PCR實驗室建設所需資料

PCR 試驗室建設所需資料4月26日，國家衛(wèi)健委舉辦全國視頻會議，明確提出“所有縣區(qū)級以上疾控機構(gòu)、二級以上綜合醫(yī)院要抓緊進展改造，在短時間內(nèi)形成核酸檢測力氣”。各地的公立機構(gòu)檢測力氣不能滿足需求只是臨時的，獨立醫(yī)學試驗室在充實檢測力氣的同時，發(fā)揮自己豐富的檢驗治理運營理念，以及區(qū)域化掩蓋的閱歷優(yōu)勢，融入到“國家隊”核酸檢測力氣的建設中，順勢而為，乘勢而上。隨著各地都在建立PCR試驗室，本文從硬件根底的角度，梳理了PCR試驗室建設的幾個關(guān)鍵點，獨立醫(yī)學試驗室可以運用豐富的運營閱歷，進展建設指導、人員梯隊建立、質(zhì)控體系搭建、區(qū)域化效勞支持等?！罕酒脚_對接眾多獨立醫(yī)學試驗室，供給不同ICL機構(gòu)PCR試驗室建設的相關(guān)優(yōu)勢，可進展PCR試驗室建設的需求詢問，歡送聯(lián)系后臺我〔微信號ICLdaily01〕』如何建設PCR試驗室與PCR試驗室建設相關(guān)的指導文件主要有四份：《醫(yī)療機構(gòu)治理條例》《醫(yī)療機構(gòu)臨床試驗室治理方法》《臨床基因擴增檢驗試驗室治理暫行方法》《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增試驗室治理方法》要求臨床PCR試驗室，不但在試驗室設置及儀器設備等硬件上要滿足開展臨床檢驗的條件，而且要求試驗室在日常工作要有文件化的工作程序。面就在PCR試驗室建設過程中的幾個關(guān)鍵把握點進展闡述:01建立PCR試驗室質(zhì)量治理體系依據(jù)試驗室的具體狀況編寫質(zhì)量體系文件，《質(zhì)量手冊》、《程序文件》、《作業(yè)指導書》，并保證治理體系運行有效。治理體系的特點是應有明確的目的、標準的治理、有效的制約、高效的機制、能自我進展的整體建立完善的SOP文件，對完成各項質(zhì)量活動的方法作出規(guī)定，每個SOP都應對一個或一組相互關(guān)系的活動進展描述每個SOP文件應說明該項質(zhì)量各環(huán)節(jié)的輸入、轉(zhuǎn)換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關(guān)活動的接口關(guān)系。明確每個環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)換過程中各項因素的要求，即由誰做、做什么、做到什么程序、到達什么要求，如何把握、形成什么記錄和報告，以及相應的審批手續(xù)。規(guī)定在質(zhì)量活動中需要留意的例外或特別狀況的訂正措施。SOP應簡練、明確和易懂并且工作人員嫻熟把握和嚴格遵守。02PCR試驗室的相關(guān)設置要完成一組PCR試驗，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析4個試驗過程。這4個試驗過程的試驗用房應相鄰布置，組成一個獨立的PCR試驗區(qū)。標準的PCR試驗區(qū)包括:試劑預備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。PCR試驗室整體平面布局某醫(yī)院PCR試驗室平面布局如圖1所示，整個區(qū)域有一個公用走廊，每個獨立試驗區(qū)設有特地的緩沖區(qū)。通過壓差把握，使整個PCR試驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。圖表1、某醫(yī)院PCR試驗室平面圖試劑預備區(qū)該試驗區(qū)主要進展的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反響混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必需貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。試劑預備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內(nèi)房間的面積宜把握在15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染。標本制備區(qū)該區(qū)域主要進展的操作為臨床標本的保存、核酸〔RNA、DNA〕提取、貯存及其參與至擴增反響管和測定的合成。

RNA時cDNA標本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內(nèi)。在標本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進展提取核酸的操作。為避開提取的核酸在柜內(nèi)反復循環(huán)，造成標本之間的交叉污染，消滅假陽性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必需是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自試驗室，排風經(jīng)過高效過濾器過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和試驗室中。依據(jù)閱歷，假照試驗室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺，試驗室的面積增加10m2;標本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避開從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。擴增室該區(qū)域主要進展的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA〔來自樣本制備區(qū)〕的參與和主反響混合液〔來自試劑貯存和制備區(qū)〕制備成反響混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進展。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴增后必需翻開反響管，因此巢式擴增有較高的污染危急性，其次次加樣必需在本區(qū)內(nèi)進展。擴增室主要配備PCR試驗室的核心儀器PCR儀，本文實例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。在試驗室建筑過程中，需要給PCR儀配備特地的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積把握在 15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避開氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進展。建議承受5~10Pa壓差，在把握上比較簡潔實現(xiàn)。產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進展的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉器檢測，此區(qū)域可不設。在室內(nèi)配備通風櫥，保證房間內(nèi)的相對負壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積把握在15m2~20m2。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避開擴增產(chǎn)物從本區(qū)集中至其它區(qū)域。建議承受5~10Pa壓差，在把握上比較簡潔實現(xiàn)。正負壓區(qū)域緩沖室的設置03依據(jù)壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室為相對正壓，擴增室和產(chǎn)物分析室為相對負壓，要求正壓的區(qū)域和要求負壓的區(qū)域的緩沖室內(nèi)的壓力設計大不一樣。正壓緩沖室符合一般正壓干凈室的緩沖原則，主要是防止室外環(huán)境空氣中的氣溶膠進入室內(nèi)。正壓緩沖室的布置如圖2所示。圖表2、正壓緩沖室的布置圖負壓緩沖室則是要求緩沖室對核酸擴增室及產(chǎn)物分析區(qū)保持正壓，對緩沖室外也保持正壓〔主要是滿足室內(nèi)凈化需要，如室內(nèi)無干凈要求，此處可以為0壓〕。負壓緩沖室的布置如圖3所示。圖表3、負壓緩沖室的布置圖04污染的預防與把握PCR試驗室設計的核心問題是如何避開污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染;自然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。因此要避免污染，首先應是預防，而不是排解。工作區(qū)域的嚴格劃分，各個試驗區(qū)域要有明顯的標記〔如醒目的門牌或不同的地面顏色等〕，以避開各個不同試驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆合理的系統(tǒng)設置，合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設置，盡量承受全送全排的空調(diào)系統(tǒng);嚴格的氣流壓力把握，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。標準的操作，臨床基因擴增檢驗試驗室的技術(shù)人員必需進展上崗培訓，在試驗操作過程中，操作者必需戴手套，并常常更換。清潔工作準時、正確。試驗工作完畢后，必需立即對本區(qū)進展清潔。嚴格的治理:嚴格把握進出試驗室的人員。在各個試驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)分標志的工作服〔如不同顏色〕，當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;盡量削減在試驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以削減穿插污染的可能性。擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在試驗室中傾倒，必需經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