真菌學(xué)試驗報告

頁腳內(nèi)容爐頁腳內(nèi)容爐真菌學(xué)試驗報告一，試驗?zāi)康模骸私庹婢螒B(tài)的基木特征。2W把握絲狀真菌制片方法。7?夕把握內(nèi)生真菌的分別方法把握真菌的鑒定方法。G真菌廣泛分布于地球表而.從高山、湖泊到田野、森林，從海洋、高空到赤道、兩極，處處都有真菌。真菌雖然不在空氣中生長生殖，但它的泡子卻成群的漂移在天空，只要略微留意你會覺察人類原來生活在真菌的汪洋大海中。當(dāng)今世界，生物技術(shù)已邁入世界經(jīng)濟的支柱產(chǎn)業(yè)，真菌學(xué)在生物技術(shù)的大潮中得到了長足的進(jìn)展。真菌是原始的真核生物，具有廣泛的多樣性，真菌生長我生殖快速，在很短的時間內(nèi)就可以得到比動物和植物多得多的后代，能夠直接、快速地進(jìn)展遺傳性狀分別的分析。因此，真菌可以作為爭論根底生物學(xué)過程中的一個重要工具，真菌基因的多樣性以及真菌分子生物學(xué)的進(jìn)展，為生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)供給了一個寬闊的天地。真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的內(nèi)生真菌有可能產(chǎn)生與植物一樣或相像的抗菌無知或產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)可能參與了藥用植物的抗菌過程，木試驗通過植物病原真菌和升、爐細(xì)菌的抑制試驗覺察莖，根，花，種子或果實內(nèi)生真菌的代謝產(chǎn)物具有不同程度的抑菌力量，并且對彳+、爐有普片遍的抑菌作用。爭論和開發(fā)內(nèi)生真菌的查找的抗菌活性物質(zhì)具有廣泛的應(yīng)用前景。三,材料與方法：材料：在校園內(nèi)采集銀杏、喜樹、桂花樹樣品包括葉、莖、根、花、種子或果實。和2藥品與試劑：葡萄糖、蛋白月東、“歹％?歹勿、禺S0“?曲力，馬鈴薯、瓊脂。孟加拉紅，青霉素，鏈霉素，甲基藍(lán)，蛋白腺，酵母膏，蔗糖，磷酸鹽，葡萄糖，瓊脂條，無菌水等。消毒劑：右％的乙醇，07%升汞〔孕鄉(xiāng)％〕,次氯酸鈉溶液〔含活性氯力％〕,%%雙氧水。雙蒸水、瓊脂糖，加飽和酚、疏基乙醇0■處許必咖“，石英砂，加飽和酚，氯仿，異戊醇，無水乙醇，硼酸，冰醋酸，氯化鈉，鹽酸，氫氧化鈉，勿加，en亦培育基：3.1.3.!^鈴薯、葡萄糖瓊脂培育基馬鈴薯汁滋滋，葡萄糖％升瓊脂玄鄉(xiāng)〔注：取去皮馬鈴薯宓克，切成小塊，加水必毫升煮沸％分鐘，濾去馬鈴薯塊，將濾液補足至必毫升，加葡萄糖％克，瓊脂“克，溶化后分裝，3磅滅菌％分鐘察氏瓊脂培育基蔗糖％升 昇鄉(xiāng)，總/。鄉(xiāng)，“0.5和頭SO戶Q0.0?0“鄉(xiāng)，瓊脂鄉(xiāng)，蒸憎水滋滋，自然曲3.7.M夕沙氏培育基蛋白腺鄉(xiāng)，葡萄糖或麥芽糖“鄉(xiāng)，瓊脂70克，水100心制法：7將上述物質(zhì)稱好，放入水中煮沸溶解〔不必調(diào)砂即有5左右〕分中號試管〔約“毫升〕包扎，高壓tt5°C20分鐘。趁熱斜好，凝固備用。3.1.3.4馬丁氏培育基7%蛋白腺鄉(xiāng)，材廬5?SO/*/。鄉(xiāng)，7%孟加拉紅3.34瓊脂水視％Z,彫值自然。7145C〕土右未凝固時參加抗生素，混勻倒平板。四,方法：?和采樣方法：在校園內(nèi)找到銀杏、喜樹、桂花樹并用刀采集葉、莖、根、皮、種子。“.圧樣品前處理：分別取根、莖、葉、果實，用洗滌劑在自來水下洗凈。3秒AS/大小置于尢“固體培育基上。對于根、莖、葉、果實按以下程序進(jìn)展外表消毒：右％的酒精漂〔浸〕洗2無菌水沖洗“?6次一07%升汞不同的消毒時間〔2共設(shè)置7個梯度一無菌水沖洗““次一用滅菌濾紙吸干多余水分一無菌刀O0X%/大小。將果實的外種皮去掉，消毒之后將內(nèi)種皮去掉。滅菌時，瀝干的植物材料轉(zhuǎn)放到燒杯中，記好時間，倒入消毒溶液，不消毒徹底。在快到時間之前分鐘，開頭把消毒液傾入一備好的大燒杯內(nèi)，要毒液開頭，至倒入無菌水時為止。滅菌液要充分浸沒材料。寧可多用些滅菌液，切勿牽強在一個體積偏小的容器中使用很多材料滅菌。4.1.3內(nèi)生菌的分別方法：〔每一平皿培育5塊組織塊于刃巴恒溫培育，同時將上述消毒過程中最終一次沖洗組織塊后的無菌水滴在培育基上平行培育，用以檢測消毒是否徹底。觀看菌絲生長情況及污染狀況。am培育夕“天后準(zhǔn)時承受尖端菌絲挑取法，挑取形態(tài)不同的菌絲或菌落移種到穎Ez形態(tài)鑒定方法：4.242H培育基：查氏培育基、沙氏培育基和弋彳培育基。4.22將“°C保存菌種活化刃欠；421.3將活化菌種分別點種沖、沙氏、察氏平板，每重復(fù)aC恒溫培育箱培育7天；然后進(jìn)展菌落特征描述，取一個平行進(jìn)展制片〔膠帶子粘片法〕，觀看個體形態(tài)；另兩個平行連續(xù)培育至力天，取出；重復(fù)步驟“，作為最終描述結(jié)果；依據(jù)真菌分類鑒定手冊和相關(guān)資料分析確該菌的歸屬?！?22制片方法：一小段膠帶從菌落外表的中心向邊緣粘，％%乙醇固定，乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液染色，將粘有菌絲的一面對上，蓋上蓋玻片，于顯微鏡下觀看產(chǎn)泡構(gòu)造等特征。鑒定標(biāo)準(zhǔn)：觀看的要點：2“菌落宏觀形態(tài)：大?。阂跃涞闹睆健??*?〕表不。顏色：包括菌落外表和背而的顏色，及色素是否滲入培育基。菌落的質(zhì)地：氈狀、毯狀、絨毛狀、棉絮狀、粉粒狀、革質(zhì)狀、有無成束狀或繩狀的氣生菌絲。菌落的高度：扁平、凸起或隆起，及菌落中心局部狀況等。菌落邊緣：全緣、鋸齒狀、樹枝狀等。滲出物：菌落表而有無液滴及液滴的顏色等。425個體形態(tài)：菌絲的特征：表而性狀〔粗糙或光滑〕，寬度等分生泡子梗：分支狀況■■簡潔或簡單，輪生或單生等；長短；基部粗糙或光滑等。產(chǎn)泡構(gòu)造的形態(tài)特征：外形，大小，著生狀況〔位置，單生、互生或成輪生體〕分生泡子的形態(tài)：外形，大小，外表狀況，聚攏方式〔直鏈、斜鏈或聚集成頭〕分子生物學(xué)鑒定：培育方法：培育基成分與不加瓊脂的吟固體培育基成分一樣。將液體培養(yǎng)基以7羽必每瓶分裝至％02三角瓶中，用了層紗布封口。WC蒸汽滅菌2030I2g培育G7天。用兩層滅菌紗布過濾菌絲球，用無菌蒸憎水沖洗菌絲球S次，避開培育基中的糖類和蛋白對*提取的影響。％^下烘干菌絲，但是不要過于干燥，然后進(jìn)展*的提取。“，M2基因組羽的提取捉取采刖0*7^3*法°纟7^矽〔dncmcdc,I”/\烷基三乙基浪化鍍〕是一種去污劑，可溶解細(xì)胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽濃度到肯定程度時，從溶液中沉淀，通過離心可將刃診與核酸的復(fù)合物同蛋口質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開，然后將0%與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液，再加乙醇使核酸沉淀，刃蟲能溶解于乙醇。刃蟲法的好處是能很好地去掉糖類雜質(zhì)，提取前期可得到高含量的*。“.M2」用刃并法提取材料刃％的具體步驟如下:將切3%在分&水浴鍋中預(yù)熱，研缽用液氮預(yù)冷；取0預(yù)熱的提取液及矽“郵■銃基乙醇，混合均勻后把混合液轉(zhuǎn)入2弘必離心管700以//管；6500.5?心7.%。保溫期間要輕輕振搖幾次;4.M2.4冷卻至室溫后，參加等體積〔7002的飽和酚：氯仿：異5：7久心。萬Z1200&甘,1皿,依據(jù)雜質(zhì)的去除狀況重復(fù)步驟“、5數(shù)次，直至無雜質(zhì);4.327參加等體積氯仿：異戊醇〔％：〃抽提一次以去除飽和酚，離心室溫丿；432.S將上清液逐滴參加兩倍體積的?力C預(yù)冷無水乙醇，以沉SQ*SQ*FM。H*1020,可以過夜;右％乙醇洗滌兩次；<to>歹匕保溫箱中枯燥后溶于適量的店緩沖液中“t?備用。么“所用引物們 S5: 矽乂“鄉(xiāng)加族久0% 加妬嗨鄉(xiāng)S47“77“初？“““7體系：Qu公體系，包括:11108%G7S〔厶gcC77P%7P、^7P〕：0.2[i%

