體驗制備細胞膜的方法教學設計,DOC

海量資源，歡迎共閱海量資源，歡迎共閱體驗制備細胞膜的方法教學設計背景資料生物膜的研究發(fā)展迅速。要研究生物膜的組成、結(jié)構(gòu)及功能，首先必須分離出純凈的細胞膜。分離得到的哺乳動物的紅細胞膜，一般稱為“血影”。哺乳動物成熟的紅細胞中沒有一般真核細胞所具有的細胞核和細胞器，容易用它制備純凈的細胞膜。此外，哺乳動物的血液也比較容易獲得，因而是研究細胞膜的理想材料。從哺乳動物的紅細胞中分離細胞膜，第一步是將血液收集在加有抗凝劑的容器內(nèi)，用低速離心的方法從血液中分離出紅細胞，然后用等滲緩沖液反復洗滌，經(jīng)多次離心，去除血漿。第二步是在紅細胞中加入低滲緩沖液，由于低滲溶液的作用，大量水分進入細胞，使紅細胞脹破而溶血。第三步是將溶血的紅細胞反復而充分地高速離心、洗滌，去除血紅蛋白和其他的細胞內(nèi)含物，最終獲得比較純凈的紅細胞膜。1.材料新鮮的哺乳動物血液2．用具離心機，離心管，滴管，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸水紙，小燒杯。3.試劑檸檬酸鈉或肝素（抗凝劑），生理鹽水（質(zhì)量分數(shù)為0.9%的NaCl溶液），蒸餾水或清水。4．操作要點教師在實驗前做以下準備工作。準備一定量的新鮮的哺乳動物血液，如羊血或豬血，在冰箱中靜置一晝夜。用滴管將上清液吸去。再吸取1mL的沉淀物，放入離心管中，加入生理鹽水2mL，在2000r/min條件下離心5min。去除上清液，在沉淀中再加入生理鹽水2mL，再離心一次，去除上清液，留沉淀備用。以上操作的目的是洗去血漿成分，避免血漿對血細胞的緩沖作用，從而使紅細胞的溶血現(xiàn)象更加明顯。學生的實驗操作如下。(1)取一個5mL的小燒杯，加入生理鹽水2?3mL。(2)用滴管在沉淀的下層吸取一小滴血細胞，滴入小燒杯的生理鹽水中，以達到稀釋紅細胞的目的，以免觀察時，由于細胞密度太大，影響觀察效果。(3)取另一個滴管，在小燒杯中輕輕攪拌，然后吸取少量的血細胞稀釋液，在載玻片的中央滴很小的一滴，加蓋玻片。(4)先在低倍鏡下觀察紅細胞的正常形態(tài)，可見其邊緣完整發(fā)亮。(5)在蓋玻片的一側(cè)加一滴蒸餾水或清水，在另一側(cè)非常小心地用吸水紙慢慢地吸引，防止把紅細胞全部吸入吸水紙中而影響觀察。邊加水邊觀察，注意紅細胞的形態(tài)變化。紅細胞會隨著水流向一側(cè)漂移，觀察時注意移動玻片。紅細胞體積逐漸變大，變得非常鼓脹，在視野中可以找到少數(shù)脹破的紅細胞，它們已失去完整發(fā)亮的邊緣，變成彌散狀。5．需要注意的幾個問題(1)制作臨時裝片時，紅細胞必須稀釋，而且取紅細胞的量要少。(2)在高倍鏡下觀察，待觀察清晰時，在蓋玻片的一側(cè)滴加蒸餾水，同時在另一側(cè)用吸水紙吸引。上述操作均在載物臺上進行，并隨時調(diào)整鏡筒高度，持續(xù)觀察細胞的變化。在蓋玻片一側(cè)滴加蒸餾水的量要少，不能讓蓋玻片處于漂浮狀態(tài)；同時在另一側(cè)用吸水紙吸引時要小心，不要將血細胞吸走。(3)要想取得好的觀察效果，所用顯微鏡的放大倍數(shù)應在400倍以上。(4)操作中要認真觀察才能看到連續(xù)的變化過程。具體教學步驟1．分析實驗原理【提問引入】科學家要研究細胞膜，首先要解決的問題，是獲得相應的實驗材料，即細胞膜。用哪種細胞來制備細胞膜比較合適呢？為什么？【請學生討論】。根據(jù)學生回答的情況，加以歸納總結(jié)?？茖W家發(fā)現(xiàn)，哺乳動物成熟的紅細胞中沒有細胞核，而且細胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)也比其他真核細胞簡單得多，是制備細胞膜的理想材料?！具M一步提問】怎樣才能獲得純凈的細胞膜呢？直接剝離可以嗎？有沒有間接的方法？根據(jù)學生的回答，肯定溶血的方法。再進一步提問，如何將細胞膜與細胞其他成分分離開？引導學生了解離心技術(shù)的應用。由于細胞膜非常薄，通常要在5000r/min及9000r/min條件下反復離心多次，才能得到純凈的細胞膜。由于時間和條件的限制，我們在課上只用顯微鏡來觀察紅細胞溶血前后細胞邊界的變化，以此來體驗細胞膜的存在，并對細胞膜的制備方法有一個初步的體驗。2．明晰實驗步驟讓學生討論，設計具體的實施步驟。教師對學生設計的步驟進行補充完善。具體實施步驟參見“操作指南”。關(guān)于操作要點和難點，可以提出以下問題引發(fā)學生思考。例如，在載玻片上滴加的血細胞多些好還是少些好？在蓋玻片另一側(cè)用吸水紙吸引時，要注意什么？如何把握觀察溶血后的紅細胞的最好時機？教師針對問題，指出操作要點并講明原因。.分組實驗學生進行分組實驗，教師給予具體的指導和評價。.展示和討論實驗結(jié)果可以把教材中紅細胞溶血前后的照片在投影上展示。根據(jù)學生分組實驗的情況，教師作講解。實驗反思1.本實驗中可以考查學生的基本實驗技能有：臨時裝片的制作，顯微鏡的使用等。2．關(guān)于實驗結(jié)果的評價。如果實驗成功，可以看到近水部分的部分紅細胞體積增大，很快會看到紅細胞的邊緣變得不清晰，呈彌散狀。3.影響實驗結(jié)果的因素可能有以下幾個方面。（1）紅細胞發(fā)生溶血的比例與操作是否得當有關(guān)。（2）顯微鏡使用是否熟練。（3）是否認真、連續(xù)地觀察。教學反思（1教師在進行實