機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷課件

機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷掌握缺血再灌注損傷模型的復(fù)制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的區(qū)別觀察缺血再灌注損傷的表現(xiàn)，理解缺血再灌注損傷發(fā)生的機制

【目的要求】觀察缺血再灌注損傷的表現(xiàn)，理解缺血再灌注損傷發(fā)生的機制兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴(yán)重（3）再灌注是否通暢？兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水排凈氣泡，記錄前應(yīng)關(guān)閉三通管（1）活性氧的作用）頸部正中切口行動脈插管Ⅰ組：結(jié)扎→BP↑→BP↓趨于平穩(wěn)（相似于結(jié)扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水腹正中線自劍突下1.排盡氣泡，速度不宜太快兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【結(jié)果不明顯可能存在的問題】舌頭無回收，四肢松軟【實驗動物】

家兔

【實驗器材】兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【實驗設(shè)計原理】通過腸系膜上動脈結(jié)扎，即SMAO(SuperiorMesenteryArteryOcclusion)來阻斷部分腸的血液供應(yīng)一段時間后再恢復(fù)血流灌注，以復(fù)制腸缺血/再灌注損傷的動物模型，探討缺血/再灌注損傷的發(fā)生機制排盡氣泡，速度不宜太快機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm②峰表示：松開腸系膜上A→血管床容量↑→有效循環(huán)血量相對→BP↓升壓反射（再灌注損傷還未來得及發(fā)生）有時②峰不出現(xiàn)，BP↓直到死亡排凈氣泡，記錄前應(yīng)關(guān)閉三通管Ⅱ組：結(jié)扎→BP↑→BP↓趨于平穩(wěn)（機體自身調(diào)節(jié)）→再灌→BP↓，腸壁暗紅、水腫、出血點BP低于正常>1/2時→休克夾閉腸系膜上動脈1hⅠ組：結(jié)扎→BP↑→BP↓趨于平穩(wěn)（相似于結(jié)扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復(fù)血流30min頸部正中切口行動脈插管排盡氣泡，速度不宜太快插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；頸部正中切口行動脈插管兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復(fù)血流30minⅠ組：持續(xù)缺血組夾閉腸系膜上動脈1hⅡ組：再灌損傷組夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復(fù)血流30min

【實驗分組】【實驗方法與步驟】1.稱重2.全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）★注意：從耳緣靜脈的遠(yuǎn)心端開始注射，排盡氣泡，速度不宜太快★麻醉效果：角膜反射基本消失，鉗夾家兔舌頭無回收，四肢松軟舌頭無回收，四肢松軟腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結(jié)扎時注意墊橡皮管，恢復(fù)血流灌流（復(fù)流）要完全※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴(yán)重頸部正中切口行動脈插管長約2-3cm，穿線備用插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；先結(jié)扎遠(yuǎn)心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠(yuǎn)心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.（1）活性氧的作用）兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水排盡氣泡，速度不宜太快（3）再灌注是否通暢？兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）排凈氣泡，記錄前應(yīng)關(guān)閉三通管3.仰臥固定（背部交叉）、備皮頸部正中（甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡）腹部正中（劍突下1.5cm起向下5cm）★注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！4.頸部正中切口行動脈插管切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm分離左側(cè)頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內(nèi)，與氣管平行，顏色鮮紅、較細(xì)、觸之有搏動感，長約2-3cm，穿線備用注意：（1）鈍性分離（2）辨清頸A鞘內(nèi)的血管神經(jīng)血管插管先結(jié)扎遠(yuǎn)心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠(yuǎn)心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.5cm【插管的注意事項】插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡，記錄前應(yīng)關(guān)閉三通管插管易滑脫，應(yīng)雙線固定，結(jié)扎牢靠勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血管5.腹部正中切口：腹正中線自劍突下1.5cm起向下做5cm切口※6.尋找腸系膜上動脈：

將家兔腹腔內(nèi)臟左移，找到齊右腎門對側(cè)垂直向腹主動脈分出的腸系膜上動脈，穿雙線備用，注意避免損傷其他血管（缺血再灌注夾閉時注意墊橡皮管）7.記錄一段正常血壓曲線8.復(fù)制腸缺血-再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標(biāo)變化。9.分組進(jìn)行實驗并記錄各項指標(biāo)。（Ⅰ組：夾閉腸系膜上動脈1hⅡ組：夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復(fù)血流30min）腸系膜上動脈示意圖全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）排盡氣泡，速度不宜太快先結(jié)扎遠(yuǎn)心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠(yuǎn)心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.頸部正中切口行動脈插管（1）實驗過程中是否發(fā)生了大血？（1）活性氧的作用）頸部正中切口行動脈插管分離左側(cè)頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內(nèi)，與腹部正中（劍突下1.切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm較細(xì)、觸之有搏動感，腹正中線自劍突下1.※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴(yán)重（1）活性氧的作用）5cm起向下做5cm切口1.移動內(nèi)臟時，動作要輕柔2.分離腸系膜上A時需小心細(xì)致，不要使用銳利器械，以免損傷血管造成大出血3.腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結(jié)扎時注意墊橡皮管，恢復(fù)血流灌流（復(fù)流）要完全【注意事項】【結(jié)果分析】①峰表示：結(jié)扎腸系膜上A→血管床容量↓→有效循環(huán)血量相對↑→BP↑壓力感受器(+)減壓反射→BP↓②峰表示：松開腸系膜上A→血管床容量↑→有效循環(huán)血量相對→BP↓升壓反射（再灌注損傷還未來得及發(fā)生）有時②峰不出現(xiàn)，BP↓直到死亡③血壓持續(xù)下降，有再灌注損傷Ⅰ組：結(jié)扎→BP↑→BP↓趨于平穩(wěn)（相似于結(jié)扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點Ⅱ組：結(jié)扎→BP↑→BP↓趨于平穩(wěn)（機體自身調(diào)節(jié)）→再灌→BP↓，腸壁暗紅、水腫、出血點BP低于正常>1/2時→休克※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴(yán)重【典型結(jié)果】基本消失，鉗夾家兔兔手術(shù)臺、BL-420生物信息采集系統(tǒng)、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術(shù)器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水仰臥固定（背部交叉）、備皮腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結(jié)扎時注意墊橡皮管，恢復(fù)血流灌流（復(fù)流）要完全【結(jié)果不明顯可能存在的問題】插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；★注意：從耳緣靜脈的遠(yuǎn)心端開始注射，復(fù)制腸缺血-再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標(biāo)變化?！?、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴(yán)重（3）白細(xì)胞的作用）夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復(fù)血流30min分離左側(cè)頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內(nèi)，與（1）實驗過程中是否發(fā)生了大血？插管內(nèi)事先應(yīng)加入少量肝素以防凝血；將家兔腹腔