基因工程的基本操作程序

1.2基因工程的基本操作程序當(dāng)前第1頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)復(fù)習(xí)1.什么是基因工程？2.基因工程的基本工具有哪些？3.基因工程的最大優(yōu)點(diǎn)？4.“分子手術(shù)刀”、“分子縫合針”和“分子運(yùn)輸車(chē)”分別指什么？5.質(zhì)粒的本質(zhì)、特點(diǎn)是什么？載體的種類(lèi)、必須具備的條件？當(dāng)前第2頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)1.目的基因的獲取2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.目的基因的檢測(cè)與鑒定基因工程的基本操作分四個(gè)步驟有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化才能確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)當(dāng)前第3頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)一、目的基因的獲?。ㄒ唬┠康幕虻母拍睿壕幋a蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因,也可以是一些具有調(diào)控作用的因子（二）獲取目的基因的常用方法有哪些?1.從基因文庫(kù)中獲取2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增3.人工合成當(dāng)前第4頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)1.從基因文庫(kù)中直接獲?。?）基因文庫(kù)的概念：（2）基因文庫(kù)的分類(lèi):種類(lèi)基因組文庫(kù)：含有一種生物的全部基因部分基因文庫(kù)：只包含了一種生物的部分基因，如：cDNA文庫(kù)（3）獲取目的基因的依據(jù)：當(dāng)前第5頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)某生物體內(nèi)全部DNA許多DNA片段受體菌群體（4）基因文庫(kù)的構(gòu)建方法限制酶與運(yùn)載體連接基因組文庫(kù)某種生物某個(gè)時(shí)期的mRNAcDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運(yùn)載體連接部分基因文庫(kù)（cDNA文庫(kù)）導(dǎo)入導(dǎo)入當(dāng)前第6頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)①基因組文庫(kù)的構(gòu)建通過(guò)對(duì)受體菌的培養(yǎng)而儲(chǔ)存基因當(dāng)前第7頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)②cDNA文庫(kù)的構(gòu)建-----反轉(zhuǎn)錄法：

以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA單鏈DNA反轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)當(dāng)前第8頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)①概念：PCR全稱(chēng)為_(kāi)______________，是一項(xiàng)在生物_____復(fù)制_____________的核酸合成技術(shù)。

③條件：_______________________________、_____________________、_______________、________________________________②原理：________________④方式：以_________方式擴(kuò)增，即____⑤結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的核苷酸序列（前提）四種脫氧核苷酸一對(duì)引物耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）指數(shù)2n使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因當(dāng)前第9頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)⑥過(guò)程：a.DNA變性(90℃-95℃):雙鏈DNA模板在熱作用下，_______斷裂，形成__________。b.退火(復(fù)性55℃-60℃):系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。

c.延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下，從引物處延伸，合成與模板互補(bǔ)的_________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈當(dāng)前第10頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)PCR技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點(diǎn)原理原料條件不同點(diǎn)解旋方式場(chǎng)所酶結(jié)果堿基互補(bǔ)配對(duì)四種脫氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化體外復(fù)制主要在細(xì)胞核熱穩(wěn)定的DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整個(gè)DNA分子當(dāng)前第11頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)目的基因的mRNA單鏈DNA(cDNA）雙鏈DNA(即目的基因)反轉(zhuǎn)錄合成1）反轉(zhuǎn)錄法：以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列目的基因推測(cè)推測(cè)化學(xué)合成2）根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法：3.人工合成目的基因當(dāng)前第12頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)

1.下列屬于獲取目的基因的方法的是①利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成②從基因組文庫(kù)中提?、蹚氖荏w細(xì)胞中提?、芾肞CR技術(shù)合成⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄形成⑥人工合成①

