細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作基本流程

細(xì)胞試驗(yàn)操作根本流程〔基于明確的細(xì)胞試驗(yàn)打算〕試驗(yàn)物品預(yù)備試驗(yàn)耗材預(yù)備操作預(yù)備：物品清洗、枯燥、打包滅菌、合理放置。試驗(yàn)試劑預(yù)備書(shū)面預(yù)備：明確列出訪用物品名稱、數(shù)量，報(bào)請(qǐng)教師批準(zhǔn)。有無(wú)滅菌需要提前配好；需要無(wú)菌配制的試劑在無(wú)菌操作要求下配制。試驗(yàn)預(yù)約操作預(yù)約：401室在預(yù)約本上登記；分析測(cè)試中心向屈教師交申請(qǐng)單后在預(yù)約本上登記。細(xì)胞凍存復(fù)蘇預(yù)約：每周定時(shí)開(kāi)放液氮罐，由負(fù)責(zé)同學(xué)在群里通知。細(xì)胞檢測(cè)預(yù)約：填寫申請(qǐng)單，向主管教師申請(qǐng)。細(xì)胞房環(huán)境檢查10-15分鐘。儀器設(shè)備：運(yùn)行是否正常，有無(wú)燈光閃耀報(bào)警或標(biāo)志警示，有無(wú)特別狀況。臺(tái)面：是否干凈無(wú)污垢，有無(wú)多余物品放置，必要物品是否放置齊備。清潔預(yù)備洗手：肥皂洗——510秒——70%酒精噴手大鑷子、酒精棉球瓶、打火機(jī)、移液器；左上方：；右上方：廢液缸試驗(yàn)操作根本操作：換液、傳代、凍存、接板、復(fù)蘇、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞觀看垃圾筐中試驗(yàn)善后清洗。不行回收試驗(yàn)廢物處理酸堿類廢液分類倒入廢液瓶存放，由學(xué)院通知處理無(wú)害廢液棄入水槽，大量流水沖洗固體垃圾放入垃圾袋，丟入垃圾桶按標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)展細(xì)胞凍存，以待后續(xù)使用。按試驗(yàn)廢物處理。需要告知負(fù)責(zé)同學(xué)或教師進(jìn)展修理。清潔值周和安全檢查要按要求進(jìn)展清潔并在值周表上登記及拍照。狀況需要準(zhǔn)時(shí)上報(bào)。留意事項(xiàng)：1、試驗(yàn)打算三原則：要做什么、為什么這么做、預(yù)備怎么做2、試驗(yàn)操作三原則：多看、多問(wèn)、多想3、突發(fā)大事處理：準(zhǔn)時(shí)向負(fù)責(zé)同學(xué)、教師匯報(bào)狀況細(xì)胞操作相關(guān)儀器設(shè)備使用恒溫枯燥箱使用留意事項(xiàng)留意事項(xiàng)留意事項(xiàng)(一)(一)枯燥箱恒溫枯燥時(shí)恒溫室下方的散熱板上，不能放置物品，以免烤壞物品或引起燃燒。(二)放入箱內(nèi)的物品不應(yīng)過(guò)多、過(guò)擠。(四)假設(shè)覺(jué)察枯燥箱箱門下方紅燈報(bào)警必需盡快切斷電源。二氧化碳培育箱使用箱門應(yīng)輕開(kāi)輕閉，避開(kāi)粗暴開(kāi)關(guān)。取出細(xì)胞時(shí)應(yīng)避開(kāi)箱門長(zhǎng)時(shí)間放開(kāi)，以免培育箱內(nèi)環(huán)境不穩(wěn)定，孵箱中的水盆應(yīng)定期〔2周左右〕更換無(wú)菌雙蒸水，并30分鐘。二氧化碳?xì)馄扛鼡Q先關(guān)閉總閥和分壓閥，更換后先開(kāi)總閥，再漸漸調(diào)整分壓閥，指針總閥在5分鐘左右，分壓閥指針在0.15左右。超凈臺(tái)使用使用超凈臺(tái)工作15分鐘前開(kāi)紫外燈進(jìn)展照耀滅菌，在進(jìn)入操作之前應(yīng)關(guān)掉紫外燈，10分鐘左右后進(jìn)入。超凈臺(tái)上力求簡(jiǎn)潔，以利于保持無(wú)菌狀態(tài)，每一步操作均應(yīng)用酒精擦拭，不宜對(duì)著超凈臺(tái)說(shuō)話。倒置相差顯微鏡使用3點(diǎn)：相差裝置的調(diào)換與安裝。卸下一般顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可以吸取紅色和藍(lán)色光，使波長(zhǎng)范圍小的單色光線進(jìn)展照明，并有吸熱作用，能使相差觀看獲得良好的效果。再?gòu)霓D(zhuǎn)換器上旋下一般物鏡，換上相差物鏡?！皁”準(zhǔn)標(biāo)示孔，使一般聚光器局部進(jìn)進(jìn)光路。先使用低倍相差物鏡，按一般顯微鏡操縱方法進(jìn)展對(duì)光和調(diào)焦。旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應(yīng)。合鈾調(diào)整。拔出目鏡，插進(jìn)合鈾看遠(yuǎn)鏡，一邊從看遠(yuǎn)鏡內(nèi)內(nèi)觀看，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動(dòng)看遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其下降，當(dāng)對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時(shí)可將看遠(yuǎn)鏡固定住。再升降集光器并調(diào)整其下的螺旋使亮環(huán)的大小與黑環(huán)全都，然后左右前后調(diào)整環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)整鈕，使兩環(huán)完全重合，如亮環(huán)比黑環(huán)小而位于內(nèi)側(cè)時(shí)，應(yīng)降低集光器使亮環(huán)放大；反之，則應(yīng)上升聚光器，使亮環(huán)縮小。