幾種重要病毒的簡介演示文稿

幾種重要病毒的簡介演示文稿當前第1頁\共有270頁\編于星期三\0點本章重點1.腺病毒復制的特點以及逃避宿主免疫監(jiān)控的機制2.何為自主型和缺陷型細小病毒3.輪狀病毒基因組結構特點、編碼蛋白的功能及逃避宿主免疫監(jiān)控的機制4.流感病毒的變異特點5.SARS的起源流6.艾滋病毒的致病特點7.乙肝病毒復制的特點當前第2頁\共有270頁\編于星期三\0點第一節(jié)Ⅰ類病毒—腺病毒

腺病毒（Adenovirus）最初于1953年從人的增殖腺分離出來，它是一群分布十分廣泛的DNA病毒。能引起人類呼吸道、胃腸道、泌尿系統(tǒng)及眼的疾病，少數對動物有致癌作用。腺病毒科（Adenoviridae）病毒分四個屬：哺乳動物腺病毒屬（Mastadenovirus）禽腺病毒屬（Aviadenovirus）富AT腺病毒屬（Atadenovirus）唾液酸酶病毒屬（Siadenovirus）當前第3頁\共有270頁\編于星期三\0點一、生物學性狀

腺病毒無囊膜，直徑80~110nm，呈二十面體對稱，線狀的雙股DNA與核心蛋白形成直徑60~65nm的髓芯，被包裹于衣殼內。衣殼由252個直徑8~10nm的殼粒組成，殼粒排列在三角形的面上，每邊6個，其中240個為六鄰體(Hexon)，另12個為五鄰體基底(Penton，頂點殼粒)。每個五鄰體基底上結合著1根(哺乳動物腺病毒)或2根(禽腺病毒)長9~77.5nm的纖維突起，這些纖維以五鄰體蛋白為基底由衣殼面伸出，纖維頂端形成頭節(jié)區(qū)。當前第4頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第5頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第6頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第7頁\共有270頁\編于星期三\0點衣殼蛋白解離后，具有三種抗原。其中組成六鄰體的衣殼蛋白具有組特異性α抗原；組成五鄰體的基底具有同組共有的β抗原；而組成五鄰體的纖維是型特異性γ抗原所在。自上個世紀50年代發(fā)現并成功分離腺病毒以來，已陸續(xù)發(fā)現了100余個血清型，其中人腺病毒有47種，分為A、B、C、D、E和F六個亞群。

當前第8頁\共有270頁\編于星期三\0點腺病毒耐酸，故能通過胃腸道而繼續(xù)保持活性，這為口服腺病毒載體的研制提供了方便，許多腺病毒就是從人和動物的糞便中獲得的。無囊膜，對有機溶劑不敏感，但在丙酮中不穩(wěn)定。腺病毒在-20℃時可長期存活，56℃加熱可滅活。適宜pH為5~6，pH值在2以下或10以上均不穩(wěn)定。當前第9頁\共有270頁\編于星期三\0點二、病毒的復制1、基因組的結構特點：①反向末端重復序列（invertedterminalrepeat,ITR）：每股核酸末端都有長約100bp的反向末端重復序列，是復制的起始位點。②末端蛋白（TP）：每股DNA的5’端通過脫氧胞苷共價結合一個小蛋白質（55ku）即末端蛋白（TP）。對DNA復制的起始非常重要。③蛋白VII和一種稱為mu的小蛋白緊密地環(huán)繞在DNA周圍，起到類組蛋白樣的作用。另一種蛋白V將這種DNA-蛋白復合物連接起來，并通過蛋白VI與病毒衣殼連接在一起。④在左端ITR的3’側有一段長約300bp的包裝信號（ψ）介導腺病毒基因組包裝入病毒衣殼。當前第10頁\共有270頁\編于星期三\0點ITRITR

ψE1AE1BL1L2L3L4E3L5E2BE2AE4當前第11頁\共有270頁\編于星期三\0點2、病毒的復制⑴粘附和進入細胞腺病毒感染細胞的過程是從腺病毒纖毛的頭節(jié)區(qū)粘附到細胞表面的特異性受體開始的。因為人腺病毒主要與柯薩奇B病毒共用一種受體，因此這種受體被稱為柯薩奇/腺病毒受體即CAR（coxsackie/adenovirusreceptor）。當前第12頁\共有270頁\編于星期三\0點⑵轉錄與復制腺病毒基因早期產物的主要功能：①E1區(qū)基因表達產物（調控宿主細胞，與病毒致癌相關）E1區(qū)基因進一步分為E1A和E1B：E1A蛋白的主要功能是調節(jié)細胞代謝，將感染細胞帶入DNA復制周期，細胞開始儲存病毒DNA復制所需的原料。E1A蛋白還可以激活其他早期基因（E1B、E2A、E2B、E3和E4）的啟動子，也可以拮抗干擾素的作用。

當前第13頁\共有270頁\編于星期三\0點E1B蛋白的主要功能是防止細胞凋亡，調控晚期基因的表達。19K與細胞Bcl-2基因（抑制細胞凋亡）的表達產物同源，可以通過滅活和清除Bax家族成員來防止細胞發(fā)生凋亡或壞死。E1B55K基因產物可以下調p53基因（刺激細胞凋亡）的轉錄水平，當然這種調節(jié)功能不是絕對的，其他一些腺病毒基因（如E4orf6）也參與了這一過程。另外，E1B55K基因產物干擾細胞mRNA從細胞核釋放。當前第14頁\共有270頁\編于星期三\0點②E2區(qū)基因表達產物（復制相關蛋白）可分為E2A和E2B。其中E2A即單鏈DNA結合蛋白（ssDBP,single-strandedDNAbindingproteins）；E2B主要產物有兩種，分別是末端蛋白前體（pTP,precursorterminalprotein）和病毒DNA聚合酶（pol）。三種蛋白與至少三種細胞內的因子相互作用，啟動腺病毒DNA復制以及病毒晚期基因的轉錄和翻譯過程。當前第15頁\共有270頁\編于星期三\0點③E3區(qū)基因表達產物（逃避免疫攻擊）主要功能是破壞宿主的免疫防御機制，而與病毒基因組的復制無關。E3基因的產物之一11.6Kd，由于可以在病毒感染的晚期裂解細胞并釋放病毒顆粒而被稱為腺病毒死亡蛋白（ADP，adenovirusdeathprotein）。gp19K蛋白可以在內質網上與MHC-I類分子的重鏈結合阻止其轉運到細胞表面，并且可以延緩MHC-I的表達。RID（receptorinternalizationanddegradation）α&β以及14.7Kd蛋白可以抑制由TNF（腫瘤壞死因子）誘發(fā)的細胞凋亡，促進Fas（凋亡通道中的一種死亡受體）降解，下調TNF受體水平。當前第16頁\共有270頁\編于星期三\0點④E4區(qū)基因表達產物E4區(qū)的基因產物通常被稱為orf1~6/7，主要與病毒信使RNA的代謝有關，還有促進病毒DNA復制以及關閉宿主蛋白合成的功能。研究發(fā)現，一些E4產物可以誘導一些蛋白酶活性，降解宿主的某些DNA修飾酶，防止病毒DNA發(fā)生串聯。E4orf3VARNA是一些由腺病毒轉錄的非翻譯RNA，為“誘捕”RNA分子，結合PKR（宿主蛋白激酶），使該蛋白失活，關閉干擾素的產生。當前第17頁\共有270頁\編于星期三\0點

