生化分享儀校準(zhǔn)課件

生化分析儀校準(zhǔn)

吉林省臨床檢驗(yàn)中心

ISO15189的5.3.2：設(shè)備（在安裝時(shí)及常規(guī)使用中）應(yīng)顯示出能夠達(dá)到規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)，并且符合相關(guān)檢驗(yàn)所要求的規(guī)格。實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)制定計(jì)劃，用于定期監(jiān)測(cè)并證實(shí)設(shè)備、試劑及分析系統(tǒng)已適當(dāng)校準(zhǔn)并處于正常功能狀態(tài)。以符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)定定期校準(zhǔn)的要求5.3.4應(yīng)保持影響檢驗(yàn)性能的每件設(shè)備的記錄，至少應(yīng)包括：h)證實(shí)設(shè)備可以使用的設(shè)備性能記錄；h)項(xiàng)中提到的性能記錄應(yīng)包括所有校準(zhǔn)和/或驗(yàn)證報(bào)告/證明的復(fù)件，內(nèi)容包括日期、時(shí)間、結(jié)果、調(diào)整、可接受標(biāo)準(zhǔn)以及下次校準(zhǔn)和/或驗(yàn)證的日期，在兩次維護(hù)/校準(zhǔn)之間的核查頻次。1.這兩個(gè)條款要求的都是校準(zhǔn)，而不是檢定：量值溯源是通過(guò)校準(zhǔn)/檢定進(jìn)行的，即溯源有兩種方式。校準(zhǔn)校準(zhǔn)的定義是“在規(guī)定條件下，為確定帶有相關(guān)不確定度的測(cè)量?jī)x器/測(cè)量系統(tǒng)所指示的量值，或?qū)嵨锪烤?參考標(biāo)準(zhǔn)所代表的值與對(duì)應(yīng)也帶有相關(guān)不確定度的測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)值之間關(guān)系的一組操作”。簡(jiǎn)言之：“在規(guī)定條件下為確定示值與對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)值關(guān)系的一組操作”。它是將量值測(cè)量設(shè)備與測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行技術(shù)比較，確定被校設(shè)備的量值及其不確定度，目的是確定測(cè)量設(shè)備示值誤差的大小，并通過(guò)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)將測(cè)量設(shè)備的量值與整個(gè)量值溯源體系相聯(lián)系，使測(cè)量設(shè)備具有溯源性。例如：A=kCLA=KC其中K是常數(shù)，但它是相對(duì)于濃度來(lái)說(shuō)是常數(shù)，當(dāng)溫度，溶劑介質(zhì)和壓力改變時(shí)，它也改變，所以要校準(zhǔn)。也就是當(dāng)我們用標(biāo)準(zhǔn)品（校準(zhǔn)品）來(lái)測(cè)量時(shí)：A校準(zhǔn)=KC校準(zhǔn)從而可以算出K值。檢定檢定的定義是：“提供客觀證據(jù)，證明某項(xiàng)目滿(mǎn)足規(guī)定的要求”。在法制計(jì)量與合格評(píng)定中，檢定通常與測(cè)量系統(tǒng)的檢查，貼標(biāo)記/出具檢定證書(shū)有關(guān)。例如在我國(guó)就定義為：“查明和確認(rèn)計(jì)量器具是否符合法定要求的活動(dòng)，包括檢查，加標(biāo)記/出具檢定證書(shū)”。其中的檢查，既包含測(cè)量設(shè)備與測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)比較（即校準(zhǔn)過(guò)程），又包括將校準(zhǔn)結(jié)果與計(jì)量要求進(jìn)行比較，判斷是否符合規(guī)定的要求；對(duì)于符合要求的測(cè)量設(shè)備加標(biāo)記/出具檢定證書(shū)。校準(zhǔn)和檢定的區(qū)別1)性質(zhì)不同：校準(zhǔn)不具有法制性，是企事業(yè)單位自愿的溯源行為，而檢定具有法制性，屬計(jì)量管理范疇的執(zhí)法行為；2)內(nèi)容不同：校準(zhǔn)主要確定測(cè)量設(shè)備的示值誤差或給修正值，檢定則是對(duì)其計(jì)量特性和技術(shù)要求符合性的全面評(píng)定；3)依據(jù)不同：校準(zhǔn)依據(jù)的是校準(zhǔn)規(guī)范/方法，檢定依據(jù)檢定規(guī)程；4)結(jié)果不同：校準(zhǔn)通常不判斷測(cè)量設(shè)備合格與否（由于客戶(hù)千差萬(wàn)別，同一設(shè)備用在不同場(chǎng)合，計(jì)量要求就不同，校準(zhǔn)機(jī)構(gòu)無(wú)法按統(tǒng)一要求進(jìn)行合格性判定），若客戶(hù)明確使用目的和計(jì)量要求時(shí)，也可確定某一特性是否符合預(yù)期要求，檢定則必須作出合格與否的結(jié)論；5)證書(shū)不同：校準(zhǔn)結(jié)果出具校準(zhǔn)證書(shū)/報(bào)告，一般不給校準(zhǔn)周期，故不考慮校準(zhǔn)對(duì)象性能今后可能產(chǎn)生的變化，該變化由客戶(hù)自己考慮。