②

③⑤

B.①

②

⑤

⑥

C.①②③④

D.①②④⑥D(zhuǎn)當(dāng)前第13頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建——基因工程的核心1.目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。啟動(dòng)子插入基因表達(dá)載體復(fù)制原點(diǎn)抗生素基因終止子基因表達(dá)載體模式圖當(dāng)前第14頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)2.基因表達(dá)載體的組成(1)啟動(dòng)子(2)終止子(3)目的基因(4)標(biāo)記基因等它們各自的作用是什么?啟動(dòng)子插入基因表達(dá)載體復(fù)制原點(diǎn)抗生素基因終止子當(dāng)前第15頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)一原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子終止子能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì)編碼區(qū)：非編碼區(qū)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)②有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。包括啟動(dòng)子和終止子①不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，不能編碼蛋白質(zhì)。當(dāng)前第16頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游啟動(dòng)子終止子啟動(dòng)子:位于基因首端的一段能與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列。沒(méi)有啟動(dòng)子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。RNA聚合酶:能夠識(shí)別啟動(dòng)子上的結(jié)合位點(diǎn)并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì)。(以模板轉(zhuǎn)錄然后脫落)終止子:位于基因尾端的一段特殊的DNA片斷，它能阻礙RNA聚合酶的移動(dòng)，并使其從DNA模板鏈上脫離下來(lái)，使轉(zhuǎn)錄終止。當(dāng)前第17頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)：外顯子:能編碼蛋白質(zhì)的序列有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)等。編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子

外顯子啟動(dòng)子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游內(nèi)含子:不能編碼蛋白質(zhì)的序列知識(shí)點(diǎn)二真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)當(dāng)前第18頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)原核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)編碼區(qū)是_____的編碼區(qū)是間隔的、_____的相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的______和具有調(diào)控作用的______區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼當(dāng)前第19頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)②在細(xì)胞質(zhì)中將mRNA分離并加入反轉(zhuǎn)錄酶③合成第二條DNA鏈外顯子內(nèi)含子外顯子外顯子內(nèi)含子真核細(xì)胞的基因①在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄RNA②在核內(nèi)內(nèi)含子被切去，外顯子彼此連接③在細(xì)胞質(zhì)中將mRNA分離并加入反轉(zhuǎn)錄酶④合成第二條DNA鏈基因的cDNA不含內(nèi)含子mRNA原核細(xì)胞的基因①在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)錄當(dāng)前第20頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄。標(biāo)記基因：為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。啟動(dòng)子插入基因表達(dá)載體復(fù)制原點(diǎn)抗生素基因終止子當(dāng)前第21頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)質(zhì)粒DNA分子限制酶處理一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端二個(gè)切口獲得目的基因DNA重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種3.過(guò)程:連接酶當(dāng)前第22頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)①切割質(zhì)粒和目的基因的限制酶必須是同一種酶，以獲得相同的粘性末端，利于重組質(zhì)粒的構(gòu)建。②插入的目的基因只是結(jié)構(gòu)基因部分，其表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入部位前須有啟動(dòng)子，后須有終止子。注意：當(dāng)前第23頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)資料科學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)沒(méi)有表達(dá)。啟動(dòng)子插入基因表達(dá)載體復(fù)制原點(diǎn)抗生素基因終止子然后在插入抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入抗蟲(chóng)基因啟動(dòng)子，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還是沒(méi)有抗蟲(chóng)能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入抗蟲(chóng)基因終止子，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲(chóng)能力。

資料證明：載體構(gòu)建組成要完整當(dāng)前第24頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)①載體與表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu)②用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又用到DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵③啟動(dòng)子、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少④目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意當(dāng)前第25頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(一)轉(zhuǎn)化：(二)轉(zhuǎn)化方法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——感受態(tài)細(xì)胞目的基因進(jìn)入________內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持________和_______的過(guò)程受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)當(dāng)前第26頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：

易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力①農(nóng)桿菌特點(diǎn)：（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法當(dāng)前第27頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)種子植物裸子植物被子植物雙子葉植物單子葉植物:松、柏、杉…:花生、大豆、棉花…:水稻、小麥、玉米…雙子葉植物－網(wǎng)狀脈單子葉植物－平行脈當(dāng)前第28頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)②原理：Ti質(zhì)粒上的T---DNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。當(dāng)前第29頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)植物腫瘤當(dāng)前第30頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)當(dāng)前第31頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)③過(guò)程：④優(yōu)點(diǎn)：比較經(jīng)濟(jì)和有效Ti質(zhì)粒T-DNA攜帶外源基因的DNA構(gòu)建表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌含目的基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞植物細(xì)胞將目的基因插入染色體的DNA中表現(xiàn)出新性狀的植株農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖當(dāng)前第32頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)Hind限制性酶ⅢHindIIIHindIII目的DNATi質(zhì)粒蘇云金桿菌構(gòu)建表達(dá)載體Bt毒素蛋白基因