一般而言，DNA的復制是由RNA啟動的，而在腺病毒卻是所謂的蛋白啟動。不存在岡崎片段，其DNA復制可以從任何一端開始，甚至兩端同時進行。當前第18頁\共有270頁\編于星期三\0點復制過程中形成ssDNA的中間形式。5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’3’5’當前第19頁\共有270頁\編于星期三\0點⑶裝配與釋放病毒基因組復制通常在感染后數小時開始表達。同時早期基因的轉錄和翻譯被關閉，晚期基因開始表達。大部分的晚期基因的轉錄是以一個共同的主要晚期啟動子（MLP,MajorLatePromoter）調控的。實際上MLP的活性與病毒基因組復制密切相關，有研究表明一旦腺病毒基因組開始復制，MLP的活性將明顯增強。晚期基因主要編碼腺病毒的結構蛋白。病毒結構蛋白在細胞核內聚集形成病毒衣殼，病毒的基因組被包裝進去，形成有感染能力的病毒顆粒。

病毒水解細胞骨架蛋白K18，使之不能聚合形成中間絲結構，并最終裂解宿主細胞被釋放出去，完成腺病毒的生活周期。當前第20頁\共有270頁\編于星期三\0點三、對宿主的防衛(wèi)逃逸從病毒入侵到釋放出新病毒需要2天，較慢，容易受到宿主免疫攻擊。腺病毒1/4基因用于對付宿主免疫系統(tǒng)。1、防止細胞凋亡：E1B19K與細胞Bcl-2基因（抑制細胞凋亡）的表達產物同源，可以通過滅活和清除Bax家族成員來防止細胞發(fā)生凋亡或壞死。E1B55K基因產物可以下調p53基因（刺激細胞凋亡）的轉錄水平。2、加速病毒釋放：E3基因的產物之一11.6Kd，由于可以在病毒感染的晚期裂解細胞并釋放病毒顆粒而被稱為腺病毒死亡蛋白（ADP，adenovirusdeathprotein）。當前第21頁\共有270頁\編于星期三\0點3、破壞干擾素系統(tǒng)：沒有囊膜，不刺激干擾素產生；E4orf3VARNA是一些由腺病毒轉錄的非翻譯RNA，為“誘捕”RNA分子，結合PKR（宿主蛋白激酶），使該蛋白失活，關閉干擾素的產生。（病毒利用DNA基因組的雙鏈進行mRNA轉錄，會出現dsRNA）4、躲避殺傷性T細胞：E3-19K蛋白可以在內質網上與MHC-I類分子的重鏈結合阻止其轉運到細胞表面，并且可以延緩MHC-I的表達。當前第22頁\共有270頁\編于星期三\0點5、躲避天然殺傷細胞：E3基因編碼的RID蛋白結合腺病毒感染細胞的死亡受體（Fas），將其從細胞表面移走，并監(jiān)督其被破壞。作為彌補，E3-14.7K蛋白可以干擾來自死亡受體的信號—以防RID蛋白出現遺漏。天然殺傷細胞和殺傷性T細胞都有兩種方式殺傷細胞：⑴通過其表面的蛋白插入靶細胞表面的死亡受體，誘導細胞凋亡，殺死靶細胞；

⑵將顆粒酶注入靶細胞（還沒有任何病毒進化出對付顆粒酶的方法）6、利用自己的DNA聚合酶，腺病毒可以產生抗原漂變。當前第23頁\共有270頁\編于星期三\0點四、致病性與免疫性

人腺病毒經呼吸道和糞口途徑傳播，也可通過呼吸道或污染物品傳播。病毒在咽、結膜尤其是小腸上皮細胞內增殖，偶爾波及其他臟器，隱性感染常見。疾病一般為自限性，感染后可獲得長期持續(xù)的型特異性免疫力，中和抗體損傷作用重要。當前第24頁\共有270頁\編于星期三\0點在病毒性疾病中，有些為自限性感染，即感染后病程較短，隨體內病毒被迅速清除而痊愈。如甲型肝炎、戊型肝炎、流行性感冒、流行性腮腺炎、病毒性胃腸炎等等。有些則為慢性感染，感染后病程長，病毒能在體內較長期存在，病情呈慢性進行性發(fā)展，如慢性乙型肝炎，艾滋病等。

病毒性疾病的病癥與病毒的侵入途徑密切相關；而與病毒有無包膜及病毒結構無明顯關系。

由口咽途徑侵入的病毒無論屬RNA或DNA還是有無包膜，大多為自限性疾??；經體液和血液傳播的人類病毒性疾病，易形成持續(xù)感染。即使同種病毒由于侵入途徑不同，其病毒感染狀態(tài)也不相同。當前第25頁\共有270頁\編于星期三\0點五、微生物學檢查1、病毒分離自急性期病人咽、直腸、結膜等處采取標本，迅速接種敏感細胞，根據特征性細胞突變及抗原性鑒定病毒。2、血清學檢查取急性期和恢復期血清進行補體結合試驗，抗體升高4倍或以上，可判斷為近期感染。六、防治原則因存在許多健康帶毒者，隔離病人對防止腺病毒傳播幾乎無效。疫苗要保證無致癌危險。因此，研制高純度的亞單位疫苗是今后的主要任務。當前第26頁\共有270頁\編于星期三\0點第二節(jié)Ⅱ類病毒—細小病毒細小病毒科(Parvoviridae)是迄今所知道的最小的一類動物病毒，只發(fā)現其中少數病毒能導致有明顯臨床癥狀的傳染病，而大多數呈潛伏或持續(xù)感染狀態(tài)。該科含有兩個亞科：細小病毒亞科（Parvovirinae）和濃病毒亞科（Densovirinae）。其中濃病毒亞科的寄主僅限于無脊椎動物。當前第27頁\共有270頁\編于星期三\0點一、生物學性狀細小病毒粒子為立體對稱的二十面體，有三種衣殼蛋白，無包膜，直徑18-25nm。其線狀ssDNA約占整個病毒粒子重量的25％～34％，分子量為1.4×106～1.7×106，沉淀系數為23～27s。細小病毒對外界理化因素的抵抗力非常強，在pH3和pH9、56℃處理60min仍保持穩(wěn)定，卻能被甲醛、羥胺和一些氧化劑所鈍化。細小病毒幾乎都有凝集紅細胞的特性，血凝和血凝抑制試驗是鑒定本病毒和診斷本病的方法。當前第28頁\共有270頁\編于星期三\0點這類病毒的核酸由于在病毒包裝時包裝了雙鏈中的一條，因此，不同病毒粒子中的ssDNA極性可能不同。總的來說，自主型的病毒中，其核酸傾向于一種類型，即與mRNA互補的一類；而依賴型的病毒中，兩種極性的核酸各占一定的比例。

當前第29頁\共有270頁\編于星期三\0點二、病毒的復制這類病毒的核酸分子小，信息量極少，復制時不得不依賴于細胞或“輔助病毒”的幫助。據此可將細小病毒分為兩類：自主型（autonomous）缺陷型（defective）當前第30頁\共有270頁\編于星期三\0點自主型：這類病毒只有當寄主細胞處于核酸合成期（S期）才能復制，因為此時細胞內存在有許多細胞分裂所需的酶可被病毒利用，病毒本身僅僅提供一個模板核酸。這類病毒獨立地侵入寄主細胞，不需要輔助病毒，僅憑寄主細胞的酶即可以復制，故稱之為自主型。當前第31頁\共有270頁\編于星期三\0點缺陷型：依賴性病毒屬屬于此類。這類病毒侵入寄主細胞后，即使寄主細胞處于S期也不能復制，因為它們缺少某種特異的酶，必須依靠另一種病毒，即輔助病毒（如腺病毒）來提供，因而成為缺陷型。當前第32頁\共有270頁\編于星期三\0點