檢定結(jié)果若合格出具檢定證書(shū)，給檢定周期，故不確定度要包括有效期可能產(chǎn)生的變化對(duì)檢定結(jié)果的影響。檢定合格的設(shè)備不一定適用于檢測(cè)/校準(zhǔn)項(xiàng)目的要求，檢定不合格的設(shè)備有時(shí)可降級(jí)使用，這取決與對(duì)檢測(cè)/校準(zhǔn)項(xiàng)目的要求（測(cè)量范圍，準(zhǔn)確度等）。實(shí)驗(yàn)室在送校/送檢時(shí)，應(yīng)明確哪些參數(shù)應(yīng)校準(zhǔn)，關(guān)鍵量或值應(yīng)制定校準(zhǔn)計(jì)劃。校準(zhǔn)機(jī)構(gòu)在接受任務(wù)時(shí)，也應(yīng)問(wèn)清客戶(hù)的需求。校準(zhǔn)完成后，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)校準(zhǔn)結(jié)果進(jìn)行審查，確定設(shè)備是否滿(mǎn)足要求，必要時(shí)應(yīng)考慮修正值/修正因子。校準(zhǔn)——自下而上的量值溯源檢定——自上而下的量值傳遞校準(zhǔn)結(jié)果既可給出被測(cè)量的示值，又可確定示值的修正值。校準(zhǔn)也可確定其他計(jì)量特性，如影響量的作用。校準(zhǔn)是測(cè)量?jī)x器的用戶(hù)的一種自主溯源行為。隨著社會(huì)主義市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，校準(zhǔn)逐漸確立了其在量值溯源中的地位，逐漸成為實(shí)現(xiàn)單位統(tǒng)一和量值準(zhǔn)確可靠的主要方式。2.校準(zhǔn)的時(shí)間：

“在安裝時(shí)及常規(guī)使用中”；“定期監(jiān)測(cè)”；“以符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)定定期校準(zhǔn)的要求”；“儀器出現(xiàn)故障修復(fù)后”；“室內(nèi)質(zhì)控失控”。。。。。。3.校準(zhǔn)要達(dá)到的目的：“應(yīng)顯示出能夠達(dá)到規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)，并且符合相關(guān)檢驗(yàn)所要求的規(guī)格?！?；中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程1.JJG464—1996《生化分析儀》2.JJG861—2007《酶標(biāo)分析儀》3.JJG553—88《血液氣體酸堿分析儀》4.JJG714—90《血細(xì)胞分析儀》中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)1.YY/T0654—2008《全自動(dòng)生化分析儀》2.YY/T0655—2008《干式化學(xué)分析儀》3.YY/T0014—2005《半自動(dòng)生化分析儀》4.YY/T0653—2008《血液分析儀》5.YY/T0589—2005《電解質(zhì)分析儀》6.YY/T0659—2008《全自動(dòng)凝血分析儀》7.YY/T0658—2008《半全自動(dòng)凝血分析儀》8.YY/T0475—2004《尿液化學(xué)分析儀通用技術(shù)條件》9.YY/T0478—2004《干化學(xué)尿液分析試紙條通用技術(shù)條件》10.YY/T0588—2005《流式細(xì)胞儀》11.YY/T0657—2008《醫(yī)用離心機(jī)》全自動(dòng)生化分析儀的檢定和校準(zhǔn)

檢定規(guī)程國(guó)家藥監(jiān)局行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)JJG464—1996《生化分析儀》YY/T0654—2008《全自動(dòng)生化分析儀》1.外觀1.正常工作環(huán)境條件2.雜散光2.雜散光3.零點(diǎn)飄移3.吸光度線性范圍4.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和重復(fù)性4.吸光度準(zhǔn)確度5.吸光度的準(zhǔn)確度5.吸光度穩(wěn)定性6.吸光度的重復(fù)性6.吸光度的重復(fù)性7.線性誤差7.溫度準(zhǔn)確度與波動(dòng)度8.交叉污染率8.樣品攜帶污染率9.水浴溫度9.加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性10.臨床項(xiàng)目的批內(nèi)精密度11.外觀12.