、羊、馬：頸靜脈、尾靜脈、耳緣靜脈、乳房靜脈采血；——嚙齒類動物：尾尖采血、眼窩內的血管叢采血。2分離血清的樣品不加抗凝劑，采集全血3~5mL置于采血管中，在室溫（20℃~25℃）靜置，待血液凝固，血清自然析出或進行離心分離，收集備用。若需長時間保存，應將血清置-20℃以下保存，且應避免反復凍融。采樣前樣品容器中加入抗凝劑，充分搖勻，低溫備用?？鼓齽┛捎靡叶匪囊宜幔‥DTA，PCR檢測血樣首選抗凝劑）、0.1%肝素鈉、阿氏液（見附錄C.1，2份阿氏液可抗1份血液）、3.8%～4%枸櫞酸鈉溶液（0.1mL可抗1mL血液）等。全血樣品采集3~5mL。樣品容器內先加入抗凝劑（同全血樣品），采集全血3~5mL后搖勻，然后靜置，待紅細胞自然下沉或離心沉淀后，取上清液即為血漿。以無菌技術采集淋巴結、肝臟、腎、脾、胰腺、心、肺等組織樣品（大約2cm3～5cm3），分別放入滅菌容器或樣品袋內。1010（2cm3～3cm30℃～4用開口器打開豬口腔，將活體采樣器的采樣鉤緊靠扁桃體，扣動扳機取出扁桃體組織2g。2g（25%～50）（C.6）（）3（0.5cm）10g30C.2）5——骨髓：選擇胸骨、肋骨、髁骨、脛骨和股骨等造血功能活躍的骨組織。大動物的骨髓采集用活體穿刺取骨髓的方法；小動物骨頭小難穿刺，只能剖殺后采胸骨、股骨等的骨髓。骨髓樣品不少于5g。35mL～70mL。30mL。O-P（）0.225min，10cm～15cm次～3O-P8mL～10mLO-PC.4）-60精液乳汁3～44用滅菌棉拭子從陰道深部或子宮頸采集分泌物，立即置于無菌肉湯（見附錄C.3）或PBS等溶液內。（（25%～5030PBS采集養(yǎng)殖場（戶）、屠宰加工場所、交易市場等環(huán)境樣品時，用棉拭子在圈舍、飼料槽、排污溝、生產加工環(huán)節(jié)、交通運輸工具等采樣，浸入保存液中，密封低溫保存送檢。用滅菌接種環(huán)經消毒部位插入，提取病料接種在培養(yǎng)基上。采集病變組織、體液等，置載玻片上，火焰或試劑固定，密封保存送檢。內容物30排泄物尿液10mL糞便5選取無腐敗的胚胎、胎兒或胎兒的實質器官裝入適宜容器立即送檢。將整個蟲體放入容器密封送檢。采樣時應清晰標識每份樣品，同時在采樣登記表上填寫相關信息，見附錄B。12h——血清應放于-20℃凍存，全血應放于4℃冰箱中保存?！┘毦鷻z驗的樣品應于4℃保存，或用滅菌后濃度為30%～50%的甘油生理鹽水4℃保存。030%～500℃24h24h（?！獦悠返陌b要防水、防漏、密封性良好?！瑫r提供采樣登記表等。6附錄A（規(guī)范性）主要動物疫病病原學監(jiān)測樣品采集重點動物種類疫病名稱采集重點豬口蹄疫水泡皮，水泡液，淋巴結，扁桃體，脊髓，肌肉非洲豬瘟口鼻拭子，抗凝全血，血清，脾臟，扁桃體，淋巴結，腎臟，骨髓豬瘟抗凝全血，扁桃體，淋巴結，胰臟，脾臟，回腸，肝臟，腎臟高致病性豬藍耳病扁桃體，脾臟，淋巴結，腎臟，肺臟豬細小病毒病流產胎兒、木乃伊胎的實質器官（心、肝、脾、肺、腎），陰道分泌物豬偽狂犬病大腦，三叉神經節(jié)，扁桃體，肝臟，脾臟，肺臟豬圓環(huán)病毒病扁桃體，淋巴結，脾臟，肺臟，抗凝全血，血清（未免）豬囊尾蚴病舌肌，咬肌，內腰肌，膈肌，肩胛肌，腦，心臟，肝臟，肺臟?？