如假設(shè)升到最高限度仍不能完全重合，則可能是載玻片過(guò)厚之故，應(yīng)更換。合抽調(diào)整完畢，抽出看遠(yuǎn)鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進(jìn)展觀看。在更換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進(jìn)展觀看。在更換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌和重合抽調(diào)整。使用油鏡時(shí)，集光器上透鏡外表與載玻片之間要同時(shí)加上香柏油。低速離心機(jī)使用將需要離心的樣品對(duì)稱放入離心機(jī)內(nèi)，關(guān)好蓋子，接上電源，調(diào)整轉(zhuǎn)速和運(yùn)轉(zhuǎn)0000后，翻開(kāi)蓋子，取出樣品。傳遞窗使用LED顯示燈，一只開(kāi)門按鈕和一只殺菌燈開(kāi)關(guān)。顯示燈為綠色時(shí)，為開(kāi)門指示燈，滅表示對(duì)面的門衛(wèi)開(kāi)狀態(tài)，制止此門翻開(kāi)，按開(kāi)門按鈕無(wú)法翻開(kāi)門。亮表示允許開(kāi)門，按開(kāi)門按鈕，門鎖翻開(kāi)，開(kāi)門傳遞物件。殺菌開(kāi)關(guān)可以掌握箱內(nèi)的殺菌燈的亮和滅。酸缸、酸筒使用酸缸分為內(nèi)缸和外缸，外缸里面放液體，內(nèi)缸里面放要清洗的器皿，浸泡完畢后，將內(nèi)缸向上提出，內(nèi)缸上面有很多的小孔，液體從內(nèi)缸體小孔流出，取出物品，蓋上蓋子。移液器使用一、標(biāo)準(zhǔn)操作適用的液體：水、緩沖液、稀釋的鹽溶液和酸堿溶液。按到第一檔，垂直進(jìn)入液面3-5毫米。體積削減。1s后，待剩余液體聚攏后，再按到其次檔將剩余液體全部壓出。二、黏稠或易揮發(fā)液體的移取在移取黏稠或易揮發(fā)的液體時(shí)，很簡(jiǎn)潔導(dǎo)致體積誤差較大。為了提高移液準(zhǔn)確性，建議實(shí)行以下方法：移液前先用液體預(yù)濕吸頭內(nèi)部，即反復(fù)吸打液體幾次使吸頭預(yù)濕，吸液或排出(如1000~1)，建議將吸頭預(yù)濕后再移取。局部液體殘留在吸頭內(nèi)。微量移液器使用使用方法同移液器的使用。3點(diǎn)：

細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用將計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液布滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間，靜置3min，留意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)算左側(cè)和上方的。然后依據(jù)公式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)/ml=四大格細(xì)胞總數(shù)/4*高壓滅菌鍋使用6點(diǎn)：首先將內(nèi)層滅菌筒取出，再向外層鍋內(nèi)參加適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。放回滅菌筒，并裝入待滅菌物品。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌筒的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊全都，勿使漏氣。用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)翻開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排解鍋內(nèi)的冷空氣。待當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，掌握熱源，維持壓力至所需時(shí)間。滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，壓力0時(shí)，翻開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，翻開(kāi)蓋子，取出滅菌物體。將取出的滅菌培育基放入37℃恒溫培育箱內(nèi)培育24小時(shí)，經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。酶標(biāo)儀使用冰箱使用冰箱中試劑藥品分類放置，關(guān)閉冰箱時(shí)檢查是否關(guān)好。液氮罐使用使用前，檢查容器內(nèi)部是否清潔枯燥，充液氮前要用少量液氮預(yù)冷。不能在容器蓋上放置物體和密封頸口，放進(jìn)或取出冷凍物品時(shí)，要盡量使罐口翻開(kāi)時(shí)間短，以削減液氮消耗，也不要把提桶完全提出來(lái)。嚴(yán)防沖擊和碰撞。嚴(yán)謹(jǐn)用硬物去除頸管內(nèi)的凍霜，以免損傷頸管。超低溫冰箱使用一般制冷溫度設(shè)置為-60度，過(guò)濾網(wǎng)每個(gè)月必需清洗一次。存取樣品時(shí)門開(kāi)得不要過(guò)大，存取時(shí)間盡量要短。留意常常要存取的樣品放在上面兩層，需要長(zhǎng)期保存不常常存取的樣品放在下面兩層，保證開(kāi)門時(shí)冷氣不過(guò)度損耗。定期除霜。細(xì)胞試驗(yàn)根本液體配制培育基配制PBS配制成安排比為：1%〔w/v〕