蘇云金桿菌T-DNA(可轉(zhuǎn)移-DNA)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過(guò)程：目的DNAamp黏性末端在質(zhì)粒的tet基因內(nèi)切開(kāi)目的DNA質(zhì)粒和外源DNA的HindⅢ限制性酶切示意圖DNA連接酶當(dāng)前第33頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)脫分化導(dǎo)入植物細(xì)胞通過(guò)組織培養(yǎng)產(chǎn)生新個(gè)體再分化移植個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定如蟲(chóng)吃后中毒死亡，則說(shuō)明攝入了抗蟲(chóng)基因并得到表達(dá)導(dǎo)入植物細(xì)胞組織培養(yǎng)農(nóng)桿菌當(dāng)前第34頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)（2）基因槍法：適合單子葉植物（3）花粉管通道法：如抗蟲(chóng)棉目的基因子房花粉管通道法當(dāng)前第35頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞①方法：顯微注射法②程序：目的基因表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩╋@微注射受精卵新性狀動(dòng)物當(dāng)前第36頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞①原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少②方法：用Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞吸收DNA分子感受態(tài)Ca2+處理法當(dāng)前第37頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)

若通過(guò)基因過(guò)程生產(chǎn)人的糖蛋白可以用大腸桿菌作為工程菌嗎？

不可以，糖蛋白上的糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體上加工完成，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體存在真核細(xì)胞中，大腸桿菌是原核生物，細(xì)胞中不含這兩種細(xì)胞器。以酵母菌作為工程菌可以嗎?可以，酵母菌為真核生物（真菌類(lèi)）當(dāng)前第38頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)四.目的基因的檢測(cè)與鑒定——檢查是否成功檢測(cè)—(分子水平)鑒定———（個(gè)體水平）①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法——方法——方法——DNA分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）抗原-抗體雜交當(dāng)前第39頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)（一）檢測(cè)1.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因(關(guān)鍵步驟)①首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA②用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記,以此做探針③使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯示出雜交帶,表明目的基因已插入染色體DNA中（1）方法:DNA分子雜交（2）過(guò)程:當(dāng)前第40頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)目的基因片段非目的基因片段目的基因片段放射性標(biāo)記基因探針基因探針目的基因的檢測(cè)示意圖當(dāng)前第41頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)DNA分子雜交示意圖采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。當(dāng)前第42頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)2.檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA①方法:分子雜交②過(guò)程:

用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA當(dāng)前第43頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)提取3.檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法——抗原-抗體雜交蘇云金桿菌Bt毒素蛋白將Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出血液分離出抗Bt毒素的抗體抗體蛋白質(zhì)(抗原)

出現(xiàn)雜交帶脫分化組織培養(yǎng)證明：提取蛋白質(zhì)與Bt毒素蛋白質(zhì)一樣當(dāng)前第44頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)例:用棉鈴飼喂棉鈴蟲(chóng)，如蟲(chóng)吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說(shuō)明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。如蟲(chóng)吃后中毒死亡，則說(shuō)明攝入了抗蟲(chóng)基因并得到表達(dá)。（二）鑒定——個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定抗蟲(chóng)、抗病接種實(shí)驗(yàn)，活性比較實(shí)驗(yàn)當(dāng)前第45頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)

不能，受體細(xì)胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說(shuō)明目的基因完成了表達(dá)。受體細(xì)胞攝入DNA分子后就說(shuō)明目的基因完成了表達(dá)嗎？若不能表達(dá)，要對(duì)抗蟲(chóng)基因再進(jìn)行修飾。當(dāng)前第46頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)歸納:基因工程的基本操作程序1.獲取目的基因從基因文庫(kù)利用PCR化學(xué)方法人工合成2.構(gòu)建基因表達(dá)載體目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法4.目的基因的檢測(cè)與鑒定檢測(cè)：分子水平；是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯鑒定：個(gè)體生物學(xué)水平當(dāng)前第47頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)1.有關(guān)基因工程的敘述正確的是A.限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用B.重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成C.質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體D.蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料D練習(xí)當(dāng)前第48頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)2.基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是A.人工合成目的基因B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C練習(xí)當(dāng)前第49頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)3.(2008理綜山東卷)為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開(kāi)發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。(1)獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性?xún)?nèi)切酶作用于圖中的

