抗菌活性測(cè)試步驟

抗菌活性測(cè)試步驟及實(shí)驗(yàn)器材第一天中午12點(diǎn)準(zhǔn)備9個(gè)錐形瓶（1個(gè)備用，4個(gè)培養(yǎng)菌液，4個(gè)稀釋菌液），洗凈，烘干先在備用錐形瓶中配制500ML液體培養(yǎng)基，溶解后，倒入其余8個(gè)錐形瓶中，每瓶50ML。蓋上半透膜，用繩或皮筋系住，在用報(bào)紙蓋上一層，用皮筋系住。液態(tài)培養(yǎng)基：蛋白胨5g，酵母2.5g，氯化鈉5g，水500ML，按比例增減。（半透膜）第一天下午3點(diǎn)3、將9個(gè)錐形瓶，200μL槍頭兩盒，10μL槍頭，1ML槍頭，用報(bào)紙包住，放入滅菌箱中，滅菌20min。121攝氏度。（滅菌鍋）第一天下午4點(diǎn)4、配藥液，按照0.0010g—1ML，0.0020g—2ML，這種濃度配藥液配出的濃度為1000μg/mL,溶劑為DMSO：水=1:1.等著全部溶解。第一天晚上6點(diǎn)5.稀釋藥液，將配制好的藥液濃度為1000，500，250，125μg/mL，四個(gè)濃度梯度。第一天晚上9點(diǎn)6、將超凈臺(tái)打開紫外燈滅菌20min，點(diǎn)燃酒精燈，從滅菌箱取出4個(gè)錐形瓶，把接種環(huán)放在酒精燈上燒紅，冷卻幾秒，從固體斜面菌落中劃出一點(diǎn)，放在培養(yǎng)基中，放入搖床（轉(zhuǎn)速131，溫度37攝氏度）中培養(yǎng)12個(gè)小時(shí)。（從左到右依次為接種環(huán)，超凈臺(tái)，搖床）第二天早上7點(diǎn)7、將超凈臺(tái)打開紫外燈滅菌20min（需要滅菌的器材：96孔板，槍，酒精燈；放在超凈臺(tái)上即可）。將稀釋好的藥液加入到96孔板中，每孔加10μL（用從滅菌器中取出滅過菌的10μL槍頭），橫行12個(gè)孔，每種濃度的藥液重復(fù)加3個(gè)孔；豎行8排，8種藥。每種菌要加一排陽性對(duì)照：即氯霉素4種濃度，每種濃度重復(fù)3個(gè)孔，4個(gè)濃度，正好橫行一排12個(gè)孔。再加一排對(duì)照，其中3個(gè)孔為溶劑10μL（無藥空白對(duì)照），另三個(gè)孔只加菌液90μL（陰性對(duì)照）（96孔板，EP管）第二天早上9點(diǎn)——到11點(diǎn)8、把搖床中菌液取出（渾濁即為菌長(zhǎng)起來了），再把滅菌器中的另外4瓶培養(yǎng)基和1ml的槍頭取出，點(diǎn)燃酒精燈，用酒精噴壺，噴下試驗(yàn)臺(tái)和手，進(jìn)行滅菌。從搖床取出的菌液中，吸取1ml，放在1瓶培養(yǎng)基中，稀釋50倍（50—100倍均可，看菌的濃度），[如果菌液長(zhǎng)的很濃，則20ML培養(yǎng)基中加一滴菌液（用200u