環(huán)境試驗(yàn)要求13.安全要求注：YY/T0654--2008《全自動(dòng)生化分析儀》該標(biāo)準(zhǔn)的起草單位：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，日立高新技術(shù)公司（中國(guó)事業(yè)集團(tuán)），北京松上技術(shù)有限公司，北京醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司。生化分析儀的校準(zhǔn)方法：1.雜散光：用蒸餾水作參比，在340nm處測(cè)定50g/L的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（配制的方法見(jiàn)附錄A）；或以空氣作參比，在340nm出測(cè)定截止型濾光片的吸光度，應(yīng)符合5.2的要求（吸光度不小于2.3）2.吸光度的線性范圍：對(duì)分析儀340nm和450nm--520nm范圍內(nèi)任一波長(zhǎng)進(jìn)行線性范圍測(cè)定，各個(gè)波長(zhǎng)的色素原液的配制方法見(jiàn)表3，色素原液的吸光度應(yīng)比分析儀規(guī)定的吸光度的上限高5%左右。波長(zhǎng)/nm溶質(zhì)溶劑（稀釋液）340重鉻酸鉀0.05mol/L硫酸450--520橘紅G去離子水內(nèi)任一波長(zhǎng)用相應(yīng)的稀釋液將色素原液0/10，1/10，2/10，3/10，4/10，5/10，6/10，7/10，8/10，9/10，10/10的比例稀釋?zhuān)搏@得11個(gè)濃度梯度。在生化分析儀上，測(cè)定上述溶液的吸光度，每個(gè)濃度測(cè)定5次，計(jì)算平均值。以相對(duì)濃度為橫坐標(biāo)，吸光度平均值為縱坐標(biāo)作圖，用最小二乘法對(duì)0/10，1/10，2/10和3/10這4個(gè)點(diǎn)進(jìn)行線性擬合，然后計(jì)算后5--11點(diǎn)的相對(duì)偏倚Di.相對(duì)偏倚小于+/-5%的吸光度范圍即為吸光度線性范圍，應(yīng)滿(mǎn)足5.3的要求（最大吸光度不小于2.0）原理是：朗伯-比耳定律有兩個(gè)前提條件：1.單色光；2.理想溶液。A=KaL其中a是活度a=fCf是活度系數(shù)，當(dāng)理想溶液時(shí)f=1，稀溶液時(shí)f近似等于1，當(dāng)濃度逐漸增大時(shí)f就小于1，而且越來(lái)越小，所以前4個(gè)點(diǎn)應(yīng)該在直線上，后面的點(diǎn)就開(kāi)始偏離直線，當(dāng)相對(duì)偏倚等于或大于+/-5%時(shí)，該分析儀的線性范圍只到前面那點(diǎn)。該實(shí)驗(yàn)由于是單個(gè)純品化合物的溶液的吸光度線性測(cè)定，而且是取5次測(cè)定的均值所以該直線一般通過(guò)原點(diǎn)，或截距很小可忽略。3.吸光度準(zhǔn)確度以蒸餾水作參比，在生化分析儀上測(cè)定340nm處吸光度分別約為0.5（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%）和1.0（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%)的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。重復(fù)測(cè)定三次，計(jì)算三次測(cè)量值的算術(shù)平均值與標(biāo)準(zhǔn)值之差，應(yīng)符合5.4中表1的要求（0.5:允許偏差小于0.025;1.0:允許偏差小于+/-0.07）4.吸光度穩(wěn)定性對(duì)分析儀的340nm和600--700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)任一波長(zhǎng)進(jìn)行吸光度穩(wěn)定性測(cè)定。340nm的測(cè)定溶液為吸光度為0.5（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%)的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液,600nm--700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)任一波長(zhǎng)的測(cè)定溶液為吸光度0.5（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%）的硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照下面的設(shè)定條件a),b),在分析儀上測(cè)定上述溶液的吸光度，計(jì)算其中最大值與最小值之差，應(yīng)符合5.5的要求（吸光度的變化應(yīng)不大于0.01）：a)測(cè)定時(shí)間為儀器標(biāo)稱(chēng)的最長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或10min;b)測(cè)定間隔為儀器的讀數(shù)間隔或30s。