傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷

傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷傳染病實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)材料：病鴨、鑷子、剪刀、托盤(pán)、普通平板、麥康凱平板、血平皿、接種環(huán)、酒精燈、藥敏紙片、生化管、注射器、小白鼠二、實(shí)驗(yàn)方法：病理解剖觀察、病料接種培養(yǎng)、特殊平板培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、玻板凝集實(shí)驗(yàn)（演示）三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟:病理解剖觀察：觀察鴨子的天然孔道，是否有異常黏液分泌2、打開(kāi)病鴨腹腔，采用“三刀法”打開(kāi)腹腔（兩只鴨腿與腹部交接的地方各剪一刀，腹部中間再剪一刀）。同時(shí)注意觀察皮下及胸、腿部肌肉有無(wú)異常（如出血、皮下水腫等）。3、檢查皮下及肌肉：觀察皮下與肌肉是否有出血壞死，皮下是否有滲出物等。4、檢查體腔與內(nèi)臟：注意體腔內(nèi)、氣囊是否有異物，是否增厚、有綠斑、出血等現(xiàn)象，內(nèi)臟器官的體積、顏色、性質(zhì)是否異常。（1）呼吸系統(tǒng)：主要檢查鼻腔內(nèi)是否有異常分泌物；氣管是否有出血環(huán)，有異常黏液分泌；肺臟顏色形狀是否正常，是否有出血壞死腫大等現(xiàn)象。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第1頁(yè)。（2）消化系統(tǒng)：口腔是否有黏液；食道是否有出血，壞死灶潰瘍；肌胃腺胃是否出血有壞死灶，乳頭是否腫脹；腸道是否有充血出血壞死灶；肝臟是否發(fā)壞生變性，腫大，有無(wú)出血點(diǎn)，出血斑，壞死等異常；胰臟是否有出血，壞死。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第1頁(yè)。（3）泌尿系統(tǒng)：主要檢查腎臟，是否腫大，有出血壞死尿酸鹽沉積。（4）心血管系統(tǒng)：心臟的顏色，是否有心包積液；各處血管是否有充血現(xiàn)象。（5）淋巴系統(tǒng)：檢查胸腺、法氏囊是否腫大出血；腸道淋巴結(jié)及盲腸扁桃體是否異常。（6）神經(jīng)系統(tǒng)：檢查顱腔腦是否腫大，積液，腦膜有無(wú)異常；神經(jīng)粗細(xì)顏色。病料接種培養(yǎng)1、選取病變明顯典型的部位接種，大鴨子選取腦、肝、脾、肺接種，小鴨子選取接種，并將血平皿劃分成相應(yīng)的幾部分做好標(biāo)記。2、將接種環(huán)酒精燈滅菌，蘸取相應(yīng)部位，使用“Z”形劃線接種法劃線接種。每蘸取一個(gè)部位后都要進(jìn)行酒精燈燃燒滅菌，接種時(shí)應(yīng)在酒精燈周?chē)M(jìn)行。3、將接種好的血平皿放置在37℃恒溫下培養(yǎng)24小時(shí)后取出觀察菌落生長(zhǎng)情況。（三）特殊平板培養(yǎng)傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第2頁(yè)。1、選取病變明顯典型的部位接種，大鴨子選取腦、肝、脾、肺接種，小鴨子選取接種，并將麥康凱平板劃分成相應(yīng)的幾部分做好標(biāo)記。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第2頁(yè)。2、將接種環(huán)酒精燈滅菌，蘸取相應(yīng)部位，使用“Z”形劃線接種法劃線接種。3、將接種好的麥康凱平板放置在37℃恒溫下培養(yǎng)24小時(shí)后取出觀察其生長(zhǎng)情況。（四）生化實(shí)驗(yàn)1、選?。ǘ?3中培養(yǎng)好的細(xì)菌，大鴨子選取接種的細(xì)菌，小鴨子選取兩種不同菌落形態(tài)的細(xì)菌。2、將接種環(huán)滅菌蘸取相應(yīng)細(xì)菌至生化管，37℃恒溫，24小時(shí)后拿出觀察。（五）藥敏試驗(yàn)1取適量培養(yǎng)的細(xì)菌與一定生理鹽水混合均勻，用棉簽蘸取后涂布于普通平板上；2待平板上的菌液晾干后，將帶有卡那霉素、氨芐西林、氟苯尼考、頭孢曲松、多西霉素、恩諾沙星、磺胺甲基異惡唑的藥敏紙片貼于平板上；3將貼好藥敏紙片的平板放于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。