現以小鼠細小病毒（Miceminutevirus,MMV）代表自主型，腺聯病毒2型（Adeno-associatedvirustype2,AAV2）代表缺陷型分述其復制過程。1、基因組的結構特點MMV核酸為5084bp，AAV2核酸為4679bp，在所有細小病毒ssDNA的3’端或5’端都有多余100bp甚至300bp的核酸回文序列（palindromic），這些片段可以回折，與自身互補序列形成發(fā)夾結構。MMV的5’端和3’端序列差異較大，而AAV2的5’端和3’端序列相互反向重復，可形成鍋柄樣結構。MMV與AAV2都有兩個較大的閱讀框（ORF），每個ORF約占基因組的一半。左側ORF涉及調節(jié)功能，右側ORF涉及編碼結構蛋白。當前第33頁\共有270頁\編于星期三\0點2、病毒的復制MMV基因組都含有兩個大的ORF:第一個從mp6-mp42（基因圖譜位置，mapposition,mp），為repORF，編碼兩個非結構蛋白NS1和NS2。第二個從mp45-mp90，為capORF，編碼外殼蛋白。MMV兩個ORF各有一個啟動子，分別位于mp4和mp38，均含有TATA盒。在末端mp95-mp96位置為聚腺苷酸信號（AATAAA）。mp46-mp48是小的內含子，mp8-mp38為大的內含子。當前第34頁\共有270頁\編于星期三\0點ITR20406080ITR

repcapNS14.8kbNS23.3kbcap3.0kbP4P38圖8-7MMV基因組轉錄模式細線中的突出部分代表內含子當前第35頁\共有270頁\編于星期三\0點

由P4啟動子驅動的兩個轉錄體分別編碼NS1和NS2，第三個轉錄體由P38啟動編碼外殼蛋白。其中NS1和NS2首先合成，它們調控其他基因的表達。這兩種蛋白都是磷酸化的，NS1作為反式激活蛋白可激活P4和P38，其功能基團位于C端的129為氨基酸殘基。有效的DNA復制和mRNA翻譯都需要NS2的參與。capORF編碼外殼蛋白Vp1和Vp2，蛋白酶降解Vp2產生主要外殼蛋白Vp3。當前第36頁\共有270頁\編于星期三\0點

AAV2基因組也含有兩個大的閱讀框，有三個啟動子，分別位于mp5、mp19和mp40。轉錄出3個轉錄體，進一步剪切，編碼4種非結構蛋白和三種外殼蛋白。其中rep78和rep68為位點特異的核酸內切酶，參與病毒基因組的復制及病毒基因組插入寄主細胞基因組的過程。rep52和rep40并非病毒基因組復制所必須，它們主要介導病毒顆粒的組裝。當前第37頁\共有270頁\編于星期三\0點

圖8-8AAV2基因組轉錄模式細線中的突出部分代表內含子ITR20406080ITRrepcaprep78KD4.2kbrep68KD3.9kbcap3.6kbP5P40P19rep52KD3.3kbrep40KD2.3kb當前第38頁\共有270頁\編于星期三\0點

AAV2在寄主細胞內復制需要一些不相關的輔助病毒，如腺病毒、皰疹病毒等。以腺病毒為例，發(fā)現起輔助作用的腺病毒的早期功能蛋白。腺病毒蛋白E1A對AAV2基因表達起反式活化作用；35KDa的E4協同55KDa的E1B參與調控AAV2轉錄體的運輸，E1B在AAV2DNA復制時也起重要作用；72KDa的E2A是ssDNA結合蛋白，可刺激AAV2啟動子的轉錄及轉錄本向細胞質轉運。當前第39頁\共有270頁\編于星期三\0點

MMV和AAV2均在寄主細胞核內復制，并在細胞核內組裝成病毒粒子。兩者復制過程基本類似，DNA復制時均不需要RNA引物，也不環(huán)化，由于3’端形成的發(fā)夾結構，產生了對DNA多聚酶作用必須的引物—OH。由于病毒基因組是單鏈，復制過程中存在RF。AAV2復制過程如下：其3’端ITR形成發(fā)夾結構為DNA的復制提供起始引物，復制沿著親本鏈一直延伸到5’端，完全復制親本鏈需要產生一個新的3’—OH，此時病毒編碼的點位點特異的核酸內切酶Rep78和Rep68在箭頭所示處，即末端分解位（terminalresolutionsite）切開親本鏈，由此處繼續(xù)延伸，合成復制中間體。此時親本鏈的3’端為新合成的鏈，這樣親本鏈的ITR與開始不同，但互補。新合成的3’端又可以形成發(fā)夾結構引導新一輪的DNA復制，這樣可以產生一個新的基因組DNA和一個沒有復制完的含雙鏈信息的DNA，再經過位點特異的核酸內切酶作用，可繼續(xù)復制。當前第40頁\共有270頁\編于星期三\0點

三、AAV的潛伏感染在沒有輔助病毒共同侵染的條件下，AAVDNA可以整合到寄主細胞染色體中，建立潛伏感染，以后又可被輔助病毒的侵染所活化，進入復制循環(huán)。AAV的潛伏感染相當普遍，在20%的非洲綠猴腎和1%-2%的人胚胎細胞中可檢測到。AAV2的ssDNA進入寄主細胞后，必須復制成雙鏈形式才可以整合至染色體。這需要P5啟動子啟動少量的基因轉錄，產生rep78和rep68，它們一方面參與基因整合，另一方面也抑制了AAV2三個啟動子的轉錄。盡管整合沒有嚴格的特異性，但70%-100%的整合都發(fā)生在人染色體19q13.3-qter，且一般是幾個病毒基因組首尾相連。當前第41頁\共有270頁\編于星期三\0點第三節(jié)Ⅲ類病毒—呼腸孤病毒

呼腸孤病毒科，Reoviridae的命名，是由respiratoryentericorphanvirus各取其第一個字母而來。20世紀60年代初，曾從人和動物的呼吸道或腸道中分離出這類病毒，當時對它的致病作用不清楚，所以稱它為呼吸道(R)、腸道(E)，孤兒(O)病毒，簡稱呼腸孤病毒?，F在這一命名已失去其本來涵義，因為后來發(fā)現有些病毒雖與它有共同的基本特點，但與呼吸道或腸道無關。本科病毒分布極廣，包括能感染人、脊椎動物、昆蟲、植物、真菌的12個屬。其中能使人、畜致病的主要成員有：輪狀病毒、雞傳染性法氏囊病病毒、羊藍舌病病毒、非洲馬瘟病病毒等。當前第42頁\共有270頁\編于星期三\0點

一、生物學性狀本科病毒的病毒粒呈球形，大小在60～80nm之間，根據形態(tài)學分析它是一個二十面體的結構，有多層衣殼，如人輪狀病毒有三層，都沒有囊膜。氯化銫中浮力密度為1.31～1.38g/mL；具有線性分節(jié)段的雙鏈RNA基因組，可分為10條、11條和12條，因屬而異。dsRNA的正鏈5’端有“帽子”結構，負鏈5’端為磷酸化結構，其3’均沒有polyA結構。病毒中含有依賴于RNA的多聚酶。當前第43頁\共有270頁\編于星期三\0點

利用血清學方法，輪狀病毒被分為7個不同的組A-G（Vp6），A、B、C三組常見于人和動物，引起嬰幼兒腹瀉的為A組，感染青壯年的為B組，散發(fā)病例為C組，其中B組僅在中國引起爆發(fā)流行。D、E、F、G目前僅見于動物。每組內又有不同的血清型，針對外殼蛋白Vp7已鑒定出至少14種Vp7血清型。在同一組中，可發(fā)生基因重配，不同組之間不可能發(fā)生。輪狀病毒對理化因子的作用有較強的抵抗力。病毒經乙醚、氯仿、反復凍融、超聲、37℃1小時或室溫（25℃）24小時等處理，仍具有感染性。該病毒耐酸、堿、在pH3.5～10.0之間都具有感染性。95%的乙醇是最有效的病毒滅活劑，56℃加熱30分鐘也可滅活病毒。當前第44頁\共有270頁\編于星期三\0點

