實驗動物 SPF豬剖腹產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

實驗動物SPF豬剖腹產(chǎn)技術(shù)規(guī)范范圍本標準規(guī)定了實驗豬的選擇、手術(shù)前準備與消毒、XX與麻醉、剖腹產(chǎn)手術(shù)、術(shù)后護理和母豬恢復(fù)標準等。本標準適用于利用生物學(xué)凈化方法提高實驗豬質(zhì)量，對包括普通級豬、SPF豬等實驗豬實施剖腹產(chǎn)手術(shù)的操作。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB14925實驗動物環(huán)境及設(shè)施GB/T22914SPF豬病原的控制與監(jiān)測GB/T27416實驗動物質(zhì)量和能力的通用要求GB/T34791實驗動物質(zhì)量控制要求GB/T35823實驗動物動物實驗通用要求GB/T35892實驗動物福利倫理審查指南DB23/T1674無特定病原體豬微生物學(xué)監(jiān)測技術(shù)規(guī)范DB23/T2057.9實驗動物豬寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測原理胎盤是由母體和胎兒的組織共同構(gòu)成，根據(jù)胎盤結(jié)構(gòu)特點和母胎界面的連接方式將胎盤分為4類，豬胎盤屬于非蛻膜彌散型上皮絨毛膜胎盤，是由絨毛膜血管內(nèi)皮、絨毛膜間充質(zhì)、絨毛膜上皮、子宮內(nèi)膜上皮、子宮內(nèi)膜結(jié)蹄組織和母體血管內(nèi)皮6層組織形成胎盤屏障，它是維系胎兒和母體之間物質(zhì)轉(zhuǎn)運、氣體交換與血液循環(huán)的唯一部位，同時能夠阻止部分細菌、病毒等微生物和毒物從母體傳給胎兒。剖腹產(chǎn)技術(shù)是依據(jù)胎盤具有屏障作用，可阻止一些病原微生物侵入，采取無菌剖腹產(chǎn)手術(shù)，截斷了某些母胎傳播疾病的途徑，并且可以去除經(jīng)產(chǎn)道傳播的某些細菌和皰疹病毒等病原體，是進行“生物凈化”維持種群微生物級別的有效手段，也是提高現(xiàn)有實驗動物質(zhì)量和產(chǎn)量，保證科研成功的有效措施。實驗豬的選擇妊娠母豬應(yīng)來源于臨床上無經(jīng)胎盤垂直傳播的疾病，即豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、細小病毒病癥狀的豬場。不宜選擇初產(chǎn)和第六胎以上妊娠母豬，并現(xiàn)場采集樣本，檢測豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟和豬偽狂犬病三種主要疾病：豬繁殖與呼吸綜合征檢查血清抗體；豬瘟為扁桃體活體采樣，檢查野毒感染情況；豬偽狂犬病檢測感染抗體。妊娠母豬是SPF豬，按GB/T22914、DB23/T1674、DB23/T2057.9進行微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)檢測，質(zhì)量符合GB/T35823。預(yù)產(chǎn)期前一周觀察母豬分娩征兆，盡量接近自然順產(chǎn)時間施行手術(shù)。手術(shù)前準備與消毒器械常規(guī)腹腔手術(shù)器械2套（手術(shù)刀、止血鉗、鑷子、剪刀剪、手術(shù)剪刀、持針鉗、拉鉤、縫針、縫合線）、脊髓穿刺針、開口器、喉鏡、紗布、毛巾、20mL金屬注射器、綁定繩等，使用前高壓或干烤滅菌；5mL、10mL一次性注射器。設(shè)備手術(shù)臺、麻醉呼吸機、監(jiān)護設(shè)備、保暖設(shè)備、隔離器等。藥品麻醉藥品小型豬復(fù)合麻醉劑、丙泊酚注射液（10mL，100mg）、異氟烷（100mL/瓶）、鹽酸利多卡因（5mL，100mg）。急救藥品腎上腺素注射液、尼可剎米注射液、阿托品注射液、納洛酮注射液。常用藥品5%碘酊、75%酒精棉、5%新潔爾滅消毒液、過氧乙酸溶液、生理鹽水、5%葡萄糖注射液、注射用青霉素、注射用鏈霉素。手術(shù)室手術(shù)室使用前應(yīng)進行檢測，符合GB14925、GB34791的要求方可使用。屏障豬舍屏障豬舍使用前應(yīng)進行檢測，符合GB14925、GB34791的要求方可使用。