抗毒復(fù)明滴眼液對單皰病毒性角膜炎的實驗藥效學研究

抗毒復(fù)明滴眼液對單皰病毒性角膜炎的實驗藥效學研究【摘要】目的：觀察抗毒復(fù)明滴眼液對單純皰疹性角膜炎的治療效果。方法：將實驗性單純皰疹性角膜炎小鼠隨機分為抗毒復(fù)明滴眼液治療組、無環(huán)鳥苷對照組和溶劑對照組，對3組角膜病變進行觀察與比較。結(jié)果：抗毒復(fù)明滴眼液治療組角膜病變范圍較溶劑組明顯縮小。結(jié)論：抗毒復(fù)明滴眼液對實驗性單純皰疹性角膜炎有明顯的治療效果。

【關(guān)鍵詞】抗毒復(fù)明滴眼液；單純皰疹性角膜炎；實驗藥效學

AnExperimentalStudyonHerpesSimplexKerafitisVithKangdufumingEyeDrops

〔Abstract〕ObjectiveToobservethetherapeuticeffectsofKangdufumingeyedropsonexperimentalHSK.MethodsTheinfectedrabbitswithHSKweredividedrandomintothetreatedgroupwithKangdufumingeyedrops,controlgrouptreatedwithacyclovireyedropsandsolventgroup.Thepathologicchangesofthecorneawereobservedandcomparedbetween3groups.ResultsThecorneaulcerareasofthetreatmentgroupweresmallerthansolventgroup(P).ConclusionKangdufumingeyedropscouldbemarkedlyeffectintreatmentofexperimentalrabbitwithHSK.

〔KeyWords〕Kangdufumingeyedrops;Herpessimplexkeratitis;Experimentaleffectiveness

單純皰疹性角膜炎是一種常見的嚴重致盲性眼病，占角膜病致盲的首位[1-3]。該病由單純皰疹病毒感染所引起，可導(dǎo)致角膜溶解、新生血管形成及潰瘍穿孔等嚴重病理改變，是當今世界上危害最嚴重的感染性眼病之一，占角膜病致盲的%，近年來由于抗生素、皮質(zhì)類固醇及其他免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，其發(fā)病率有逐年上升趨勢[3-5]。由于HSK病情頑固，易于復(fù)發(fā)，嚴重影響視功能，已成為眼科臨床的棘手問題，因而受到學者們的重視和關(guān)注。本研究觀察了本病治療中藥科研制劑抗毒復(fù)明滴眼液對HSV-1SM44毒株感染誘導(dǎo)的單皰病毒性角膜炎病理模型的干預(yù)效果。

1材料與方法

實驗動物

選用鼠齡為4~6周Balb/c小鼠30只，體重16~18g，清潔級，雌雄各半。

藥物

①抗毒復(fù)明滴眼液為自制科研制劑：取大青葉、貫眾、虎仗、決明子等經(jīng)生藥鑒定后，清水洗凈，再用純凈水洗2次，然后用純凈水浸泡30min，煎煮2次，收集餾液；合并2次煎煮液過濾，餾液加入濾液，過濾，分裝于8mL的眼藥瓶中，相當于生藥材g/mL。100℃滅菌30min，置4℃儲存?zhèn)溆谩＂?無環(huán)鳥苷滴眼液由湖北黔江制藥廠生產(chǎn)。

HSK模型建立

病毒和細胞病毒HSV-1SM44毒株，使用前滴度為20×109pfu·L-1。生產(chǎn)和檢測病毒的細胞為非洲綠猴腎細胞。培養(yǎng)VERO細胞的營養(yǎng)液為含5%胎牛血清、青霉素、鏈霉素的DMEM。

角膜接種病毒的方法將小鼠用1%地卡因表面麻醉后置于顯微鏡下，用1號無菌針頭交叉劃傷雙眼角膜上皮層呈“#”字形，將5L含有100×103pfu病毒的DMEM滴于角膜表面，同時輕輕按摩小鼠眼瞼10s。

判斷病變程度

按文獻標準，稍加改動，作病變程度判斷標準：0級：無著色和混濁；1級：著色和混濁的范圍為原病變范圍1/4以內(nèi)；2級：著色和混濁的范圍為原病變范圍1/4~1/2；3級：著色和混濁的范圍為原病變范圍1/2~3/4；4級：著色和混濁的范圍為原病變范圍3/4以上或無變化。

實驗分組處理

將造模后的動物按病情輕重分層隨機分成3組，每組10只：第1組用注射用水滴眼；第2組用無環(huán)鳥苷滴眼液滴眼；第3組用抗毒復(fù)明滴眼液。均每天5次滴眼，每次1滴，連續(xù)15d。