1、病毒顆粒電鏡下可見到三種類型的輪狀病毒顆粒結構。第一類為有感染性，具三層衣殼的病毒顆粒，含衣殼蛋白Vp1、Vp2、Vp3、Vp4、Vp6和Vp7；第二類為沒有外殼的雙層顆粒，直徑70nm，無感染性，表面粗糙，不含Vp4和Vp7；第三類僅有內殼，直徑50-50.5nm，無感染性，含有Vp1、Vp2和Vp3。完整的病毒顆粒直徑約75nm，具有輻條狀結構和一個非常清晰的平滑周邊，酷似車輪，輪狀病毒因此而得名。

Vp7是三聚體，構成毒粒的外衣殼。Vp4是二聚體，形成長20nm、末端為叉狀嘴唇形的突起，從中衣殼通過外衣殼的孔洞伸出粒子表面。Vp6三聚體構成中衣殼，又與構成內衣殼的Vp2相互作用。當前第45頁\共有270頁\編于星期三\0點

核心中含有11條dsRNA，按分子量從大到小進行排列，分別編碼12種蛋白質，6種結構蛋白和6種非結構蛋白。去除蛋白質的dsRNA無侵染性，在5’端和3’端都有一段非翻譯區(qū)，兩端都有呼腸孤病毒科病毒特有的保守序列。當前第46頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第47頁\共有270頁\編于星期三\0點2、病毒編碼蛋白質的特性及其功能基因片段蛋白產物分子量KDa顆粒中的位置修飾加工顆粒中的分子數功能1Vp1125內衣殼RNA聚合酶2Vp294-102內衣殼裂解120與RNA結合3Vp388內衣殼鳥苷轉移酶4Vp4Vp5Vp8886028外衣殼Vp4裂解120（二聚體）血凝素、中和抗原、細胞附著、毒力、蛋白質分解可強化侵染性、強化穿入細胞5NSP1(NS53)53非結構蛋

白鋅指結構、微堿性、結合RNA6Vp641中衣殼780（260殼粒）疏水性、三聚體、組抗原7NSP2(NS34)34非結構蛋白結合RNA、微酸8NSP3(NS35)35非結構蛋白堿性、與RNA結合9Vp738外衣殼有裂解信號序列、高甘露糖、糖基化780（260殼粒）三聚體、插入內質網膜、中和抗原、N端有兩個疏水區(qū)10NSP4(NS28)28-29非結構蛋白無裂解信號序列、高甘露糖、糖基化插入內質網膜、N端有三個疏水區(qū)、病毒顆粒裝配中起作用11NSP5(NS26)26非結構蛋白磷酸化O-連接糖基化微堿性、富含絲氨酸和蘇氨酸、結合RNA當前第48頁\共有270頁\編于星期三\0點

Vp4--第四條dsRNA編碼，組成外衣殼蛋白，非糖基化。其主要功能有：

①有凝集素活性；

②與寄主細胞受體結合；

③可裂解為分子量分別為60KDa的Vp5和28KDa的Vp8，強化病毒的侵染力；

④可誘導體內中和抗體；

⑤在小鼠和小豬體內，Vp4是病毒毒力的決定簇。動物輪狀病毒的Vp4有776個氨基酸組成，而人類的為775個。建立了依賴Vp4的病毒血清型（P血清型），其型特異性位點位于第84-180位氨基酸之間。當前第49頁\共有270頁\編于星期三\0點

Vp6—主要結構蛋白之一，組成中衣殼，占病毒顆粒的51%，由第六條dsRNA編碼?？赏瑫r與外衣殼的Vp7、Vp4和內衣殼的Vp2相互作用，因此，對維持顆粒形態(tài)起重要作用。Vp6為三聚體，非常穩(wěn)定，且大多數的輪狀病毒株系的Vp6有保守的抗原決定簇，是檢測的主要靶抗原。Vp6與病毒內依賴RNA的聚合酶活性相關，但本身并不具備酶活性，除去Vp6則聚合酶失活。Vp6為疏水蛋白，有高度的免疫原性，但并不知道它是否象Vp4那樣可誘導體內的保護免疫反應。Vp6含有一個共同的（交叉反應性的）表位，稱為組抗原（A-G），定位于第48-75位氨基酸之間。當前第50頁\共有270頁\編于星期三\0點

Vp7—外衣殼的主要構成蛋白，占病毒顆粒的30%，富含N-連接甘露寡糖的糖蛋白，由第九條dsRNA編碼。Vp7有326個氨基酸，N端有可裂解的信號序列。正是這個信號序列引導Vp7插入細胞內質網膜。裂解點在N端第51位的Gln(谷氨酸)。插入內質網膜靠兩個疏水序列，分別位于51-61和61-110的氨基酸。Vp7一旦插入內質網膜，既被保護不受內切酶降解，Vp7(glycoprotein)也是重要的中和作用抗原，并依此決定病毒的血清型（G1-G14血清型）。當前第51頁\共有270頁\編于星期三\0點

NSP4—成熟的、帶寡糖的糖基化的NSP4分子量為28KDa，N-連接甘露寡糖，第十條dsRNA編碼。在N端有三個疏水功能域，可以穿過內質網膜，N端保留在膜內，而親水的C端伸到細胞質中，是與亞病毒顆粒（Vp6）結合的受體，從而使亞病毒顆粒在裝配過程中能通過芽生進入內質網膜，NSP4的受體結合位點在161-175位氨基酸之間。NSP4蛋白是一個十分保守的蛋白，比較不同來源輪狀病毒毒株的NSP4，發(fā)現它們的同源性在87.3%-96.6%。當前第52頁\共有270頁\編于星期三\0點

二、病毒的復制有關輪狀病毒復制的研究主要在猴腎傳代細胞中進行，病毒的復制過程全部在包漿內進行。病毒通過與細胞表面特異的受體結合（可能存在兩種不同的受體），再以胞飲或直接的方式進入細胞，在溶酶體內完成外衣殼的降解，形成亞病毒顆粒，具有中層和內層，此時既開始轉錄。

當前第53頁\共有270頁\編于星期三\0點在細胞質液體中解開dsRNA很困難，而亞病毒顆粒內并非液體，dsRNA很容易解開，轉錄的mRNA通過雙層衣殼上的小孔進入細胞質。當前第54頁\共有270頁\編于星期三\0點

病毒轉錄子的合成是在一種病毒攜帶的依賴RNA的RNA多聚酶催化下進行，轉錄為非對稱，所有的轉錄子都是從負鏈脫下的全長正鏈RNA。該正鏈RNA一方面作為蛋白翻譯的模板，另一方面也是合成子代負鏈RNA的模板。負鏈RNA的合成也是在亞病毒顆粒中進行，細胞中沒有游離的病毒dsRNA存在。這些亞病毒顆粒在細胞內或無細胞系統(tǒng)中均是雙鏈RNA的合成產所，是由Vp1和Vp2、以及少量的Vp6、大量的非結構蛋白NSP3和較小量的NSP1和NSP2等蛋白質組成的復制酶的復合物。當前第55頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第56頁\共有270頁\編于星期三\0點

大部分的輪狀病毒蛋白是在游離的核糖體上合成，而Vp7

和Vp4是在內質網上的核糖體合成，合成后嵌入內質網膜。輪狀病毒形態(tài)發(fā)生過程中最顯著的特征是在細胞漿病毒質中裝配的亞病毒顆粒（含兩層衣殼）向內質網膜芽生，在成熟過程中，病毒顆粒獲得一過性的包膜。當病毒向內質網內部移動時，輪狀病毒失去這種一過性獲得的包膜，取而代之的是一層薄的蛋白層，這層蛋白層最后組裝成病毒顆粒的外衣殼，含Vp7