（六）動(dòng)物試驗(yàn)1、在EP管中加入適量的生理鹽水，選取（二）.3中培養(yǎng)好的細(xì)菌，大鴨子選取接種的細(xì)菌，小鴨子選取兩種不同菌落形態(tài)的細(xì)菌，用滅菌后的接種環(huán)分別蘸取至EP管中，混勻制成菌液。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第3頁(yè)。2、分別用一次性注射器將三種菌液分別注入三只小鼠體內(nèi)（皮下注射，注射時(shí)要緩慢推進(jìn)以防局部積液），并將小鼠做好標(biāo)記。24小時(shí)后觀察小鼠病理特征。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第3頁(yè)。（七）玻板凝集實(shí)驗(yàn)（演示實(shí)驗(yàn)）1、分別編號(hào)1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)。再分別往1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)玻片中加入40ul抗原,40ul抗原,40ul生理鹽水。其中3號(hào)作為對(duì)照。2、分別往1號(hào)，2號(hào)加入10ul血清,5ul血清,3號(hào)不加血清。一段時(shí)間后觀察現(xiàn)象。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果病理解剖觀察1、大鴨子：呼吸系統(tǒng)：氣管出血；肺臟有出血點(diǎn)。消化系統(tǒng):食道充血；胃漿膜面出血；，腸道表面充血出血，腸系膜出血；肝臟腫脹，質(zhì)脆易碎，表面斑駁有針尖大小的壞死灶；胰臟有透明樣壞死灶；氣囊廣泛出血。泌尿系統(tǒng):腎臟質(zhì)脆易碎，花斑腎。心血管系統(tǒng)：心包黃色積液，有出血點(diǎn)，心冠脂肪出血。淋巴系統(tǒng)：胸腺腫大；法氏囊有出血斑；脾臟腫大，呈大理石樣變。神經(jīng)系統(tǒng)：腦充血，神經(jīng)無(wú)明顯癥狀。2、小鴨子：呼吸系統(tǒng)：氣管出血；肺臟出血；氣囊均有出血斑。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第4頁(yè)。消化系統(tǒng):食道充血；腺胃肌胃出血；肝臟腫大，有針尖大小壞死灶，顏色布局不均勻，質(zhì)脆；腸道黏膜充血出血，腸系膜出血；泄殖腔出血，胰腺有針尖大小壞死灶，透明樣壞死。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第4頁(yè)。泌尿系統(tǒng):腎臟質(zhì)脆，花斑腎。心血管系統(tǒng)：心臟心包積液，心冠脂肪出血，心臟有出血點(diǎn)，充血嚴(yán)重。淋巴系統(tǒng)：胸腺腫大；脾臟腫大有壞死灶，成大理石樣；法氏囊有出血點(diǎn)。神經(jīng)系統(tǒng)：神經(jīng)無(wú)明顯癥狀。病料接種培養(yǎng)（血平皿培養(yǎng)）1、大鴨子平板：菌落均呈乳白色，光滑，圓形菌落，無(wú)溶血現(xiàn)象。2、小鴨子平板；有兩種形態(tài)菌落，一種呈光滑透明圓形菌落，一種呈光滑灰白菌落有溶血現(xiàn)象。（三）特殊平板培養(yǎng)麥康凱培養(yǎng)基培養(yǎng)：大鴨子接種菌生長(zhǎng)較好，呈紅色；小鴨子接種菌白色菌呈灰白色生長(zhǎng)。（四）生化實(shí)驗(yàn)傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第5頁(yè)。實(shí)驗(yàn)中接種的三套可疑菌落生化管為如下結(jié)果：傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第5頁(yè)。試劑/菌種甘露醇鼠李糖蔗糖半乳糖果糖葡萄糖大鴨○，+○，+○，+○，+○，+-小鴨（白色菌落）○，+○，+○，+○，+○，+-小鴨（透明菌落）○，+○，+○，+○，+○，+-注：+陽(yáng)性或產(chǎn)酸；○+產(chǎn)酸又產(chǎn)氣；-陰性或不發(fā)酵。大腸桿菌：能發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)菌種可迅速發(fā)酵乳糖和山梨醇，僅極少數(shù)遲發(fā)酵或不發(fā)酵；約半數(shù)菌株不分解蔗糖。