RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告

RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告...用2-△△Ct法分析real-timePCR數(shù)據(jù)-----聯(lián)合應(yīng)用LightCyclerDataAnalysis軟件和MSExcelBynetmee，netmee163.引用請(qǐng)注明作者。1、打開存取的數(shù)據(jù)文件，點(diǎn)擊2、依次點(diǎn)擊，，這是適合SYBRgreen為染料的選項(xiàng)。點(diǎn)擊step1：Baseline下的“changegraphsettings”小圖標(biāo)。取消彈出的CustomizeGraph選項(xiàng)卡中的Logarithmis選項(xiàng)，點(diǎn)擊“OK”按鈕，退出選項(xiàng)卡。3、點(diǎn)擊下的“changegraphsettings”小圖標(biāo)，取消彈出的CustomizeGraph選項(xiàng)卡中的Logarithmis選項(xiàng)，點(diǎn)擊“OK”按鈕，退出選項(xiàng)卡。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第1頁(yè)。4、在選項(xiàng)卡中拖動(dòng)紅色標(biāo)記線，選取個(gè)條曲線都為直線上升部位。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第1頁(yè)。5、可以在選項(xiàng)卡中觀察是否需選取的是曲線直線上升部分。觀察綠線部分與S型曲線交叉的部分是否為直線。6、如果確為直線，則左側(cè)的“CrossingPoint”值為所需要的Ct值。

RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第2頁(yè)。7、依次選取下圖菜單：將數(shù)據(jù)導(dǎo)出為文本文件。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第2頁(yè)。8、打開所保存的文本文件，如圖選取RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第3頁(yè)。9、將數(shù)據(jù)粘貼入新建的excel文件，“CrossingPoint”列即是Ct值，刪除“Standard”和“CalculatedConcentration”列。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第3頁(yè)。10、將目的基因，本例中為“iNOS”的Ct值按標(biāo)本對(duì)應(yīng)剪切入beta-actin值右側(cè)一列。分別標(biāo)記兩列數(shù)據(jù)為“beta-actin”和“iNOS”。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第4頁(yè)。11、設(shè)置所有Ct值的單元格格式RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第4頁(yè)。12、數(shù)字選項(xiàng)卡，分類選擇為數(shù)值，點(diǎn)擊確定。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第5頁(yè)。13、將E列（目的基因Ct值右側(cè)一列）輸入公式“=D4-C4”，求出目的基因與同管beta-actinCt值之差，即△RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第5頁(yè)。14、向下拉復(fù)制公式，將△Ct列數(shù)值計(jì)算出。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第6頁(yè)。15、在△Ct列右側(cè)一列插入公式“=POWER(2,(0-E4))”，此即目的基因相對(duì)beta-actin的相對(duì)表達(dá)量，即2-△Ct（2的-△Ct次方）。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第6頁(yè)。16、在2-△Ct列右側(cè)插入公式“=F4/$F$4”，此列即“2-△△Ct”列，復(fù)制公式填滿所有標(biāo)本對(duì)應(yīng)的2-△△Ct空格。RT-PCR數(shù)據(jù)分析報(bào)告全文共8頁(yè)，當(dāng)前為第7頁(yè)。17、至此，2-△△Ct法計(jì)算的各標(biāo)本目的基因的相對(duì)表達(dá)量完成，2-△△Ct列的數(shù)據(jù)可以用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。