和Vp4。當前第57頁\共有270頁\編于星期三\0點三、對宿主防衛(wèi)的逃逸1、這種“躲在衣殼中復制”的方法幫組輪狀病毒逃避宿主細胞的干擾素防疫系統(tǒng)，為病毒的繁殖和傳播贏得時間。2、輪狀病毒復制快，“打了就跑”，在獲得性免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用前，大量病毒已通過糞便排除。3、輪狀病毒感染后通常不會對后續(xù)感染產生完全的免疫力，免疫系統(tǒng)僅僅對輪狀病毒“掃了一眼”。即便有記憶力，輪狀病毒可通過無癥狀患者糞便排除，擴大感染。當前第58頁\共有270頁\編于星期三\0點四、致病性與免疫性人類輪狀病毒感染常見于6個月～2歲的嬰幼兒，主要在冬季流行，一般通過糞-口途徑傳播。病毒侵犯小腸細胞的絨毛，潛伏期2～4天。病毒在胞漿內增殖，受損細胞可脫落至腸腔而釋放大量病毒，并隨糞便排出。病人最主要的癥狀是腹瀉，其原因可能是病毒增殖影響了細胞的搬運功能，妨礙鈉和葡萄糖的吸收，也可以是刺激了小腸內的腸道神經系統(tǒng)受體。嚴重時可導致脫水和電解質平衡紊亂，如不及時治療，可能危及生命。感染后血液中很快出現特異性lgM、lgG抗體，腸道局部出現分泌型lgA，可中和病毒，對同型病毒感染有作用。一般病例病程3～5天，可完全恢復。隱性感染產生特異性抗體。當前第59頁\共有270頁\編于星期三\0點

五、微生物學診斷傳統(tǒng)的方法是對腹瀉糞便液直接作電鏡或免疫電鏡檢查，但耗時較長，且由于設備上的限制，較難普遍應用。世界衛(wèi)生組織已將ELISA雙抗體夾心法（檢測病毒抗）列為診斷輪狀病毒感染的標準方法，目前國內外均有相應試劑盒出售。此外核酸電泳和核酸雜交已漸成常規(guī)技術，在診斷、鑒別診斷及分子流行病學研究中發(fā)揮重要作用。當前第60頁\共有270頁\編于星期三\0點

六、防治原則重視飲用水衛(wèi)生，并注意防止醫(yī)源性傳播，醫(yī)院內應嚴格做好嬰兒病區(qū)及產房的嬰兒室消毒工作。目前尚無特異有效治療藥物，主要是補液，維持機體電解質平衡。國外曾有報道輪狀病毒活疫苗可使兒童獲得保護，國內活疫苗正在研制之中。當前第61頁\共有270頁\編于星期三\0點第四節(jié)Ⅳ類病毒—冠狀病毒

冠狀病毒科（Coronaviridae）包括：冠狀病毒屬（Coronavirus）和環(huán)形病毒屬（Torovirus）。冠狀病毒屬依據其基因組和抗原性的特點，分為三組：第1組和第2組為哺乳動物的病毒，第3組為鳥的病毒。冠狀病毒科成員具有囊膜，大多數病毒的宿主范圍較窄，只能感染一種或幾種親緣關系較近的動物細胞，冠狀病毒的宿主范圍與病毒特異的細胞受體有關。當前第62頁\共有270頁\編于星期三\0點

SARS（SevereAcuteRespiratorySyndrome，SARS）又稱嚴重急性呼吸綜合癥，是一種新的威脅人類健康的呼吸系統(tǒng)烈性傳染病，2002年11月在中國廣東發(fā)現首例SARS病人，此后疫情蔓延30多個國家和地區(qū)，有8000多人感染，800多人死亡，引起全球關注。世界衛(wèi)生組織(WHO)確認引起該病的是嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus，SARSCoV，SCoV)，冠狀病毒屬的一個新成員，是第一個可以引起人類嚴重疾病的冠狀病毒。當前第63頁\共有270頁\編于星期三\0點一、生物學性狀

成熟的冠狀病毒顆粒直徑60-220nm不等，其形態(tài)學上最顯著的特征是病毒被膜處有明顯的棒狀膜外粒子，酷似中世紀歐洲帝王的王冠。病毒粒子中不包含RNA聚合酶，但存在少量蛋白激酶，這種蛋白激酶究竟是由病毒還是宿主編碼，目前尚不清楚。當前第64頁\共有270頁\編于星期三\0點

病毒有囊膜，膜上有三種結構糖蛋白：刺突蛋白S（spikeglycoprotein）；膜蛋白M（membraneglyprotein）；小分子外膜蛋白E（smallenvelopeglycoprotein）。在部分病毒囊膜上還能找到血凝素酯酶HE（hemagglutininacetylesteraseglycoprotein）。

當前第65頁\共有270頁\編于星期三\0點

核酸為無節(jié)段（+）ssRNA，長約27～31kb，在所有的RNA病毒中，冠狀病毒的基因組最大。為多順反子結構，其基因組5’端有帽子結構，3’端有poly(A)尾，可以作為翻譯模板，具傳染性。緊接帽子結構之后是60-80個堿基的先導RNA序列和200-500個堿基的非編碼區(qū)。病毒基因組包含6-12個ORFs，在各個ORF之間有基因重疊區(qū)或基因間隔序列(intergenicsequence)。

冠狀病毒的復制酶（依賴RNA的RNA聚合酶，解旋酶，蛋白酶）由基因組5’端的占2/3-3/4的兩個大閱讀框（ORF1a和1b）（即基因1）編碼。通過核糖體翻譯移框的機制，產生兩個多肽前體：pp1ab和pp1a。其它結構蛋白主要位于基因組3’端。當前第66頁\共有270頁\編于星期三\0點

在所有冠狀病毒基因組中，聚合酶基因和3種結構蛋白基因的排列次序均相同，即5’-Pol-S-M-N-3’，其他非結構蛋白的排列次序依不同的冠狀病毒種類而有明顯的差異。當前第67頁\共有270頁\編于星期三\0點

冠狀病毒轉錄的亞基因組mRNA間具有套式（nested）的結構特征和一段共同的3’端列。除最小的亞基因組mRNA外，其余mRNA均含有兩部分內容，即自身基因和3’下游其它蛋白基因，但僅翻譯自身蛋白基因。這些亞基因組mRNA的5’端均帶有一段來自于基因組5’最前端的保守引導序列，該引導序列對病毒基因的表達有很強的順式作用。在SARS-CoV中，每個基因之間均有一段轉錄調控序列（TRS）：5’-UCUAAAC-3’。通過該段序列與轉錄酶和細胞因子的相互作用，將一段72nt的基因組5’最前端的保守引導序列與每個ORF相連。當前第68頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第69頁\共有270頁\編于星期三\0點

結構蛋白中，S蛋白為伸出被膜外的棒球形糖蛋白，在病毒表面以三聚體形式存在。其主要功能為：

①結合細胞受體；

②觸發(fā)病毒被膜與細胞質膜或內吞體膜融合；

③可誘導細胞間的融合；

④誘發(fā)機體產生中和抗體。

當前第70頁\共有270頁\編于星期三\0點M蛋白主要負責病毒顆粒的組裝，功能為：

①決定病毒的形態(tài)發(fā)生；

②病毒裝配時選擇S蛋白；

③結合N（核衣殼磷蛋白）蛋白；

④病毒裝配時專一地選擇病毒基因組RNA。當前第71頁\共有270頁\編于星期三\0點

E蛋白也是病毒表面的一種糖蛋白，數量相對較少，它與M蛋白相互作用，決定病毒粒子的出芽位點。

HE僅存在與少數冠狀病毒表面，以二硫鍵連接的同源二聚體形式存在，可能與病毒引起的病理相關。

N蛋白（核衣殼磷蛋白）位于囊膜內，與RNA結合形成核衣殼，其功能為：

①包裹基因組RNA形成螺旋對稱的核衣殼；

②在裝配過程中結合M蛋白；

③病毒mRNA翻譯的增強子。當前第72頁\共有270頁\編于星期三\0點

三種非結構蛋白為病毒復制所必需：1、依賴RNA的RNA聚合酶（RDRP）功能為：

①轉錄病毒負鏈基因組RNA；②轉錄結構蛋白mRNA；③復制病毒基因組RNA。2、解旋酶打開RNA的雙螺旋。3、3CLpro蛋白酶負責上述兩種酶的加工成熟。當前第73頁\共有270頁\編于星期三\0點