沙門(mén)氏菌：發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣；不發(fā)酵乳糖、蔗糖鏈球菌：能發(fā)酵簡(jiǎn)單的糖類(lèi)，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。巴氏桿菌：可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；一般發(fā)酵乳糖、鼠李糖、水楊苷、肌醇、菊糖。（五）藥敏試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第6頁(yè)。（1）大鴨傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第6頁(yè)。抑菌圈直徑（mm）判定標(biāo)準(zhǔn)耐藥中介敏感卡那霉素24≤1314—17≥18氨芐西林15≤1314—16≥17氟苯尼考24≤1213—17≥18頭孢曲松27≤1920—22≥23多西環(huán)素21≤1213—15≥16恩諾沙星35≤1516—20≥21磺胺甲基異惡唑28≤1213—16≥17小鴨（白色菌落）抑菌圈直徑（mm）判定標(biāo)準(zhǔn)耐藥中介敏感卡那霉素13≤1314—17≥18氨芐西林7≤1314—16≥17氟苯尼考13≤1213—17≥18頭孢曲松15≤1920—22≥23多西環(huán)素11≤1213—15≥16恩諾沙星10≤1516—20≥21磺胺甲基異惡唑30≤1213—16≥17傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第7頁(yè)。小鴨（透明菌落）傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第7頁(yè)。抑菌圈直徑（mm）判定標(biāo)準(zhǔn)耐藥中介敏感卡那霉素7≤1314—17≥18氨芐西林7≤1314—16≥17氟苯尼考7≤1213—17≥18頭孢曲松7≤1920—22≥23多西環(huán)素7≤1213—15≥16恩諾沙星7≤1516—20≥21磺胺甲基異惡唑7≤1213—16≥17（六）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)解剖后病理特征：1、小鼠1號(hào)（接種大鴨子菌）：皮下出血，有膠凍樣物質(zhì)；心臟出血嚴(yán)重；肝臟出血腫大；腸粘膜出血；腎臟出血；肺臟出血；胃出血；脾臟腫大。2、小鼠2號(hào)（接種小鴨子無(wú)色菌）：打開(kāi)腹腔有惡臭味；皮下有膠凍樣物質(zhì)；心臟有出血充血；肝臟表面斑駁，有壞死灶；胃充血；腸道充血；肺臟充血出血；腎臟腫大。3、小鼠3號(hào)（接種小鴨子白色菌）：心臟出血；肺臟出血；肝臟腫大出血；胃出血；脾臟腫大；腸系膜出血；胰腺出血質(zhì)脆易碎；腎臟腫大出血。（七）玻板凝集實(shí)驗(yàn)（演示實(shí)驗(yàn)）1號(hào)凝集現(xiàn)象最明顯，2號(hào)凝集現(xiàn)象不明顯，3號(hào)無(wú)凝集現(xiàn)象。傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第8頁(yè)。結(jié)果與分析傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷全文共10頁(yè)，當(dāng)前為第8頁(yè)。大鴨子的分析：特征病理病變?yōu)楦闻K腫脹，質(zhì)脆易碎，表面斑駁有針尖大小的壞死灶；胰臟有透明樣壞死灶。心臟心包積液；肺臟出血；氣囊出血。其菌落在麥康凱上生長(zhǎng)為紅色生長(zhǎng)良好。其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)病理癥狀呈全身性敗血變化和皮下膠凍樣滲出。綜合生化與藥敏，初步懷疑為沙門(mén)氏菌與大腸桿菌的混合感染。沙門(mén)氏菌造成全身性敗血變化，大腸桿菌可能造成皮下腹腔膠凍樣滲出。2、小鴨子分離出兩種菌落。白色菌落在血平皿上有溶血現(xiàn)象，鏡檢形態(tài)為球狀，呈鏈狀排列。接種動(dòng)物病變呈全身性敗血，初步懷疑為鏈球菌。小鴨病理病變主要有全身性敗血變化，胰腺有針尖大小壞死灶，腎臟質(zhì)脆，花斑腎。心臟