土壤中微生物的分離純化（微生物學(xué)與操作技術(shù)）

土壤中微生物的分離純化（細(xì)菌和霉菌的分離）微生物學(xué)及操作技術(shù)12目錄頁(yè)CONTENTSPAGE土壤樣品稀釋液的制備分離和純化3

培養(yǎng)4注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)器材1、樣品：土樣2、培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基3、其他：盛9ml無(wú)菌水的試管、盛90ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角瓶、無(wú)菌移液管、無(wú)菌培養(yǎng)皿、酒精燈、記號(hào)筆等1過(guò)渡頁(yè)TRANSITIONPAGE土壤樣品稀釋液的制備土壤中微生物的分離方法1、要有目的取樣2、根據(jù)該微生物營(yíng)養(yǎng)或培養(yǎng)特點(diǎn)配置特殊培養(yǎng)基3、在培養(yǎng)基中加入抑制劑，利于該微生物生長(zhǎng)，抑制其他微生物4、用各種稀釋的方法獲得單菌落，進(jìn)一步挑菌純化需要準(zhǔn)備以下：土樣生理鹽水培養(yǎng)基移液管無(wú)菌平皿實(shí)驗(yàn)步驟

（1）稱(chēng)取土樣10克，放入盛90ml無(wú)菌水三角瓶中，振蕩15~20分鐘，使微生物細(xì)胞分散，靜置約20~30秒，即生成10－1的土壤懸液1.土壤稀釋液的制備實(shí)驗(yàn)步驟1.土壤稀釋液的制備實(shí)驗(yàn)步驟

（2）另取裝有9ml無(wú)菌水的試管，編號(hào)為10－2、10－3、10－4、10－5及10－6，用無(wú)菌移液管吸取10－1土壤懸液1ml，加入編號(hào)10－2的無(wú)菌試管中，使之混合均勻，即生成10－2的土壤稀釋液。再用另一支移液管吸取10－2試管中的土壤稀釋液1ml，加入編號(hào)10－3的無(wú)菌試管中，輕輕搖動(dòng)，使之混合均勻，即生成10－3的土壤稀釋液。一定要每次更換一支無(wú)菌移液管（連續(xù)稀釋?zhuān)Ｍㄒ来蜗♂尦?0－4、10－5及10－6等一系列稀釋度菌懸液1.土壤稀釋液的制備實(shí)驗(yàn)步驟1.土壤稀釋液的制備實(shí)驗(yàn)步驟土壤稀釋液的制備2分離和純化稀釋混合平板法平板涂抹法平板劃線(xiàn)法實(shí)驗(yàn)步驟一、稀釋混合平板1.稀釋混合平板法2.平板涂抹法3.平板劃線(xiàn)法二、平板涂抹法三、平板劃線(xiàn)法土壤中微生物的分離方法1.稀釋混合平板法2.平板涂抹法3.平板劃線(xiàn)法土壤中微生物的分離方法1.稀釋混合平板法實(shí)驗(yàn)步驟1.稀釋混合平板法

將無(wú)菌培養(yǎng)皿編上稀釋濃度，用1ml無(wú)菌移液管按無(wú)菌操作要求吸取各個(gè)梯度稀釋液1ml，分別放入編號(hào)各稀釋度的2個(gè)培養(yǎng)皿中。同法制備固體培養(yǎng)基培養(yǎng)皿，然后在培養(yǎng)皿中分別倒入20ml已融化并且冷卻至45-500C左右的固體培養(yǎng)基，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作實(shí)驗(yàn)步驟

1.稀釋混合平板法（1）土壤稀釋液接種實(shí)驗(yàn)步驟1.稀釋混合法（1）土壤稀釋液接種實(shí)驗(yàn)步驟

1.稀釋混合平板法（2）混入培養(yǎng)基和稀釋液混勻土壤中微生物的分離方法1.稀釋混合平板法2.平板涂抹法3.平板劃線(xiàn)法2.平板涂抹法

此法與稀釋混合平板法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基融化，制成平板，然后用三支1ml無(wú)菌移液管分別由10－4、10－5、10－6三管土壤稀釋液中各吸取0.2ml對(duì)號(hào)放入已寫(xiě)好稀釋度的平板中，用無(wú)菌玻璃刮鏟在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，然后分別倒置于280C和370C溫箱中培養(yǎng)后，再挑取單個(gè)菌落，直至獲得純培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)步驟1.土壤稀釋液的制備2、平板制作3.培養(yǎng)與純化土壤中微生物的分離方法1.稀釋混合平板法2.平板涂抹法3.平板劃線(xiàn)法2.平板涂抹法

此法與稀釋混合平板法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基融化，制成平板，然后用三支1ml無(wú)菌移液管分別由10－4、10－5、10－6三管土壤稀釋液中各吸取0.2ml對(duì)號(hào)放入已寫(xiě)好稀釋度的平板中，用無(wú)菌玻璃刮鏟在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，然后分別倒置于280C和370C溫箱中培養(yǎng)后，再挑取單個(gè)菌落，直至獲得純培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)步驟示范

土壤中微生物的分離方法1.稀釋混合平板法2.平板涂抹法3.平板劃線(xiàn)法2.平板涂抹法土壤中微生物的分離方法1.稀釋混合平板法2.平板涂抹法3.平板劃線(xiàn)法3.平板劃線(xiàn)法要求：（1）線(xiàn)與線(xiàn)不相交（2）區(qū)與區(qū)只能有1~2條線(xiàn)相交（3）1區(qū)換到2區(qū)時(shí)，接種環(huán)一定要滅菌，其他區(qū)交換時(shí)可不滅菌（4）接種環(huán)與培養(yǎng)基夾角≤45o，盡量不劃破培養(yǎng)基（5）1區(qū)到2區(qū)之間滅菌后注意接種環(huán)的冷卻實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟3、培養(yǎng)與純化

待平板完全冷凝后

，將平板倒置于恒溫箱中培養(yǎng)，定時(shí)檢查分離結(jié)果。將培養(yǎng)后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落分別挑取進(jìn)行純化

，直至獲得純培養(yǎng)。

細(xì)菌培養(yǎng)溫度為：360C培養(yǎng)1-2d霉菌培養(yǎng)溫度為：280C培養(yǎng)3-5d實(shí)驗(yàn)步驟培