SARS冠狀病毒基因組全長29.7kb，有14個開放閱讀框架，缺乏HE蛋白。其基因組的2/3區(qū)域編碼病毒復制相關酶（5’端），1/3區(qū)域依次編碼S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白等4個病毒結構蛋白（3’端），及包含5-9個在已有蛋白數據序列庫中找不到任何同源序列的未知蛋白的ORF。當前第74頁\共有270頁\編于星期三\0點

SARS-CoV比其他冠狀病毒更穩(wěn)定。在室溫下，可在糞便和尿液中穩(wěn)定存在1-2天，在腹瀉病人的大便中（pH較高）可存活4天以上。然而，56℃加熱90min或75℃加熱30min就能滅活SARS-CoV，應用含氯消毒劑和過氧乙酸，按衛(wèi)生部推薦的濃度，在幾分鐘內完全可以殺滅糞便和尿液中的SARS-CoV，紫外線也可以殺滅SARS-CoV。當前第75頁\共有270頁\編于星期三\0點二、病毒的復制

冠狀病毒的整個復制周期在寄主細胞質中進行。①入侵：首先病毒表面的S蛋白與寄主細胞表面專一的受體結合，然后通過兩種途徑進入細胞，一種是受體介導的內吞，另一種為病毒與寄主細胞的質膜融合。SARSCoV的受體有兩種，ACE2蛋白與血管緊張肽轉化酶（angiotensin-convertingenzyme，ACE）同源，為SARS冠狀病毒的受體。氨基肽酶N(aminopeptidaseN,APN)也是SARSCoV的受體之一。當前第76頁\共有270頁\編于星期三\0點②冠狀病毒成熟的顆粒中并不存在RNA病毒復制所必須的RNA聚合酶，因此，它進入寄主細胞以后，首先以病毒基因組RNA為模板，利用寄主細胞的蛋白質翻譯系統(tǒng)，表達病毒RNA聚合酶。然后利用該酶，完成負鏈基因組RNA的轉錄合成、各級結構蛋白mRNA的合成、以及病毒基因組RNA的復制。

③冠狀病毒各個結構蛋白的成熟mRNA的合成，不存在轉錄后的修飾剪切過程，而是直接通過RNA聚合酶和一些轉錄因子，以一種“不連續(xù)轉錄”（discontinuoustranscription）的機制，通過識別特定的轉錄調控序列（transcriptionregulatingsequences,TRS），有選擇性的從負義鏈RNA上，一次性轉錄得到構成一個成熟mRNA的全部組成部分。當前第77頁\共有270頁\編于星期三\0點

④冠狀病毒的顆粒組裝發(fā)生在內質網和高爾基體的區(qū)域。組裝時，N蛋白包裹基因組RNA形成螺旋型的核衣殼，然后M蛋白通過與N蛋白的結合并識別基因組上的包裝信號序列啟動病毒囊膜的組裝，E蛋白和S蛋白則通過與M蛋白的相互作用整合入病毒顆粒。在高爾基體內加工形成包內體樣結構，以胞吐方式釋放到細胞外，感染新的寄主。當前第78頁\共有270頁\編于星期三\0點

冠狀病毒的復制和成熟當前第79頁\共有270頁\編于星期三\0點三、SARS-CoV致病性與免疫性

SARS-CoV可感染多個組織器官，包括：肺、脾、腸道、氣管、淋巴結、腎等，特別是肺部，并造成損傷。引發(fā)肺部損傷機制為過強的自身免疫反應，大規(guī)模免疫細胞的激活，會破壞正常的細胞和組織。SARS患者出現發(fā)燒、咳嗽及快速進展的呼吸系統(tǒng)衰竭，同時伴隨寒顫、肌肉疼痛、淋巴細胞減少等癥狀，嚴重時，患者死亡。同時，患者體內產生SARS-CoV專一性的抗體，一般7天后出現IgM，10天達到高峰，15天左右下降；IgG在10天后產生，20天左右達到高峰。SARS-CoV的潛伏期平均為6.4天。SARS-CoV主要以近距離飛沫傳播為主，同時可通過手接觸呼吸道分泌物經口、鼻、眼傳播。也可能存在糞—口傳播等其它傳播途徑的可能性。該病毒對溫度很敏感，在33℃時生長良好，但35℃就使之受到抑制。由于這個特性，冬季和早春是該病毒疾病的流行季節(jié)。當前第80頁\共有270頁\編于星期三\0點四、微生物學診斷

目前SARS-CoV的診斷方法主要有4類：臨床表現及排除性診斷、影像學診斷、血清學抗體診斷和病毒學診斷。ELISA診斷中，主要應用針對SARS-CoV結構蛋白的特異性多抗或單抗，特別是針對S蛋白的特異性抗體，在發(fā)病早期進行診斷。通過電鏡觀察和RT-PCR技術也能對病毒進行鑒定。當前第81頁\共有270頁\編于星期三\0點五、防治原則病毒對熱敏感，紫外線、來蘇水及0.1%過氧乙酸等都可在短時間內將病毒殺死。目前，冠狀病毒的血清型和抗原變異性還不明確。冠狀病毒可以發(fā)生重復感染，表明其存在有多種血清型（至少有4種已知）并有抗原的變異，其免疫較困難，目前尚無特異的預防和治療藥物。可以通過非特異性預防措施（即預防春季呼吸道傳染疾病的措施，如保暖、洗手、通風、勿過度疲勞及勿接觸病人，少去人多的公共場所，及時隔離病人等）進行預防。當前第82頁\共有270頁\編于星期三\0點

六、細胞培養(yǎng)及動物模型病毒分離是診斷病毒感染的重要方法。可以通過細胞培養(yǎng)對來自SARS病例樣本(如呼吸道分泌物、血液或糞便)中的病毒進行分離。與其它冠狀病毒相比，SARS-CoV的分離相對容易。目前發(fā)現，SARS-CoV可在非洲綠猴腎傳代細胞(VeroE6)、人宮頸癌傳代細胞(Hela)、狗腎傳代細胞(MDCK)、腫瘤橫紋肌傳代細胞(RD)、人胚肺傳代細胞(2BS)、人胚腎傳代細胞(HEK293)等多種組織細胞中增殖并引起細胞病變，但以VeroE6細胞最為敏感。細胞培養(yǎng)陽性結果是人體內存在SARS-CoV的可靠證據，說明患者現在或最近受到SARS-CoV的感染。當前第83頁\共有270頁\編于星期三\0點

