03-LCMS定量分析操作步驟V2

一．外標(biāo)法1．打開(kāi)Postrun--------再解析窗口2．打開(kāi)數(shù)據(jù)文件--------鼠標(biāo)雙擊數(shù)據(jù)文件3．打開(kāi)方法編輯器---------將MethodView窗口由View切換到Edit4．積分參數(shù)設(shè)置---------在Integration窗口進(jìn)行基本參數(shù)編輯MaxPeak表示每個(gè)通道積分的最大峰數(shù)目，MRM通道中一般設(shè)置1；Width表示積分的寬度，一般峰形很窄時(shí)，可以適當(dāng)改?。ɡ?sec），峰形很寬時(shí)，可以適當(dāng)改大（例如10sec，15sec）；Slope、Drift、T.DBL值采用Auto（Area）模式，不能進(jìn)行設(shè)置，如需設(shè)置，需要更改為Advanced；Min.表示設(shè)置最小峰面積的閾域值，低于此面積不進(jìn)行積分。平滑參數(shù)設(shè)置方面，通常采用Standard，Counts1，Width1，如在色譜峰毛刺較多，需要適當(dāng)增大平滑參數(shù)，例如Counts2，Width2。如果MRM通道為多個(gè)通道，對(duì)每個(gè)通道的積分參數(shù)進(jìn)行編輯，需要將通道狀態(tài)由No（UseDefault）改為Yes，此時(shí)這個(gè)MRM通道可進(jìn)行積分參數(shù)的單獨(dú)設(shè)定，并且可單擊Program按鈕，在彈出的對(duì)話框中可進(jìn)行手動(dòng)積分，并且可以進(jìn)行積分關(guān)閉和開(kāi)啟（IntegrationIntergrationOff/On）。5．Identification選項(xiàng)卡標(biāo)簽用于對(duì)保留時(shí)間偏差進(jìn)行定義，此時(shí)務(wù)必將右邊的UsereferenceIons勾選去除。Identification窗口可以使用Window或者Band，指目標(biāo)化合物的識(shí)別窗口，一般保留時(shí)間比較穩(wěn)定，5%的識(shí)別窗口即可使用，若色譜峰漂移飄移，需要根據(jù)需要將范圍放寬。注：如果需要設(shè)定參比離子定性功能，請(qǐng)確定UseReferenceIons勾選上。6．Quantitative選項(xiàng)卡標(biāo)簽用于定義定量計(jì)算的參數(shù)，例如此處用外標(biāo)法（ExternalStandardStantard），峰面積計(jì)算，校準(zhǔn)曲線的點(diǎn)數(shù)（level，即配制的標(biāo)準(zhǔn)品的濃度個(gè)數(shù)），曲線的類型等。Zero表示是否強(qiáng)制過(guò)原點(diǎn)，建議通過(guò)回歸后的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)回讀值準(zhǔn)確度（Accuracy%）選擇合適的方式；WeightingMethod表示是否需要使用權(quán)重，通常使用1/C和1/C^2，也是通過(guò)相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)回讀值準(zhǔn)確度來(lái)確認(rèn)。7．編輯Compound表1）輸入化合物的名稱并選擇m/z注：如果無(wú)法選出m/z，請(qǐng)確認(rèn)Event顯示的數(shù)字與采集方法中該化合物的Event號(hào)碼一致，如果不一致，請(qǐng)手動(dòng)修改序號(hào)，保證一致。2）鼠標(biāo)左擊保留時(shí)間單元格，然后在ChromatogramView窗口中的色譜圖上，左擊化合物A的色譜峰的峰頂，則保留時(shí)間自動(dòng)添加到Compoundtable中。輸入化合物的濃度參考1）-3）將其他化合物的信息輸入進(jìn)去（注意??！每個(gè)化合物都有自己的Event，務(wù)必將其相應(yīng)的Event輸入正確）所有信息都填寫(xiě)完畢后，點(diǎn)擊View，應(yīng)用并保存數(shù)據(jù)。另存方法為數(shù)據(jù)后處理方法，將方法名字可設(shè)置為區(qū)別于采集方法的文件名。打開(kāi)Postrun-------瀏覽器窗口9．選擇助手欄中Main-------QuantBrowserBrower,窗口如下：10．