5.吸光度的重復(fù)性對(duì)分析儀的340nm波長(zhǎng)進(jìn)行吸光度重復(fù)性測(cè)定，340nm的測(cè)定溶液為吸光度為1.0（以蒸餾水為空白，允許偏差為+/-5%）的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照下面的設(shè)定條件a),b),在分析儀上測(cè)定上述溶液的吸光度，重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算變異系數(shù)CV，應(yīng)符合5.6的要求（應(yīng)不大于1.5%）：a)溶液的加入量為分析儀標(biāo)稱(chēng)的最小反應(yīng)體積；b)反應(yīng)時(shí)間為分析儀標(biāo)稱(chēng)的最長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或10min；6.溫度準(zhǔn)確度與波動(dòng)度將精度不低于0.1度的溫度檢測(cè)儀的探頭，或分析儀制造商提供的相同精度，且經(jīng)過(guò)標(biāo)定的專(zhuān)用測(cè)溫工具，放置于制造商指定的位置，在溫度顯示穩(wěn)定后，每隔一個(gè)分析儀的讀數(shù)間隔或30s測(cè)定一次溫度值，測(cè)定時(shí)間為分析儀標(biāo)稱(chēng)的最長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或10min。計(jì)算所有次溫度值的平均值和最大與最小值之差。平均值與設(shè)定溫度值之差為溫度準(zhǔn)確度，最大值與最小值之差的一半為溫度的波動(dòng)度，應(yīng)符合5.7的要求（溫度值在設(shè)定值的+/-0.3度內(nèi)，波動(dòng)度不大于+/-0.2度）。7.樣品攜帶污染率a)用人源血清溶解適量橘紅G，配制340nm吸光度約為200的橘紅G原液；b)將橘紅G原液準(zhǔn)確稀釋200倍，在分析儀上測(cè)定稀釋液在340nm相對(duì)于蒸餾水的吸光度，重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算20次吸光度的平均值，乘以稀釋倍數(shù)，即為橘紅G原液的理論吸光度A原；c)以蒸餾水為試劑，以橘紅G原液和蒸餾水作為樣品，樣品的加入量為分析儀標(biāo)稱(chēng)的最大樣品量，按照原液，原液，原液，蒸餾水，蒸餾水，蒸餾水的順序?yàn)橐唤M，在分析儀測(cè)定上述樣品反應(yīng)結(jié)束時(shí)的吸光度，共進(jìn)行5組測(cè)定；d)每一組的測(cè)定中，第4個(gè)樣品的吸光度為Ai4,第6個(gè)樣品的吸光度為Ai6,i為該測(cè)定組的序號(hào);e)按公式計(jì)算攜帶污染率，（公式略），結(jié)果應(yīng)符合5.8的規(guī)定（樣品攜帶污染率應(yīng)不大于0.5%）8.加樣的準(zhǔn)確度與重復(fù)性分為比色法和稱(chēng)量法兩種類(lèi)型的測(cè)定方法。稱(chēng)量法：稱(chēng)量法按下列方法進(jìn)行測(cè)定：a)將分析儀，除氣蒸餾水等置于恒溫，恒濕的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)平衡數(shù)小時(shí)后開(kāi)始試驗(yàn)，準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)娜萜鳎梢苑乐谷萜鲀?nèi)的水分揮發(fā)），在分度值為0.01mg的電子天平上調(diào)零；b)將容器放到合適位置，控制試劑針或樣品針往該容器中加入規(guī)定量除氣蒸餾水，再在電子天平上稱(chēng)量其質(zhì)量；c)每種規(guī)定加入量重復(fù)稱(chēng)量20次，每次的實(shí)際加入量等于加入除氣蒸餾水的質(zhì)量除以當(dāng)時(shí)溫度下純水的密度，不同溫度下純水的密度見(jiàn)附錄B。按公式計(jì)算變異系數(shù)和加樣誤差，結(jié)果應(yīng)符合5.9的要求比色法：比色法按下列步驟進(jìn)行測(cè)定：a)橘紅G血清液（色素原液）的配制：用分度值為0.1mg以下的電子天平稱(chēng)取橘紅G粉末0.35mg，輕輕放入10ml質(zhì)控血清中，用混勻器慢慢混勻溶解；b)色素原液比重的測(cè)定：使用同一比重瓶測(cè)定比重瓶質(zhì)量m1，色素原液質(zhì)量m2，純水質(zhì)量m3,計(jì)算色素原液密度：Ρ色

t=Ρ水t(m2-m1)/(m3-m1)式中：Ρ色t:ｔ溫度時(shí)色素原液密度；Ρ水t：t溫度時(shí)純水密度。c)參考稀釋液的配制，測(cè)量并計(jì)算稀釋倍數(shù)，測(cè)定稀釋液吸光度：稱(chēng)量一個(gè)空樣品杯質(zhì)量m4，在此空樣品杯中加入約1mL色素原液并稱(chēng)取質(zhì)量m5，將樣品杯中的色素原液用純水稀釋到2000mL容量瓶中定容，在分光光度計(jì)上（478nm+/-1