目前SARS的研究主要集中在致病機制、抗SARS疫苗和藥物的制備方面，這些研究的基礎有賴于SARS動物模型的發(fā)展，SARS動物模型應該符合以下標準：被SARS-CoV感染的動物表現出類似SARS患者的癥狀和體征;從實驗感染的動物體內可分離到病毒；動物體內存在針對病毒感染的特異的免疫反應；活檢和尸檢顯示出動物具有SARS患者一樣的病理特征。至今，SARS動物模型包括非人靈長類、雪貂、貓、鼠等，然而這些動物很少能夠模擬出可靠的SARS患者的呼吸癥狀。他們大多數只符合上述一部分條件。當前第84頁\共有270頁\編于星期三\0點七、SARS-CoV的疫苗研制1、正在研制的疫苗：⑴治療性疫苗（抗體）⑵滅活病毒疫苗⑶病毒樣顆粒（VLP）疫苗⑷核酸疫苗（基于S蛋白和N蛋白）⑸多表位疫苗2、存在問題：⑴RNA病毒多變對疫苗研發(fā)的挑戰(zhàn)⑵動物模型問題當前第85頁\共有270頁\編于星期三\0點⑶抗體依賴性感染增強（antibody-dependentenhancement,ADE）的問題一般來說，機體產生的病毒抗體或者對病毒有中和或抵抗作用，或者是一些無中和作用的抗體，但近年來相繼在人免疫缺陷病毒（HIV）、流感病毒（IV）、貓感染性腹膜炎病毒（FIPV）、登革病毒（DV）等病毒中發(fā)現了一種現象，這些病毒的抗體滴度在低水平或高水平時對病毒存在中和作用，而在中度水平或亞中和滴度水平時（稱為感染增強抗體）與病毒形成病毒-抗體復合物，能明顯增強Fc受體（FcR）或補體受體（CR）陽性細胞對該種病毒感染，從而引起疾病，這種現象稱為抗體依賴的病毒感染增強作用（ADE）。其中貓感染性腹膜炎病毒（FIPV）為貓冠狀病毒，推測SARS-CoV疫苗可能存在ADE現象，所以在未闡明SARS致病機制特別是SARS-CoV是否存在ADE作用的情況下，研究者應重視ADE現象。當前第86頁\共有270頁\編于星期三\0點八、SARS-CoV的來源

1、SARS-CoV的進化地位當前第87頁\共有270頁\編于星期三\0點可以看出，SARS病毒明顯不同于同其他三個冠狀病毒群，可能歸屬于新的冠狀病毒群。和其他人類及動物冠狀病毒相比，核酸序列相似性分數是，氨基酸序列的相似性分數是。但是，根據最新的國際病毒分類委員會（ICTV）第8次報告，SARS病毒仍歸屬于以牛冠狀病毒為代表的第二組。當前第88頁\共有270頁\編于星期三\0點

2、SARS-CoV的自然宿主

SARS病原是一個新型冠狀病毒，即SARS冠狀病毒(SARS-CoV)，來源于野生動物，經進化和變異實現跨種傳播，導致人類SARS的暴發(fā)和流行。因此，是一新型人獸共患病毒。是繼亨德拉病毒、尼帕病毒之后十年內人類出現的第三種以前從未認識的全新病毒。1994年，澳大利亞的賽馬發(fā)生亨德拉病毒感染，推測是由于馬采食了帶毒蝙蝠污染的牧草或是采食了蝙蝠吃剩的果實而感染發(fā)病。1998年馬來西亞爆發(fā)尼帕病毒，也估計是由于豬吃食了帶毒蝙蝠污染的果實，并通過豬傳染給人類。當前第89頁\共有270頁\編于星期三\0點

多個研究小組分別從基因檢測、血清學和核酸序列的系統(tǒng)進化分析等不同方面證實不同地域、不同的蝙蝠群落廣泛攜帶有SARS樣冠狀病毒。證實人源、果子貍源和蝙蝠源SARS-CoV共同屬于SARS族冠狀病毒，雖然尚未從蝙蝠分離獲得病毒并進行感染實驗證明其致病性，但是現有研究均表明蝙蝠極有可能是SARS冠狀病毒的自然宿主。當前第90頁\共有270頁\編于星期三\0點

3、關于SARS-CoV傳播的中間宿主SARS起源的“市場傳播來源”假設，推測果子貍可能是在市場或運輸過程中從真正的自然感染宿主、帶毒動物或污染的環(huán)境感染了SARS-CoV，SARS-CoV在果子貍體內繁殖放大后散播到外界環(huán)境或在與人密切接觸時將足夠量的病毒傳播到人，引起人的發(fā)病。果子貍在SARS-CoV的傳播中扮演了中間放大宿主的重要角色。當前第91頁\共有270頁\編于星期三\0點

4、SARS-CoV實現動物到人跨種傳播的分子進化基礎SARS病毒S蛋白與宿主細胞的功能受體ACE2(An-giotensin-convertingenzyme2)結合、進而與細胞膜融合進入細胞實現對宿主細胞的感染。分子進化分析顯示SARS-CoV從果子貍到人的傳播過程中，S基因始終經歷著強陽性選擇，并不斷提高對新宿主的適應能力。因此SARS病毒S蛋白發(fā)生進化和變異以適應新的宿主細胞是實現其跨種傳播以及人與人之間傳播的首要物質基礎。當前第92頁\共有270頁\編于星期三\0點迄今為止，雖然已證實蝙蝠是SARS-CoV的自然宿主和果子貍在SARS傳播中的中間宿主作用，但仍未發(fā)現蝙蝠傳播SARS-CoV的直接證據。SARS-CoV由蝙蝠到果子貍是直接傳播還是間接傳播，還需要進行動物實驗研究。另外，在SARS-CoV的起源和發(fā)生過程中是否存在果子貍以外的其它中間宿主動物尚待進一步研究。當前第93頁\共有270頁\編于星期三\0點九、非典后遺癥與國家賠償

據衛(wèi)生部公布的數據，中國共有5327人被感染上非典病毒。2003年，中央財政支出了13億多元的SARS防治基金，各地累計投人100億元。非典給中國造成了一次重大損失。其中有一個后果是，不少人雖然經過治療，但是出現了后遺癥。早在2003年10月，廣州、北京等地非典治愈者就發(fā)現患有非典后遺癥，典型的表現在生理上表現為股骨頭壞死，也有踝、膝等關節(jié)壞死。2005年5月，北京、香港SARS康復者陸續(xù)出現骨壞死后遺癥。當前第94頁\共有270頁\編于星期三\0點

2004年《南方周末》刊登了《關注:SARS六護士的苦難生存現狀》，其中提到了張麗娟、李敏、宋冰、張春陽、于立萍、劉波這六位長春醫(yī)護人員因后遺癥生存的心里和生理痛苦。對此，有些病人，尤其是為了治療SARS而得病甚至死亡的醫(yī)護人員提出了通過“國家賠償”加以彌補的措施。比如我國臺灣地區(qū)就有一例：

2003年間SARS肆虐，臺灣和平醫(yī)院醫(yī)師林重威為救治病患，感染SARS不治，他的父母訴請“國家賠償”。臺“最高法院”18日判決臺北市立聯合醫(yī)院應負賠償責任，應給付林重威的父母共748萬1621元(新臺幣，150萬人民幣)，并自2003年12月21日起至清償之日止，按年息5%計算遲延利息認定。本案是因SARS死亡獲“國賠”的首宗案例?！碑斍暗?5頁\共有270頁\編于星期三\0點當前第96頁\共有270頁\編于星期三\0點

中國工程院院士鐘南山是第一個提出在搶救SARS病人時采用皮質激素治療的權威專家，此治療方案成功救治了很多SARS病人。他們對38例使用皮質激素的SARS病人進行了回顧性調查，發(fā)現有效的比例達53%。而這38例如果當時不采用激素療法會全部死亡。其實目前學術界對到底是大劑量使用皮質激素造成骨壞死，還是SARS病毒造成骨壞死目前尚存在爭論。所以醫(yī)師使用激素造成骨壞死并沒有確定的依據，在這一點上，醫(yī)生不存在任何診療責任。當前第97頁\共有270頁\編于星期三\0點

皮質激素雖然具有肯定的解熱鎮(zhèn)痛療效，但它又有過多的嚴重不良反應：類皮質功能亢進；類固醇性糖尿??；肌萎縮和骨質疏松；誘發(fā)和加重感染；誘發(fā)和加重潰瘍；誘發(fā)精神癥狀；并發(fā)眼?。恢禄?；不恰當地停藥還可能出現皮質功能不足、激素停藥綜合證和癥狀反跳等弊病。當前第98頁\共有270頁\編于星期三\0點