谔阋咚萜ぃ菀?，O-P液（食道-咽部分泌物），淋巴結，扁桃體，脊髓牛傳染性胸膜肺炎肺臟，胸腔滲出液，肺門淋巴結牛結節(jié)性皮膚?。ńY痂器上的病變結節(jié)牛傳染性鼻氣管炎眼、鼻、生殖道分泌物，氣管黏膜，扁桃體，肺臟，流產胎兒牛病毒性腹瀉血清，腸粘膜刮取物，肺臟，脾臟，淋巴結，鼻拭子，精液，流產胎兒牛流行熱抗凝全血，脾臟，肝臟，肺臟牛結核病淋巴結，結節(jié)病灶組織，痰，乳，精液，子宮內分泌物，奶，血清羊口蹄疫水泡皮，水泡液，O-P液（食道-咽部分泌物），淋巴結，扁桃體，脊髓小反芻獸疫眼結膜、鼻粘膜、頰部粘膜拭子，肺臟，脾臟，淋巴結羊痘抗凝全血，新鮮病變組織及結痂，淋巴結藍舌病抗凝全血，脾臟，肝臟禽禽流感便，泄殖腔拭子新城疫便，泄殖腔拭子禽白血病全血，血清，血漿，脾臟，肝臟，腎臟禽支原體病鼻、咽、氣管分泌物，肺臟，氣管黏膜雞病毒性關節(jié)炎泄殖腔拭子，肝臟，脾臟，腎臟，水腫的腱鞘、關節(jié)腔內滲出液雞傳染性喉氣管炎鼻、咽、氣管分泌物，氣管黏膜，喉頭，氣管雞傳染性支氣管肺炎鼻、咽、氣管分泌物，氣管黏膜，喉頭，氣管雞傳染性法氏囊法氏囊，腎臟，脾臟禽痘水皰皮，結痂，脾臟馬立克氏病全血，皮膚，皮屑，羽毛尖，脾臟雞白痢全血，糞便，肝臟，脾臟鴨病毒性肝炎全血，肝臟，脾臟其他狂犬病腦組織（大腦海馬回、小腦皮質和延髓各切取1cm3），唾液，血清（未免）7動物種類疫病名稱采集重點支原體病鼻、咽、氣管分泌物，肺臟，氣管黏膜動物球蟲病新鮮糞便流行性乙型腦炎腦，腦脊髓液，睪丸，血清血吸蟲病血清，血紙，糞便，肝臟8附錄B（資料性）采樣登記表養(yǎng)殖場戶名稱地址（含經度和緯度）聯(lián)系人電話飼養(yǎng)動物種類存欄數(shù)飼養(yǎng)批次日齡免疫信息疫苗種類末次免疫時間免疫劑量疫苗生產廠家及批號發(fā)病情況臨床發(fā)病情況（首發(fā)病例日期、臨床癥狀、分布、發(fā)病數(shù)、死亡數(shù)、死亡時間等）解剖病變情況治療情況樣品信息樣品種類樣品數(shù)量樣品編號備注采樣目的：被采樣單位（畜主）簽名（蓋章）：年 月 采樣單位蓋章：采樣人簽名：年 月 日9附錄C（規(guī)范性）常用保存液、固定液的配制阿氏液（Alsever）：2.05g（Na3C6H5O7·2H2O）0.80g（NaCL）0.42g，100mL10pH6.170kPa10min430甘油鹽水緩沖液：甘油30.00mL，氯化鈉（NaCL）4.20g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）%酚紅100mLpH7.6，100kPa15min肉湯:3.50g10.00g（NaCL）5.00g100kPa20min40.01mol/LPBS（pH7.4）（NaCL）8.00g（KH2PO4