各組分別于0、3、7、11、15d分別由專人進行小鼠角膜2%熒光素鈉染色，裂隙燈顯微鏡記錄角膜病變范圍。

統(tǒng)計學分析

使用SPSS統(tǒng)計軟件，計量資料進行方差分析和q檢驗，計數(shù)資料用Ridit分析。

2研究結(jié)果

用藥前各組角膜病變范圍比較

差異無顯著性，具有可比性，見表1。

各組小鼠角膜病變動態(tài)觀察比較

結(jié)果見表2。由表2可以看出溶劑對照組接種后第3天，角膜出現(xiàn)點狀、樹枝狀病灶，然后不斷擴大；第7~9天后出現(xiàn)密集的樹枝狀和地圖狀潰瘍，基質(zhì)層水腫、浸潤。第11~13天病變向深層發(fā)展，上皮潰瘍逐漸縮小，個別自愈?？苟緩?fù)明滴眼液治療組接種后第3天，角膜可見點狀、樹枝狀病變，范圍較局限；5~7d時病情較重，角膜出現(xiàn)基質(zhì)水腫、浸潤。但與溶劑對照組角膜病變范圍比較差異有顯著性；到13d大部分小鼠角膜病變已痊愈，表明抗毒復(fù)明滴眼液有明顯抑制或減輕實驗性單純皰疹性角膜炎病變的療效。無環(huán)鳥苷對照組抑制角膜上皮病變的療效與抗毒復(fù)明滴眼液治療組近似，在平均治療7d后角膜病變減輕，兩組治療有效時間相比差異無顯著性。

3討論

HSK是由單純皰疹病毒感染所致，其主要臨床表現(xiàn)為點狀角膜炎，病情靜止期，病毒沿神經(jīng)末梢軸索上行，以亞病毒形式潛伏于三叉神經(jīng)節(jié)細胞內(nèi)，在各種誘因的刺激下，病毒再度活化而引起復(fù)發(fā)感染，臨床上分別表現(xiàn)為點狀、樹枝狀、地圖狀、盤狀[1-5]。治療通常用無環(huán)鳥苷，局部或全身應(yīng)用免疫增強劑、干擾素、胸腺肽等。效果尚欠佳，且易復(fù)發(fā)。無環(huán)鳥苷可以競爭性地抑制HSV-I，對淺層性HSK和深層型HSK均有效，國內(nèi)外眼科科界認為它是一種較安全、首選的治療HSK的藥物[5，7，8]。但無環(huán)鳥苷目前尚存在一些缺陷：口服只有15%~30%生物利用度；局部應(yīng)用可引起濾泡性結(jié)膜炎、淺點狀角膜炎、假樹枝狀角膜炎等等，還偶見有引起急性腎功能衰竭和神經(jīng)毒性報道；對無環(huán)鳥苷耐藥的毒株出現(xiàn)增多，對此目前也只能加強耐藥性的監(jiān)測，還沒有針對的辦法[9-11]。

單純皰疹病毒性角膜炎屬中醫(yī)眼科黑睛生翳范疇，臨床表現(xiàn)類似于“聚星障”。近年來，中西醫(yī)結(jié)合防治HSK已經(jīng)積累不少寶貴的經(jīng)驗，在辨證、選方、制劑以及對HSK復(fù)發(fā)的認識和治療上，有了長足的發(fā)展。但分析現(xiàn)狀，亦存在不足，如選方繁多，用藥不一，“各承家技”；中藥滴眼液生產(chǎn)、推廣有待加強；中藥抗復(fù)發(fā)機制有待進一步研究等[6，12，13]。

中醫(yī)認為黑晴直接與外界接觸，易感六淫之邪。其中以風熱多見[12]?！蹲C治準繩·雜病·七竅門》曰：“翳膜者，風熱重則有之?！薄对瓩C啟微·風熱不制之病》：“因熱而召，是為外來；久熱不散，感而自生，是為內(nèi)發(fā)?！眱?nèi)外致病因素所致黑晴病變是相似的。五輪學說認為黑晴屬風輪，內(nèi)應(yīng)肝膽，所以本病的發(fā)生與肝膽功能失常有關(guān)。所以，黑晴易受風熱邪毒乘襲，內(nèi)應(yīng)與肝，常為肝火上炎所累。因此，其治療應(yīng)以疏風解毒、清肝明目為基本大法?？苟緩?fù)明方就是我們根據(jù)中西醫(yī)對本病病理生理的認識，基于疏風解毒、清肝明目的原則，結(jié)合臨床用藥經(jīng)驗，篩選而成的治療本病的中藥復(fù)方制劑。無環(huán)鳥苷是一種有較高選擇性的抗HSV-1的藥物，能阻斷HSV-1的DNA合成及抑制HSV-1復(fù)制，大量臨床試驗證明其療效確切。本實驗研究結(jié)果，抗毒復(fù)明方具有顯著的抗HSV-1作用，對實驗性單純皰疹性角膜炎有明顯的療效，但對其具體作用機理還有待于進一步研究。本研究同時表明：對HSK的治療，中醫(yī)藥確有獨到之處，中西醫(yī)結(jié)合取長補短、優(yōu)勢互補，有利于發(fā)揮中醫(yī)藥特色，進一步提高HSK的臨床療效。

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