打開(kāi)方法文件，選擇前面編輯好的方法文件或者已經(jīng)編輯好的定量方法文件；若為初次打開(kāi)的定量方法文件，打開(kāi)的窗口如下圖3所圖3,4在圖中沒(méi)有標(biāo)注示；如果此方法文件在瀏覽器窗口打開(kāi)過(guò)，并且定義了標(biāo)準(zhǔn)曲線后保存，再次打開(kāi)定量方法時(shí)，窗口如圖4所示，方法中將包含標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果直接使用該標(biāo)準(zhǔn)曲線，后續(xù)直接將數(shù)據(jù)拖入，如果需要更換標(biāo)準(zhǔn)曲線，將QuantitativeResultsView窗口的所有行選中，鼠標(biāo)右鍵Remove即可。圖3,4在圖中沒(méi)有標(biāo)注將數(shù)據(jù)文件選中并拖入QuantitativeResultsView窗口編輯QuantitativeResultsQuantativeReasultsView窗口參數(shù)。將標(biāo)準(zhǔn)品的Level，濃度從小到大依次填充為1,2,3,4……2）將標(biāo)準(zhǔn)樣品的SampleType修改為standard(Calc.point)，校準(zhǔn)曲線自動(dòng)生成。如果沒(méi)有找到SampleType，鼠標(biāo)右擊，選擇Tablestyle，再在雙擊隱藏項(xiàng)目中的SampleType，OK即可?？稍跇?biāo)曲圖上鼠標(biāo)右鍵查看CalibrationInformation，可以看到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)等。查看標(biāo)準(zhǔn)曲線回讀值的準(zhǔn)確度，如下圖，如果有標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)準(zhǔn)確度超過(guò)接受范圍，可以將Cal.Point上的勾去掉，代表該濃度點(diǎn)不參與回歸。3）如果需要設(shè)定Control樣品，將質(zhì)控樣品類型修改為Control，設(shè)定對(duì)應(yīng)的Level水平，可由軟件直接計(jì)算Control樣品的準(zhǔn)確度。

二．內(nèi)標(biāo)法1.打開(kāi)Postrun-----再解析窗口2.2）打開(kāi)數(shù)據(jù)文件--------鼠標(biāo)雙擊數(shù)據(jù)文件3．打開(kāi)方法編輯器---------將MethodView窗口由View切換到Edit4．積分參數(shù)設(shè)置---------在Integration窗口進(jìn)行基本參數(shù)編輯MaxPeak表示每個(gè)通道積分的最大峰數(shù)目，MRM通道中一般設(shè)置1；Width表示積分的寬度，一般峰形很窄時(shí)，可以適當(dāng)改?。ɡ?sec），峰形很寬時(shí)，可以適當(dāng)改大（例如10sec，15sec）；Slope、Drift、T.DBL值采用Auto（Area）模式，不能進(jìn)行設(shè)置，如需設(shè)置，需要更改為Advanced；Min.表示設(shè)置最小峰面積的閾域值，低于此面積不進(jìn)行積分。平滑參數(shù)設(shè)置方面，通常采用Standard，Counts1，Width1，如在色譜峰毛刺較多，需要適當(dāng)增大平滑參數(shù)，例如Counts2，Width2。如果MRM通道為多個(gè)通道，對(duì)每個(gè)通道的積分參數(shù)進(jìn)行編輯，需要將通道狀態(tài)由No（UseDefault）改為Yes，此時(shí)這個(gè)MRM通道可進(jìn)行積分參數(shù)的單獨(dú)設(shè)定，并且可單擊Program按鈕，在彈出的對(duì)話框中可進(jìn)行手動(dòng)積分，并且可以進(jìn)行積分關(guān)閉和開(kāi)啟。5．Identification標(biāo)簽用于對(duì)保留時(shí)間偏差進(jìn)行定義，此時(shí)務(wù)必將右邊的UsereferenceIons勾選去除。Identification窗口可以使用Window或者Band，指目標(biāo)化合物的識(shí)別窗口，一般保留時(shí)間比較穩(wěn)定，5%的識(shí)別窗口即可使用，若色譜峰漂移飄移，需要根據(jù)需要將范圍放寬。