五指毛桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

五指毛桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了五指毛桃（FicushirtaVahl）組織培養(yǎng)的外植體、瓶苗培育、瓶苗移植、檔案管理等內(nèi)容。本文件適用于五指毛桃組培苗培育。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1770桉樹(shù)無(wú)性系組培快繁技術(shù)規(guī)程LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程LY/T2752林木輕基質(zhì)無(wú)紡布容器育苗技術(shù)規(guī)程術(shù)語(yǔ)與定義LY/T1770和LY/T1882界定的及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。五指毛桃FicushirtaVahl為?？疲∕oraceae）榕屬（Ficus）粗葉榕（FicushirtaVahl）中五裂葉型的植株，俗名五指毛桃、掌葉榕、五指牛奶等，其干燥根味甘、辛，性平，有去紅腫，祛風(fēng)濕，益氣固表等功效。外植體采集選取無(wú)病蟲(chóng)害、健壯的當(dāng)年生嫩枝為外植體。需在連續(xù)3d晴天后采集。預(yù)處理切取長(zhǎng)約2cm～3cm帶頂芽莖段，置入干凈玻璃瓶中，注入適量洗滌劑和水清洗莖段表面，用自來(lái)水反復(fù)沖洗干凈。滅菌在超凈工作臺(tái)上用75％乙醇浸泡10s～15s，無(wú)菌水沖洗1次～2次，然后用添加1滴～2滴吐溫80的0.1%HgCl2浸泡并不斷搖動(dòng)，滅菌14min，用無(wú)菌水沖洗4次～6次。瓶苗培育培養(yǎng)基配制初代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+IBA（0.1mg/L～0.5mg/L）+蔗糖30g/L，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA（0.5mg/L～1.5mg/L）+IBA（0.1mg/L～0.5mg/L）+蔗糖30g/L，生根培養(yǎng)基為1/4MS（大量元素1/4）+IBA（1.0mg/L～2.0mg/L）+NAA（0.1mg/L～0.5mg/L）+AC0.5g/L+蔗糖20g/L，添加卡拉膠均為6.5g/L，pH值調(diào)至5.8～6.2。滅菌和存放參照LY/T1770和LY/T1882相關(guān)條款執(zhí)行。培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度26℃±2℃，相對(duì)濕度65%～70%，光照強(qiáng)度1000lx～2000lx，每天光照時(shí)長(zhǎng)10h～12h。及時(shí)發(fā)現(xiàn)并清除污染材料，定期清潔培養(yǎng)室。初代培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上將消毒好的帶頂芽莖段接種在初代培養(yǎng)基中，每瓶接種1段，培養(yǎng)30d～40d，可誘導(dǎo)頂芽萌發(fā)，形成單芽或叢芽。增殖培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)出的幼芽接種在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶接種4（個(gè)或叢）～5（個(gè)或叢），培養(yǎng)周期30d～35d。從外植體開(kāi)始，培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)4年，或繼代培養(yǎng)超過(guò)40代，宜重新采集外植體更新培養(yǎng)材料。生根培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上從增殖培養(yǎng)獲得的芽苗中，切取具3片以上舒展葉片、高2.5cm～3.5cm的芽苗，接種在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)周期為25d～30d。瓶苗移植基質(zhì)與容器采用輕型基質(zhì)（基質(zhì)成分參照LY/T2752相關(guān)條款執(zhí)行）或黃心土作基質(zhì)，以塑料薄膜袋或無(wú)紡布袋為容器，規(guī)格為8cm×10cm。移植前2d用50%的多菌靈可濕性粉劑1000倍液淋透基質(zhì)殺菌。瓶苗煉苗當(dāng)瓶苗生根率達(dá)80%～90%，根長(zhǎng)0.5cm～1.5cm時(shí)，可在煉苗棚內(nèi)進(jìn)行煉苗，煉苗10d～15d，后將瓶蓋擰開(kāi)再煉苗3d～5d。洗苗將經(jīng)過(guò)煉苗的瓶苗和培養(yǎng)基一起倒入清水中，洗凈培養(yǎng)基，不要損傷幼苗。選擇生長(zhǎng)正常、葉片舒展、根系完整、根莖結(jié)合處無(wú)愈傷組織的芽苗備用。移植移植時(shí)先在基質(zhì)中掘個(gè)小孔，將芽苗植入，用基質(zhì)完全覆蓋小苗根部，不要按壓基質(zhì)，以防壓斷幼根，避免夏季高溫時(shí)移植。苗期管理遮蔭移植后用透光度25%的遮陽(yáng)網(wǎng)遮蔭，陰天可不遮蓋，30d后可移除遮陽(yáng)網(wǎng)水分移植完成后即淋透水，以后做到見(jiàn)干見(jiàn)水，保持基質(zhì)濕潤(rùn)。養(yǎng)分小苗移植10d左右開(kāi)始長(zhǎng)新葉，可以薄施肥，用1g·L-1的復(fù)XX（N-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，7d～10d一次；移植30d后，逐漸增加到用3g·L-1的復(fù)XX（N-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，10d～15d一次。除草以“除早、除小、除了”為原則，及時(shí)連根拔除雜草。苗木出圃苗高≥20cm，地徑≥0.3cm，生長(zhǎng)正常，無(wú)損傷，無(wú)病蟲(chóng)害的苗木可以出圃。有害生物防治病害苗期偶有炭疽病危害，發(fā)病后應(yīng)及時(shí)清除病葉，集中焚燒，