XX與麻醉XX母豬采用側(cè)臥XX，固定頭及四肢，XX后，以溫水沖洗體表，擦干；將腹部全部涂抹碘伏消毒。麻醉麻醉方法麻醉方法主要為復(fù)合麻醉，包括誘導(dǎo)麻醉和維持麻醉及局部麻醉。誘導(dǎo)麻醉6.2.2.1手術(shù)前12h禁食，麻醉前記錄實驗豬的生理指標（體溫、呼吸頻率、心率、脈搏、黏膜顏色和毛細血管再充盈時間CRT）；6.2.2.2麻醉前需檢查呼吸麻醉設(shè)備（直流呼末二氧化碳探頭需提前預(yù)熱）及監(jiān)護設(shè)備的功能完整性以及麻醉機的氣密性，以保證麻醉的順利進行；6.2.2.3麻醉前準備工作做好后，預(yù)吸氧3-5min（3L/min），經(jīng)耳緣靜脈推注小型豬復(fù)合麻醉劑（0.02mL/kg），5-10min后，再經(jīng)耳緣靜脈推注丙泊酚，至效。維持麻醉開口器/人工打開豬上下頜，使用喉鏡找到聲門及氣管入口，將帶直針合適型號的氣管插管插入，連接回路，氧流量3L/min，揮發(fā)罐3-5%，連接監(jiān)護探頭（血氧、心電、體溫、呼末CO2和血壓），每隔5min監(jiān)測一次生理指標，記錄于麻醉記錄表。局部麻醉硬膜外腔麻醉+切口線性阻滯醉：用脊髓穿刺針經(jīng)腰薦結(jié)合處進入硬膜外腔后，推注利多卡因（0.2mg/kg）。手術(shù)切口可使用利多卡因（0.2mg/kg）進行線性阻滯。剖腹產(chǎn)手術(shù)術(shù)部選擇腹側(cè)切開法：從髖結(jié)節(jié)之下約10cm處，在膝皮皺襞之前，向下向前做一與腹內(nèi)斜肌纖維方向相同的切口，長20cm左右。下腹部切開法：在最后3個乳頭外側(cè)5cm左右處做切口，長20cm左右。術(shù)部消毒待實驗豬不動時，對術(shù)部大面積剃毛，用清水沖洗，再次用碘伏消毒液在術(shù)部及其周圍連續(xù)消毒，用75%酒精脫碘。剖腹產(chǎn)手術(shù)術(shù)部切開，出血用止血鉗止血，皮膚銳性切開，鈍性分離皮下組織，分離腹直肌及腹膜，直至腹腔，充分暴露子宮。助手按住切開部位，防止內(nèi)臟滑出切口外。將左右2個子宮角牽引至切口外，不宜牽出過多，防止子宮血管受壓迫影響胎兒血液供應(yīng)。檢查量子宮角內(nèi)胎兒數(shù)量及分布位置，兩側(cè)子宮角中都有胎兒，且能暴露子宮角基部，僅在基部做一切口；兩側(cè)胎兒均較多，不能暴露子宮角基部，應(yīng)在兩個子宮角的中段做2個切口。切口選在子宮大彎，靠近子宮體的背側(cè)血管相對少處，切開子宮壁5-8cm，順序小心取出胎兒，結(jié)扎臍帶，碘酊涂擦斷端，并用毛巾迅速將胎兒口腔、鼻腔內(nèi)粘液擦凈，擦干身體。反復(fù)按摩體表，做身軀屈伸運動，進行人工呼吸，稱重，至于保溫箱哺育。清點胎兒數(shù)量和胎盤數(shù)量，檢查兩側(cè)子宮角內(nèi)有無殘留胎兒，待清理干凈后，依次縫合左右子宮角（切口第一次連續(xù)縫合，然后內(nèi)翻縫合）。用35℃溫生理鹽水（內(nèi)加20IU抗生素）進行子宮沖洗，不要將沖洗液流入腹腔內(nèi)，然后將子宮納入腹腔；再順次縫合腹膜、各肌肉層，并布撒青、鏈霉素；皮膚切口作結(jié)節(jié)縫合，關(guān)閉腹腔切口，術(shù)后注射催產(chǎn)素，以促進子宮收縮及復(fù)舊。剖腹產(chǎn)手術(shù)的母豬在手術(shù)過程中耳靜脈輸入5%葡萄糖注射液。子宮摘除取胎術(shù)術(shù)部切開，打開腹腔，將子宮牽引至腹腔外，全部牽出后，用力抓住子宮頸部隔斷，迅速將輸卵管、子宮頸結(jié)扎，然后全子宮摘除，將子宮放入預(yù)先放置1%過氧乙酸的滅菌渡槽中消毒10-20s，30s內(nèi)將子宮傳送進搶救室。剪破子宮壁，伸進二指把切口迅速撕開，迅速取出胎兒。每取出一個胎兒，在臍帶2cm左右部位用縫合線結(jié)扎、斷臍，用毛巾迅速將其口腔、鼻腔內(nèi)的粘液清除，擦干全身，輔助仔豬呼吸，稱重，至于保溫箱哺育。從子宮結(jié)扎到取出仔豬的過程應(yīng)該迅速，最好時間控制在5min內(nèi)。母豬按照GB/T35823要求實施安死術(shù)。術(shù)后護理飼喂術(shù)后母豬應(yīng)單獨飼養(yǎng)，次日應(yīng)給母豬注射催產(chǎn)素2mL，以排除胎衣，給予容易消化、營養(yǎng)豐富的流質(zhì)