處，DNA連接酶作用于

處。（填“a”或“b”）aa當(dāng)前第50頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)(2)將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和________________________________________。(3)由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用______________技術(shù)，該技術(shù)的核心是__________和_______________?；驑尫ㄖ参锝M織培養(yǎng)（花粉管通道法）脫分化再分化當(dāng)前第51頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)(4)為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的_____________作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用______________________方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。耐鹽基因濃度鹽水澆灌一定當(dāng)前第52頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)

4.（2009年天津高考改編）為從根本上解決水稻中的高植酸問(wèn)題，可將植酸酶基因?qū)胨?，培育低植酸轉(zhuǎn)基因水稻品種。如圖是獲取植酸酶基因的流程。酵母菌DNAmRNAcDNAcDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)含目的基因的菌株目的基因Ⅰ含目的基因的菌株目的基因Ⅱ提取提取構(gòu)建篩選篩選構(gòu)建ABC分離分離當(dāng)前第53頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)

據(jù)圖回答：（1）圖中基因組文庫(kù)cDNA文庫(kù)。（2）B過(guò)程需要的酶是（3）目的基因和除可從構(gòu)建的文庫(kù)中分離外，還可以分別利用圖中和為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該過(guò)程中所用酶的顯著特點(diǎn)是（4）A、C過(guò)程中都是篩選獲取目的基因的過(guò)程，請(qǐng)說(shuō)出篩選的依據(jù)大于逆轉(zhuǎn)錄酶DNAcDNA耐高溫可依據(jù)基因的相關(guān)信息（基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物及基因的表達(dá)產(chǎn)物等）獲取目的基因。當(dāng)前第54頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)5.下列有關(guān)基因工程的敘述,正確的是(

)。A.載體上的標(biāo)記基因有利于促進(jìn)目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)B.用逆轉(zhuǎn)錄法合成胰島素基因時(shí)只能從胰島B細(xì)胞中提取相關(guān)的模板C.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后,引起受體細(xì)胞的變異屬于基因突變D.限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶是基因工程中兩類(lèi)常用的工具酶B當(dāng)前第55頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)6.利用生物工程的方法可以讓大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素。下面有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)。A.在進(jìn)行基因操作時(shí),將人工合成的人胰島素基因連接到質(zhì)粒上,再轉(zhuǎn)移到大腸桿菌中B.人胰島素基因能夠在大腸桿菌體內(nèi)得以表達(dá),是因?yàn)檫@兩類(lèi)生物具有完全相同的代謝方式C.能合成人胰島素的大腸桿菌從可遺傳變異的類(lèi)型上看屬于基因重組D.大腸桿菌制造的胰島素,需要進(jìn)一步的加工和提純才能使用B當(dāng)前第56頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)7.下列有關(guān)基因工程中運(yùn)載體的說(shuō)法中，正確的一項(xiàng)是（

）A.在進(jìn)行基因工程操作中，被用作運(yùn)載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)粒

B.所有的質(zhì)粒都可以作為基因工程中的運(yùn)載體

C.質(zhì)粒是一種獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的鏈狀DNA分子

D.作為載體的質(zhì)粒DNA分子上應(yīng)有對(duì)重組DNA進(jìn)行鑒定和選擇的標(biāo)記基因D當(dāng)前第57頁(yè)\共有69頁(yè)\編于星期三\2點(diǎn)8.科學(xué)家已經(jīng)將魚(yú)的抗凍蛋白基因成功的導(dǎo)入到番茄體內(nèi)，培育出具有很強(qiáng)耐寒能力的番茄。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：

⑴要獲得該抗凍蛋白基因，可采用

等方法。從魚(yú)的體內(nèi)切割該抗凍蛋白基因所用的是

，其特點(diǎn)是⑵某種細(xì)菌中的一種叫做EcoRI的限制