對于一般患者進行激素療法，造成后遺癥，患者是無從根據提出任何賠償的，包括民事賠償。對于誤診病人？？？？對于受醫(yī)院指派而去救助SARS病人自己也被感染上而產生后遺癥的。那么可對其進行的措施有:

如果操作規(guī)程正確，那么屬于勞動工傷事故?？础豆ｋU條例》中有關工傷的認定，可知到這屬于工傷，依照法律可享受醫(yī)院工傷保險。當前第99頁\共有270頁\編于星期三\0點如果操作規(guī)程不正確，那么依照勞動法:

第七十三條勞動者在下列情形下，依法享受社會保險待遇：退休；患病、負傷；因工傷殘或者患職業(yè)??；失業(yè)；生育。勞動者死亡后，其遺屬依法享受遺屬津貼。勞動者享受社會保險待遇的條件和標準由法律、法規(guī)規(guī)定。勞動者享受的社會保險金必須按時足額支付。第五十六條勞動者在勞動過程中必須嚴格遵守安全操作規(guī)程。勞動者對用人單位管理人員違章指揮、強令冒險作業(yè)，有權拒絕執(zhí)行；對危害生命安全和身體健康的行為，有權提出批評、檢舉和控告。所以工傷賠償主要是工傷保險賠償。如果單位存在侵權行為，那么還可以用民事侵權法來處理。當前第100頁\共有270頁\編于星期三\0點

《北京市關于非典出院人員社區(qū)健康管理工作實施方案》

本市從2004年6月開始至2008年，用5年時間了解全市非典出院人員生存質量、社會功能和心理問題，初步掌握他們的社區(qū)衛(wèi)生服務需求，為他們提供連續(xù)性、個體化的醫(yī)療服務。具體工作將分兩個階段實施：第一階段，2004年6－7月，先行在西城區(qū)、海淀區(qū)開展試點；第二階段從2004年7月－2008年6月，在全市實施非典出院人員社區(qū)健康管理。今后每年6－7月，為全市非典出院人員進行社區(qū)健康狀況調查。

當前第101頁\共有270頁\編于星期三\0點感染原因：搶救華北第一例輸入性非典患者時感染，已是74歲高齡的他，是中國抗非第一線年齡最大的醫(yī)生；而后冒著生命危險用自己的身體進行血清治療SARS試驗，成功康復?，F狀：無任何后遺癥?，F已退休在家。當前第102頁\共有270頁\編于星期三\0點

血清試驗成功，引起了海內外的關注。許多醫(yī)學專家都認為這是目前人類抗擊“非典”過程中的一個有效方法。可是，讓姜素椿遺憾的是，血清療法并沒有在國內推廣，“后來衛(wèi)生部開會，我第一個發(fā)言，毫不客氣‘怕什么呢？不就是輸血嗎？外科手術要不要輸血？艾滋病什么的可以查呀！’”最后得到多數與會討論專家的認可。不久，香港開始了這種治療試驗。2003年5月7日，香港媒體披露，香港中文大學醫(yī)學院推出血清療法，40例兩組對照，經過一個月臨床實踐，輸入血清的20例不僅實現了零死亡，病程還縮短一半。當前第103頁\共有270頁\編于星期三\0點第五節(jié)Ⅴ類病毒—流感病毒

流感病毒(influenzavirus)屬正黏病毒科(Orthomyxoviridae)，該科分為甲型流感病毒屬（InfluenzavirusA）、乙型流感病毒屬（InfluenzavirusB）、丙型流感病毒屬（InfluenzavirusC）、托高土病毒屬（Thogotovirus）和鮭傳貧病毒屬（Isavirus）等。正黏病毒科和副黏病毒科的病毒有許多相似的特征：均含有神經氨酸酶(NA)和血凝素（HA），可凝集某些動物的紅細胞，對消化道、呼吸道系統(tǒng)具有致病性等，對黏多糖和糖蛋白具有特殊的親和力，尤其是對細胞表面含唾液酸的受體有更強的親和力。當前第104頁\共有270頁\編于星期三\0點

按照病毒核蛋白(nucleocapsideprotein，NP)和基質蛋白(matrixprotein，M)的特征，流感病毒分為甲(A)、乙(B)和丙(C)型。1933年，Smith等人用雪貂分離出甲型流感病毒，確定了流感的病毒病因。隨后，Frances等人于1940年分離出乙型流感病毒。丙型流感病毒于1949年分離成功。

根據病毒顆粒表面血凝素(hemagglutinin，HA)和神經氨酸酶(neuraminidase，NA)蛋白抗原性的差別，甲型流感病毒又可進一步分為不同的亞型。迄今所發(fā)現甲型流感病毒有

15個

HA亞型(H1～H15)，9個

NA亞型(N1～N9)，乙、丙型未見亞型。當前第105頁\共有270頁\編于星期三\0點

世界衛(wèi)生組織(WHO)1980年規(guī)定的流感病毒命名規(guī)則為：型別／宿主名稱／分離地區(qū)／編號／分離年份(HA和NA亞型)，若宿主是人則可省略。

如

A／Beijing／353／89(H3NZ)，即甲型流感病毒，宿主是人，從北京分離，分離時間是1989年，編號

353，為

H3N2亞型。

又如A／Duck／Pennsylvania／10218／84(H5N2)，即甲型流感病毒，宿主是鴨，從美國賓西法尼亞州分離，分離時間是1984年，毒株編號為10218，H5N2亞型。當前第106頁\共有270頁\編于星期三\0點一、病毒的生物學特性

流感病毒為有囊膜、分節(jié)段的-ssRNA病毒，屬正黏病毒科。分甲型流感病毒屬（8段）、乙型流感病毒屬（8段）和丙型流感病毒屬（7段，缺少編碼神經氨酸酶的第6條鏈）。其中甲型流感病毒感染人、禽、馬、豬、海豹、鯨等；乙型流感病毒僅感染人；丙型流感病毒感染人與豬。以甲型的流行規(guī)模最大，乙型次之，丙型極少引起流行。當前第107頁\共有270頁\編于星期三\0點

流感病毒粒子為球形、橢圓形或絲狀。由雞胚或細胞傳代的病毒多為球形，直徑為80-120nm，從人或動物新分離的病毒形態(tài)變異較大，可見80-120nm直徑的絲狀形態(tài)。當前第108頁\共有270頁\編于星期三\0點流感病毒的電鏡照片當前第109頁\共有270頁\編于星期三\0點RNA片段無5’帽子結構和3’聚A尾結構，但均有一段保守序列。5’端有13個核苷酸各節(jié)段高度保守：-GGAACAAAGAUGAppp5’3’端有12個核苷酸各節(jié)段高度保守：3’HO-CCGUUUUCGUCC-這些序列具有啟動子活性。就A型流感病毒而言，8段vRNA共編碼10種病毒蛋白，即PA、PB1、PB2、NP、HA、NA、M1、M2、NS1、NS2。當前第110頁\共有270頁\編于星期三\0點12435678PB2PB1RNPRNAM2M1NAHA分節(jié)段的（-）SSRNAPA

RNA多聚酶核糖核蛋白（RNP）當前第111頁\共有270頁\編于星期三\0點病毒囊膜來自宿主細胞的雙層類脂膜，膜上鑲嵌著3種膜蛋白，分別為HA、NA和M1蛋白。丙型流感病毒只有HA和NA兩種膜蛋白。另外，A型流感病毒囊膜中還有少量離子通道蛋白，即M2。

當前第112頁\共有270頁\編于星期三\0點

內部的核衣殼呈螺旋絲狀，直徑大約為

10nm，長度在

50～60nm之間。核衣殼是由

NP和

RNA聚合酶復合體(PB1、PB2及

PA)與病毒的

8個

RNA片段結合而成。由于帶有自己的RNA聚合酶復合體，流感病毒可以有效