各200p%77?27勿分模板:““？條件：擴增條件預(yù)變性變性C預(yù)變性變性CC復(fù)性57°C延長72°C72C10MUI送測序公司。443測序方法:“““序例分析:送測序公司。五.結(jié)果及分析：結(jié)果：試驗分別到兩種真菌57 八爪金盤分別到菌種查氏正反照菌落宏觀形態(tài)：大?。壕涞闹睆巾撃_內(nèi)容爐顏色：包括菌落外表棕黑色背而灰色，色素滲入培育基。菌落表而的紋飾：如皺紋、整個菌落致密。菌落的質(zhì)地：氈狀菌落的高度：凸起或隆起。菌落邊緣：鋸齒狀。滲出物：菌落表而無液滴。5/?個體形態(tài)：菌絲的特征：表而粗糙。分生泡子梗：分支簡單，輪生。5/6分子生物學(xué)鑒定通過Reesgemeg%eermgsgigig斤丼幻只WE丼只只e共斤◎“幵纟?—egenggixng%megeg劣egeege劣geg只ee丼斤只艸◎幵斤q釦彳門xgq旳

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2p5*Vl-Unculturedrungusclonegene,partialtranscribedspacerlz5?8Sincemalcranacrll^ed3pacer2,coxtple匚esequencerii>o3caalRITAaeneandXCCES5I0MVER3ICNREWORDSSOURCEORGANISMREFZREKCEAUTHORS

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