注：如果需要設(shè)定參比離子定性功能，請(qǐng)確定UseReferenceIons勾溝選上。6．Quantitative標(biāo)簽用于定義定量計(jì)算的參數(shù)，例如此處用內(nèi)標(biāo)法（InternalStandardStantard），峰面積計(jì)算，校準(zhǔn)曲線的點(diǎn)數(shù)（Level，即配制的標(biāo)準(zhǔn)品的德濃度個(gè)數(shù)），曲線的類型等。Zero表示是否強(qiáng)制過(guò)原點(diǎn)，建議通過(guò)回歸后的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)回讀值準(zhǔn)確度選擇合適的方式；WeightingMethod表示是否需要使用權(quán)重，通常使用1/C和1/C^2，也是通過(guò)相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)回讀值準(zhǔn)確度來(lái)確認(rèn)。7．編輯Compound表1）輸入化合物的名稱并選擇m/z注：如果無(wú)法選出m/z，請(qǐng)確認(rèn)Event顯示的數(shù)字與采集方法中該化合物的Event號(hào)碼一致，如果不一致，請(qǐng)手動(dòng)修改序號(hào)，保證一致。對(duì)于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)（在此假設(shè)為化合物B為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，將B的Type修改為ISTD，濃度均設(shè)為1）注意！！ISTDGroup：當(dāng)存在多個(gè)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的時(shí)候，在此將內(nèi)標(biāo)物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行分組，假設(shè)化合物B是化合物A的內(nèi)標(biāo),化合物D為化合物C的內(nèi)標(biāo)，則化合物A,B的ISTDGroup設(shè)為1，C和D的設(shè)為2.2）鼠標(biāo)左擊保留時(shí)間單元格，然后在ChromatogramView窗口中的色譜圖上，左擊化合物GA8的色譜峰的峰頂，則保留時(shí)間自動(dòng)添加到Compoundtable中。3)輸入化合物的濃度，內(nèi)標(biāo)濃度輸入14)參考1）-3）將其他化合物的信息輸入進(jìn)去（注意??！每個(gè)化合物都有自己的Event，務(wù)必將其相應(yīng)的Event輸入正確）5)所有信息都填寫(xiě)完畢后，點(diǎn)擊View，應(yīng)用并保存數(shù)據(jù)。6)另存方法為數(shù)據(jù)后處理方法，將方法名字可設(shè)置為區(qū)別于采集方法的文件名。8.打開(kāi)postrun-------瀏覽器窗口9．選擇助手欄中Main-------QuantBrowserBrower,窗口如下：10．打開(kāi)方法文件，選擇前面編輯好的方法文件或者已經(jīng)編輯好的定量方法文件；若為初次打開(kāi)的定量方法文件，打開(kāi)的窗口如下圖3所示；如果此方法文件在瀏覽器窗口打開(kāi)過(guò)，并且定義了標(biāo)準(zhǔn)曲線后保存，再次打開(kāi)定量方法時(shí)，窗口如圖4所示，方法中將包含標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果直接使用該標(biāo)準(zhǔn)曲線，后續(xù)直接將數(shù)據(jù)拖入，如果需要更換標(biāo)準(zhǔn)曲線，將QuantitativeResultsView窗口的所有行選中，鼠標(biāo)右鍵Remove即可。11.將數(shù)據(jù)文件選中并拖入QuantitativeResultsView窗口12.編輯QuantativeReasultsView窗口參數(shù)。將標(biāo)準(zhǔn)品的Level，濃度從小到大依次填充為1,2,3,4……2）將標(biāo)準(zhǔn)樣品的SampleType修改為Standard(Calc.point)，校準(zhǔn)曲線自動(dòng)生成。如果沒(méi)有找到SampleType，鼠標(biāo)右擊，選擇Tablestyle，在雙擊隱藏項(xiàng)目中的S